目的研究胰頭癌患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)比例及其在手術(shù)前、后的變化趨勢(shì)。方法采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)胰頭癌患者及正常對(duì)照組外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量，同時(shí)監(jiān)測(cè)CD4+/CD8+比值，并進(jìn)行手術(shù)前、后的比較。結(jié)果胰頭癌患者術(shù)前外周血中CD4+CD25+和CD4+CD25high Treg所占比例較正常對(duì)照組高(Plt;0.05)，術(shù)后則出現(xiàn)不同程度下降，以術(shù)后第3天下降最明顯(Plt;0.01，Plt;0.05)； 胰頭癌患者術(shù)后CA199水平低于術(shù)前，以術(shù)后第14天下降明顯(Plt;0.05)。 CD4+CD25highTreg與CA199的變化趨勢(shì)大致相同。 胰頭癌患者術(shù)前CD4+/CD8+比值比正常對(duì)照組低(Plt;0.05)，手術(shù)后進(jìn)一步降低，于手術(shù)后第7天達(dá)最低(Plt;0.05)。結(jié)論胰十二指腸切除術(shù)可能有助于機(jī)體抗腫瘤免疫的恢復(fù)，胰頭癌患者圍手術(shù)期可作為免疫干預(yù)的重要窗口期，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可作為免疫干預(yù)的靶點(diǎn)。
目的 探討細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA4Ig）融合蛋白對(duì)同種異體肝臟移植免疫耐受的誘導(dǎo)作用及機(jī)理。方法 利用大型哺乳動(dòng)物獼猴作為研究對(duì)象，建立同種異體原位肝臟移植模型。同種異體原位肝臟移植對(duì)照組及CTLA4-Ig組各5只。觀察術(shù)后生存時(shí)間，檢測(cè)肝功能、IL-2、IL-10、排斥反應(yīng)的病理學(xué)分級(jí)和術(shù)后肝臟細(xì)胞凋亡指數(shù)。結(jié)果 對(duì)照組平均存活時(shí)間為6.57 d，CTLA4-Ig組平均存活時(shí)間為14.92 d (Plt;0.05)。肝功能變化: 對(duì)照組術(shù)后ALT明顯升高，Alb則明顯降低; CTLA4-Ig組ALT及Alb均維持于正常穩(wěn)定水平。細(xì)胞因子變化： 術(shù)后3 d起，對(duì)照組循環(huán)血中IL-2表達(dá)水平相對(duì)較高，而CTLA4-Ig組IL-10的表達(dá)水平較對(duì)照組高。移植物病理排斥反應(yīng)分級(jí): 在移植術(shù)后CTLA4-Ig組排斥反應(yīng)程度明顯比對(duì)照組輕。對(duì)照組術(shù)后3 d起肝臟細(xì)胞凋亡指數(shù)較CTLA4-Ig組明顯升高。結(jié)論 CTLA4-Ig融合蛋白可誘導(dǎo)移植后免疫耐受，延長(zhǎng)受體生存時(shí)間。細(xì)胞因子IL-2或者IL-10可作為監(jiān)測(cè)移植排斥反應(yīng)或者免疫耐受的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之一。
目的 總結(jié)胰腺移植免疫耐受的研究進(jìn)展。方法 分析近年來(lái)有關(guān)胰腺移植免疫耐受研究進(jìn)展的文獻(xiàn)報(bào)道。 結(jié)果 外周性耐受及中樞性耐受是誘導(dǎo)免疫耐受的主要方法，其中通過(guò)供體特異性骨髓細(xì)胞輸注誘導(dǎo)嵌合體形成是目前的研究熱點(diǎn)。結(jié)論 供體特異性骨髓細(xì)胞輸注聯(lián)合一種或多種外周性耐受方法有望誘導(dǎo)胰腺移植免疫耐受，但需進(jìn)行深入研究。
【摘要】目的 建立大鼠原位肝移植（ROLT）急性排斥反應(yīng)模型，探討細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞抗原4免疫球蛋白（CTLA4Ig）抗排斥反應(yīng)和誘導(dǎo)免疫耐受的作用。 方法 采用“二袖套管”法建立Wistar→SD大鼠配對(duì)組合的肝移植后排斥反應(yīng)模型，并于術(shù)后第2天腹腔內(nèi)一次性注射CTLA4Ig（75 μg/只大鼠），與未給藥的相同組合的排斥反應(yīng)模型鼠對(duì)照研究，觀察移植術(shù)后7 d 2組動(dòng)物的一般情況、肝功能變化、移植肝病理改變及血清TNFα水平的變化，同時(shí)觀察CTLA4Ig組動(dòng)物術(shù)后4個(gè)月時(shí)的上述情況，以了解CTLA4Ig抗排斥及誘導(dǎo)免疫耐受的作用。 結(jié)果 ①對(duì)照組動(dòng)物于肝移植術(shù)后6～14 d內(nèi)相繼死亡； 移植肝出現(xiàn)明顯的排斥反應(yīng)的病理改變征象。 ②CTLA4Ig組動(dòng)物于術(shù)后7 d及4個(gè)月均未見(jiàn)明顯的排斥反應(yīng)表現(xiàn)，移植肝無(wú)明顯的排斥反應(yīng)的病理改變征象，血清TNFα、ALT、AST、TBIL及DBIL水平均明顯低于對(duì)照組（P＜0.05），TP及Alb水平則明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。 結(jié)論 CTLA4Ig有抗排斥反應(yīng)及誘導(dǎo)免疫耐受功能的作用； 血清TNFα水平作為觀察ROLT后排斥反應(yīng)的指標(biāo)，可能有一定的參考價(jià)值。
目的探討T細(xì)胞疫苗誘導(dǎo)特異性免疫耐受與外周血T細(xì)胞凋亡的關(guān)系。方法制備針對(duì)Wistar大鼠的SD大鼠T細(xì)胞疫苗，然后用該疫苗免疫健康SD大鼠，每周1次, 連續(xù)3周，作為實(shí)驗(yàn)組（n=6）。對(duì)照組（n=6）用RPMI 1640培養(yǎng)液替代T細(xì)胞疫苗。以被免疫的SD大鼠的脾細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞，以Wistar大鼠的脾細(xì)胞作為刺激細(xì)胞(經(jīng)絲裂霉素處理)，于接種前和每次接種后第5天進(jìn)行單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（3HTDR摻入法）,測(cè)定其cpm值； 用流式細(xì)胞儀對(duì)外周血T細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組SD大鼠脾細(xì)胞免疫應(yīng)答能力于接種后受到顯著抑制，其cpm值較接種前顯著降低 (P＜0.01)； 對(duì)照組接種前后各時(shí)點(diǎn)比較，其差異無(wú)顯著性（Pgt;0.05）； 接種后相同時(shí)點(diǎn)的cpm值組間比較, 實(shí)驗(yàn)組顯著低于對(duì)照組(P＜0.01)； 與接種前比較，接種后實(shí)驗(yàn)組外周血T細(xì)胞凋亡率顯著增高(Plt;0.01)，且隨著疫苗接種次數(shù)的增加而升高，而對(duì)照組接種后各時(shí)點(diǎn)T細(xì)胞凋亡率與接種前比較差異無(wú)顯著性（Pgt;0.05）。結(jié)論T細(xì)胞疫苗可以誘導(dǎo)同種特異性免疫耐受，其機(jī)理可能是通過(guò)誘導(dǎo)外周血T細(xì)胞凋亡，清除抗原特異性反應(yīng)性T細(xì)胞克隆來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
目的 探討核因子κB 圈套寡核苷酸( NF-κB decoy ODN) 轉(zhuǎn)染對(duì)小鼠成熟樹(shù)突狀細(xì)胞( DCs) 生物學(xué)特性的影響。方法 體外誘導(dǎo)Balb/c 小鼠骨髓細(xì)胞生成未成熟DCs( imDCs) , 經(jīng)抗原 OVA 以及LPS孵育后成為OVA 沖擊的骨髓來(lái)源成熟DCs( mDCs) , 流式細(xì)胞儀檢測(cè)DCs 表面分子CD11c 以及MHC-Ⅱ的表達(dá)予以鑒定; 將NF-κB decoy ODN 體外轉(zhuǎn)染小鼠骨髓來(lái)源成熟DCs, 同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組( 轉(zhuǎn)染NF-κB“變異”O(jiān)DN) 以及未轉(zhuǎn)染組, EMSA 檢測(cè)轉(zhuǎn)染后NF-κB 的活性變化; 流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組DCs 表面共刺激分子( CD40、CD80、CD86) 的表達(dá); 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)觀察各組DCs 對(duì)OVA 致敏的T淋巴細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果 成功培養(yǎng)出骨髓來(lái)源成熟DCs; NF-κB decoy ODN 轉(zhuǎn)染DCs 的NF-κB活性明顯降低( P lt;0. 05) , DCs 表面CD40、CD80 共刺激分子的表達(dá)與陰性對(duì)照組、未轉(zhuǎn)染組比較無(wú)明顯改變( P gt; 0. 05) , 而CD86 的表達(dá)與其他各組比較明顯降低( P lt;0. 05) ; 在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中,NF-κB decoy ODN轉(zhuǎn)染DCs 對(duì)T細(xì)胞的增殖有抑制作用( P lt; 0.05) , 而陰性對(duì)照組與未轉(zhuǎn)染組的DCs具有強(qiáng)烈的激發(fā)T細(xì)胞增殖的能力( P lt; 0. 05) 。結(jié)論 NF-κB decoy ODN 轉(zhuǎn)染DCs 可能通過(guò)CD86 的表達(dá)降低顯著抑制抗原特異性T細(xì)胞活化, 該改良的DCs 有可能用于哮喘的免疫治療。
目的 研究犬臍血間充質(zhì)干細(xì)胞（cbMSC）心肌移植對(duì)梗死區(qū)CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞分布的影響。 方法 取犬臍帶血，密度梯度離心法分離出單個(gè)核細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)法擴(kuò)增間質(zhì)干細(xì)胞；采用隨機(jī)數(shù)字表法將成年雄性雜種犬36只分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支的方法建立急性心肌梗死動(dòng)物模型；實(shí)驗(yàn)組取第4代細(xì)胞用5-氮雜胞苷誘導(dǎo)72 h，LacZ報(bào)告基因標(biāo)記后經(jīng)冠狀動(dòng)脈移植入犬心臟的梗死區(qū)域，對(duì)照組注射等體積的IMDM培養(yǎng)液；采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)表達(dá)β-gal的移植細(xì)胞以及梗死區(qū)域CD4+T、CD8+T的分布，應(yīng)用Image-Proplus 5.1軟件進(jìn)行圖象分析。 結(jié)果 異體犬cbMSC移植心肌梗死區(qū)后可長(zhǎng)期存活；圖象分析顯示，實(shí)驗(yàn)組移植后第2、4、8周時(shí)，CD4+T的累積光密度值（IOD）為44.35±7.03,19.29±4.11和20.27±3.51,CD4+T與CD8+T的IOD比值為0.63±0.12,0.51±0.15和0.66±0.08；對(duì)照組CD4+T的IOD值為65.78±10.27,28.02±2.59和2979±6.83， CD4+T與CD8+T的IOD比值為1.28±0.20，1.34±0.09和1.50±0.16，兩組比較實(shí)驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組。檢測(cè)表明，實(shí)驗(yàn)組移植后第2、4、8周時(shí)CD8+T的IOD為69.88±7.84，37.80±8.83和30.81±7.42，高于對(duì)照組的51.28±10.01，20.87±4.50和19.91±2.87。 結(jié)論 初步的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，犬cbMSC的同種異體移植能產(chǎn)生免疫耐受，其機(jī)制可能與其抑制CD4+T，減少局部浸潤(rùn)的CD4+T數(shù)量，降低局部CD4+T/CD8+T比值有關(guān)。
目的 探討利用Toll樣受體關(guān)鍵蛋白轉(zhuǎn)錄水平抑制劑髓細(xì)胞樣分化標(biāo)記物(myeloid differentiation marker 88，MyD88) siRNA，制備半成熟樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）的表型和致耐受功能。 方法 取BALB/c小鼠骨髓接種、培養(yǎng)，加入濃度為10ng/ml 的重組小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（rmGM-CSF）誘導(dǎo)，培養(yǎng)至第8d將DC分為3組，空白對(duì)照組：于培養(yǎng)過(guò)程中不加其它任何物質(zhì)；LPS組：加入終濃度為1μg/ml 的LPS；實(shí)驗(yàn)組：加入MyD88 siRNA 4h后，再加入1μg/ml 的LPS。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)3組DC 的表型，用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)檢測(cè)培養(yǎng)上清的白細(xì)胞介素10（IL-10）、白細(xì)胞介素12（IL-12）的含量，初次和再次混合淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DC刺激T細(xì)胞增殖能力，并觀察術(shù)后鼠移植心存活時(shí)間。 結(jié)果 空白對(duì)照組DC表型為CD11c＋、CD25－、CD40 low、CD80low、CD86low和MHC-Ⅱlow未成熟表型DC,再經(jīng)LPS刺激后成為成熟表型DC；而實(shí)驗(yàn)組DC表型為CD11c＋、CD25－、CD40mid、CD80low、CD86low和MHC-Ⅱmid半成熟表型，其IL-10/IL-12比率明顯增高；可誘導(dǎo)同種異型T細(xì)胞無(wú)反應(yīng)性,并能延長(zhǎng)移植心存活時(shí)間。 結(jié)論 MyD88siRNA轉(zhuǎn)染結(jié)合LPS刺激可使未成熟DC進(jìn)一步分化為一種半成熟DC，較未成熟DC擁有更穩(wěn)定有效的致耐受特性。
目的觀察術(shù)前輸注用低劑量粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM—CSF）培養(yǎng)的小鼠骨髓源性未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）對(duì)小鼠同種異體移植心存活時(shí)間的影響。方法分別用常規(guī)劑量和低劑量GM-CSF培養(yǎng)小鼠骨髓源性成熟DC；和未成熟DC，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表型，比較其在體外刺激同種異體T細(xì)胞增殖的能力，并將培養(yǎng)的未成熟DC約1．0×106個(gè)于術(shù)前7d輸注受者體內(nèi)，觀察同種異體移植心存活的時(shí)間。結(jié)果與常規(guī)劑量GM-CSF下培養(yǎng)出的成熟DC不同，低劑量GM—CSF培養(yǎng)出的DC為較單純的未成熟DC，表型為CD11c＋，CD80-，CD86-，MHCⅡlow，在體外不能有效刺激同種異體T細(xì)胞活化增殖，將其于術(shù)前輸注受者體內(nèi)，移植心的存活時(shí)間由6．3±1．2d延長(zhǎng)至14．3±1．9d（P〈0．01）。結(jié)論用低劑量GM-CSF可培養(yǎng)出表型和功能均未成熟的小鼠骨髓源性DC，將其在術(shù)前7d輸注受者體內(nèi)，可明顯延長(zhǎng)移植心的存活時(shí)間。
目的 探討嵌合體在同種心臟移植免疫耐受中的作用?！》椒ā〔捎么笫蟾共啃呐K移植模型 ,將 30只L ewis大鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組 ( 組 )、排斥反應(yīng)組 ( 組 )、免疫耐受組 ( 組 ) ,每組 10只。觀察移植心存活時(shí)間 ,供心病理學(xué)改變 ,供、受者間的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng) (ML R)和脾、胸腺嵌合體?！〗Y(jié)果 組供心平均存活時(shí)間 (85 .2 8±7.4 8天 )較 組 (7.33± 1.0 3天 )顯著長(zhǎng) (Plt;0 .0 1) ; 組供心見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn) , 組供心僅見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn) ; 組供、受者間 ML R較 組顯著低 (Plt;0 .0 1) ; 組受者的脾、胸腺形成了穩(wěn)定的供者細(xì)胞嵌合體?！〗Y(jié)論 移植免疫耐受的受者形成了穩(wěn)定的中樞和外周嵌合體 ,嵌合體的形成對(duì)移植耐受起重要的作用。