華西醫(yī)學(xué)期刊出版社
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找到 作者 包含"卿泉" 1條結(jié)果
  • 大鼠骨骼肌脫細(xì)胞處理方法的優(yōu)化研究

    目的 探討SD 大鼠骨骼肌脫細(xì)胞的優(yōu)化處理方法。 方法 SD 大鼠16 只,雌雄不限,體重180 ~ 200 g。取其中10 只大鼠36 條骨骼肌肌束,隨機(jī)分為3 組,正常組(A 組,n=4):不作脫細(xì)胞處理;時間組(T 組)及濃度組(C 組)按照低滲- 去垢劑方法進(jìn)行脫細(xì)胞處理(n=16),其中T 組十二烷基磺酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS)濃度均為1.0%,根據(jù)處理時間不同(24、48、72、96 h),分為T1、T2、T3、T4 組(n=4);C 組處理時間均為48 h,根據(jù)SDS濃度不同(0.5%、1.0%、1.5%、2.0%)分為C1、C2、C3、C4 組(n=4)。取各組材料行HE 染色觀察及羥脯氨酸含量檢測,并根據(jù)結(jié)果篩選最優(yōu)脫細(xì)胞處理條件。另取6 只SD 大鼠14 條完整肌束,隨機(jī)取7 條按照最優(yōu)條件進(jìn)行脫細(xì)胞處理(實驗組),余7 條作為正常對照(對照組),對肌束行大體觀察、Masson 染色及生物力學(xué)檢測。 結(jié)果 HE 染色顯示T1、T2、C1、C2、C3 組肌纖維與A 組無差異;C4 組肌纖維部分脫除;T3 組肌纖維完全脫除且基膜結(jié)構(gòu)保留完整;T4 組肌纖維完全脫除但基膜結(jié)構(gòu)部分被破壞。羥脯氨酸含量檢測:A 組與C1、C2、C3、T1 及T2 組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P gt; 0.05);A 組與C4、T3 和T4 組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P lt; 0.05);C4 組與T3、T4 組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P lt; 0.05);T3 組和T4 組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P gt; 0.05)。根據(jù)HE 染色及羥脯氨酸含量檢測實驗結(jié)果篩選出最優(yōu)脫細(xì)胞處理條件為4℃、1.0% SDS、72 h。大體觀察:實驗組與對照組比較肌束顏色變淺,呈半透明狀,且結(jié)構(gòu)相對較松散。Masson 染色觀察:實驗組膠原纖維連續(xù)性良好,較對照組結(jié)構(gòu)疏松。生物力學(xué)測試:實驗組及對照組最大破壞載荷分別為(1.38 ± 0.35) N及(1.98 ± 0.77)N,最大拉伸位移分別為(3.19 ± 3.23)mm 及(3.56 ± 2.17)mm,兩組以上指標(biāo)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P gt; 0.05)。 結(jié)論 應(yīng)用1.0% SDS,于4℃條件下對大鼠骨骼肌經(jīng)震蕩處理72 h 可得到完全去除肌纖維且ECM 保留完好的脫細(xì)胞基質(zhì)。

    發(fā)表時間:2016-09-01 09:07 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
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