自體和非自體的生物血管不能滿足臨床血管外科的需要。使用理化方法或單純種植內(nèi)皮細(xì)胞的方法處理人工血管因腔內(nèi)血栓形成而效果小理想。為了增加人工血管的抗血栓活性，利用基因工程的方法對內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行改造，可使其獲得穩(wěn)定表達(dá)抗凝血因子的能力。用這種基因工程改造的內(nèi)皮細(xì)胞種植于人工血管，有可能獲得較理想的效果。而最終要獲得理想的血管移植物，尚有許多需要解決的問題。
目的 觀察小干擾RNA（small interference RNA, siRNA）對肝癌HepG2細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）表達(dá)的抑制作用。方法 將VEGF siRNA經(jīng)LipofectamineTM 2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染肝癌HepG2細(xì)胞后，實時熒光定量PCR和Western blot方法分別檢測VEGF mRNA和蛋白的表達(dá)，ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中VEGF蛋白濃度。 結(jié)果 細(xì)胞培養(yǎng)6 h后siRNA的轉(zhuǎn)染效率為（90.4±2.9）%，轉(zhuǎn)染后肝癌HepG2細(xì)胞中VEGF mRNA和蛋白的表達(dá)明顯減少，細(xì)胞培養(yǎng)上清液中VEGF蛋白表達(dá)下降。結(jié)論 運(yùn)用RNA干擾技術(shù)，可以有效地干擾肝癌HepG2細(xì)胞VEGF的表達(dá)并能降低VEGF的生成。
目的探討攜帶BMP-12基因的腺病毒載體轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)外周血MSCs向肌腱/韌帶細(xì)胞分化的效果。 方法取3～4月齡新西蘭兔外周血，體外分離培養(yǎng)外周血MSCs至第3代。采用AdEasy腺病毒載體系統(tǒng)制備BMP-12重組腺病毒載體。將BMP-12重組腺病毒體體外轉(zhuǎn)染第3代外周血MSCs，轉(zhuǎn)染后24 h通過流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測轉(zhuǎn)染效率，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，轉(zhuǎn)染后8、24 h在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）表達(dá)；轉(zhuǎn)染后0、7、14 d，采用免疫組織化學(xué)染色觀察I型膠原表達(dá)情況；實時定量PCR檢測肌腱/韌帶特異基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin mRNA表達(dá)水平，并設(shè)未轉(zhuǎn)染細(xì)胞作為對照組。 結(jié)果轉(zhuǎn)染后24 h，倒置相差顯微鏡觀察示細(xì)胞生長增殖緩慢，細(xì)胞形態(tài)清晰；FCM檢測示，轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染效率為99.57%，未轉(zhuǎn)染組為2.46%；轉(zhuǎn)染后8 h，熒光顯微鏡下即可見GFP表達(dá)，隨培養(yǎng)時間延長GFP表達(dá)逐漸增多，24 h時幾乎所有細(xì)胞均可見GFP表達(dá)。免疫組織化學(xué)染色示，隨轉(zhuǎn)染時間延長，Ⅰ型膠原表達(dá)逐漸增強(qiáng)；轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后14 d，肌腱/韌帶特異基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin mRNA表達(dá)水平分別為0.061±0.013、0.029±0.008、0.679±0.067，均顯著高于未轉(zhuǎn)染組的0.004±0.002、0.003±0.001、0.142±0.024，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=—7.700，P=0.031；t=—5.741，P=0.020；t=—12.998，P=0.000）。 結(jié)論BMP-12重組腺病毒載體可明顯促進(jìn)外周血MSCs向肌腱/韌帶成纖維細(xì)胞表型分化，并促進(jìn)肌腱/韌帶特異基因表達(dá)和細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生，為外周血MSCs用于肌腱/韌帶再生提供了依據(jù)。
目的 構(gòu)建并驗證一種與臨床散發(fā)性結(jié)直腸癌類似且同時表達(dá) KrasLSL-G12D/-和 Smad4loxp/loxp的雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型。 方法 將 Krastm4Tyj/J 小鼠與 Smad4tm2.1Cxd/J 小鼠轉(zhuǎn)換遺傳背景后進(jìn)行雜交建系，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)鑒定子代小鼠基因型，獲得基因型為 KrasLSL-G12D/-+Smad4loxp/loxp的雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型。通過向雙轉(zhuǎn)基因模型小鼠的腸黏膜下注射 LentivirusCre-IRES-Luciferase，在 IVIS 系統(tǒng)下觀察并統(tǒng)計雙轉(zhuǎn)基因模型小鼠的成瘤情況，對其瘤變組織進(jìn)行取樣并行蘇木精-伊紅染色法染色，以驗證雙轉(zhuǎn)基因模型小鼠的成瘤能力。 結(jié)果 經(jīng)培育篩選獲得了能夠同時表達(dá) KrasLSL-G12D/-和 Smad4loxp/loxp的雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型；通過構(gòu)建的病毒載體利用 Cre 重組酶成功感染并誘導(dǎo)小鼠腸上皮細(xì)胞突變而形成癌灶。 結(jié)論 本研究構(gòu)建的 KrasLSL-G12D/-+Smad4loxp/loxp雙轉(zhuǎn)基因模型小鼠的結(jié)腸上皮細(xì)胞能在 Cre 重組酶作用下誘導(dǎo)癌變，模擬了人類散發(fā)性結(jié)直腸癌的病理過程。
臨床上，骨折不愈合常導(dǎo)致患者遭受疼痛的困擾甚至殘疾，而且往往需要額外的手術(shù)治療來恢復(fù)骨骼肌肉功能，因此骨折不愈合的治療一直是骨科領(lǐng)域的難點(diǎn)。近些年，隨著基因工程的發(fā)展，利用基因治療骨折不愈合的技術(shù)得以廣泛研究。大量實驗證實，將編碼骨折愈合相關(guān)生長因子的目的基因通過體內(nèi)或體外不同的傳遞方式導(dǎo)入至靶細(xì)胞，從而表達(dá)出特定的生長因子，可以促進(jìn)骨折修復(fù)，這為治療骨折不愈合提供了新途徑。該文將討論成骨基因不同傳遞方式的研究現(xiàn)狀，以及各自的優(yōu)缺點(diǎn)，旨在為目的基因治療骨折不愈合提供理論基礎(chǔ)。
近年來，基因工程（genetic engineering，GE）和克隆技術(shù)的突破性進(jìn)展使得 “無指定病原體（designated pathogen free，DPF）異種移植（xenotransplantation，XENO）醫(yī)用（medical，M）豬” （以下簡稱：GE-DPF-XENO-M豬）培育成功。以GE-DPF-XENO-M豬為基礎(chǔ)，大量以非人類靈長類動物（non human primates，NHPs）為受體的異種移植實驗基本上回答了人們最為關(guān)心的問題： ① 克服超急性排斥反應(yīng)；② 克服跨物種感染。這些成就直接催生了新型“異種移植亞臨床研究模型”的問世。2021年底，美國Montgomery及Porrett團(tuán)隊先后將GE豬腎移植到3例腦死亡遺體，48～72 h觀察沒有超急性排異反應(yīng)發(fā)生。這3例亞臨床研究為異種移植進(jìn)入臨床研究提供了科學(xué)依據(jù)。 2022年1月7日，美國馬里蘭Griffith等將一顆GE豬心移植給一位嚴(yán)重心臟功能衰竭的患者，并存活59 d。以上進(jìn)展表明異種移植向臨床研究階段邁出了關(guān)鍵性一步，值得我國同行關(guān)注和借鑒。
新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）疫情在全球的肆虐，不僅對公眾的健康造成了重大威脅，也對全球衛(wèi)生醫(yī)療系統(tǒng)和社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展帶來了巨大沖擊。因此，加快疫苗和抗體藥物的研發(fā)，為人們提供有效的保護(hù)和治療措施，成為廣大科學(xué)研究人員和醫(yī)療機(jī)構(gòu)的首要任務(wù)。目前全球已有多款新冠疫苗和抗體藥物進(jìn)入臨床研究或獲批上市，本文對多款利用基因工程技術(shù)研發(fā)的基于S蛋白的新冠疫苗和抗體（包括亞單位疫苗、病毒載體疫苗、DNA疫苗、mRNA疫苗以及一些中和抗體藥物）進(jìn)行了簡要闡述，同時也對疫苗和抗體藥物的未來發(fā)展進(jìn)行了探討。