目的 研究堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)、轉(zhuǎn)化生長因子β1 (transforming growth factor β1，TGF-β1)、胰島素樣生長因子1(insulinlike growth factor 1，IGF-1)單獨(dú)或聯(lián)合作用于人胚半月板細(xì)胞，探討半月板組織工程種子細(xì)胞大量擴(kuò)增最佳作用組合及濃度。方法 無菌條件下取健康婦女意外流產(chǎn)并自愿捐獻(xiàn)的4個月人胚半月板，體外分離、培養(yǎng)半月板纖維軟骨細(xì)胞，用Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色和Aggrecan免疫熒光染色檢測其性狀。取第3代細(xì)胞貼壁后使用血清饑餓法同步化細(xì)胞，加入IGF-1（1、10、50、100 μg/L）、TGF-β1(0.1、1.0、5.0、10.0、50.0 μg/L)、bFGF(5、10、50、100、200 μg/L)作用于半月板細(xì)胞,每樣本設(shè)8個復(fù)孔和陰性對照組，分別于作用后48 h和72 h采用MTT法檢測軟骨細(xì)胞增殖情況，以確定各生長因子最佳效應(yīng)濃度。同法設(shè)7個組，每組8個復(fù)孔，分別為：陰性對照組、bFGF最佳效應(yīng)濃度組(50 μg/L)、TGF-β1最佳效應(yīng)濃度組(5 μg/L)、IGF-1最佳效應(yīng)濃度組（50 μg/L）、bFGF 和TGF-β1最佳效應(yīng)濃度聯(lián)用組、bFGF和IGF-1最佳效應(yīng)濃度聯(lián)用組、TGF-β1和IGF-1最佳效應(yīng)濃度聯(lián)用組，48 h和72 h用MTT比色法得出吸光度（A）值并分析軟骨細(xì)胞的增殖效應(yīng)。結(jié)果 第3代半月板細(xì)胞擴(kuò)增前后細(xì)胞均表達(dá)Ⅱ型膠原和Aggrecan蛋白。48 h和72 h 50 μg/L IGF-1，5 μg/L TGF-β1及50 μg/L bFGF濃度組與對照組相比均具有促細(xì)胞增殖作用，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；此即為各生長因子最佳效應(yīng)濃度。生長因子聯(lián)用：bFGF 50 μg/L與IGF-1 50 μg/L聯(lián)用、IGF-150 μg/L與TGF-β1 5 μg/L聯(lián)用具有協(xié)同效應(yīng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)； bFGF 50 μg/L與TGF-β1 5 μg/L聯(lián)用無協(xié)同效應(yīng)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 bFGF、TGF-β1、IGF-1單獨(dú)使用均可體外擴(kuò)增人胚半月板細(xì)胞，最佳效應(yīng)濃度聯(lián)用時bFGF/IGF-1、IGF-1/TGF-β1的擴(kuò)增效果優(yōu)于各自單獨(dú)使用，可用于體外大量擴(kuò)增種子細(xì)胞。
目的 初步探討多種免疫抑制劑對嗜鉻細(xì)胞瘤12（pheochromocytoma 12，PC12）細(xì)胞和L929細(xì)胞增殖的影響。方法 對數(shù)生長期PC12細(xì)胞和L929細(xì)胞傳代，取細(xì)胞株復(fù)蘇后第3代細(xì)胞均以1×104/ml密度接種于培養(yǎng)板中，分別加入10-5 、10-6、10－7和10－8mol/L環(huán)孢菌素A（cyclosporin A,CsA），10－6 、10－7 、10－8和10－9mol/L FK506以及10－3、10－4 、10－6 和10－8 mol/L甲基強(qiáng)地松龍，并設(shè)立空白對照組。于培養(yǎng)24、48和72 h后，取各濃度藥物作用的細(xì)胞，采用MTT法檢測細(xì)胞增殖。結(jié)果 高濃度（10-3mol/L）甲基強(qiáng)地松龍和較低濃度（10－8～10－7mol/L）CsA，在給藥后48 h內(nèi)對PC12細(xì)胞增殖有明顯促進(jìn)作用，此后促增殖作用不明顯；而各個濃度的FK506均無促進(jìn)PC12細(xì)胞增殖的作用。高濃度甲基強(qiáng)地松龍（10-3mol/L）和CsA（10-6～10-5 mol/L）作用24 h后，對L929細(xì)胞增殖有顯著抑制作用，F(xiàn)K506僅在較高濃度（10-6 mol/L）有一過性（僅出現(xiàn)于給藥后48 h）促進(jìn)L929細(xì)胞增殖的作用。結(jié)論 10-3mol/L甲基強(qiáng)地松龍和10-8～10-7mol/L CsA能夠在短時間內(nèi)促進(jìn)PC12細(xì)胞增殖，而10-3 mol/L甲基強(qiáng)地松龍和10-6～10-5 mol/L CsA對L929細(xì)胞增殖有顯著抑制作用。