目的 阿片肽與增生性瘢痕患者感覺異常有關(guān)，通過比較β- 內(nèi)啡肽在人正常皮膚與增生性瘢痕組織中的表達(dá)情況，探討其在增生性瘢痕感覺異常發(fā)生、發(fā)展 中所起作用。 方法 取42 例增生性瘢痕患者自愿捐贈的增生性瘢痕組織；男15 例，女27 例；年齡16 ～ 50 歲，平均32.6 歲；瘢痕形成時間1 ～ 20 年，平均4.5 年。根據(jù)患者感覺情況，將瘢痕組織分為3 組，無痛癢組（n=20）、單純癢組（n=14）及痛癢組（n=8）。另取行植皮手術(shù)患者自愿捐贈的正常皮膚組織5 例作為正常對照組，男3 例，女2 例；年齡15 ～ 37 歲，平均24.6 歲。采用免疫熒光染色觀察β- 內(nèi)啡肽定位情況，ELISA 法檢測組織中β- 內(nèi)啡肽含量。 結(jié)果 各組組織中均可見β- 內(nèi)啡肽表達(dá)，主要位于真皮層周圍神經(jīng)末梢、成纖維細(xì)胞和單核樣細(xì)胞；其中單純癢組和痛癢組β- 內(nèi)啡肽表達(dá)明顯強于無痛癢組與正常對照組。無痛癢組、單純癢組、痛癢組及正常對照組組織β- 內(nèi)啡肽含量分別為（617.401 ± 97.518）、（739.543 ± 94.149）、（623.294 ± 149.613）、（319.734 ± 85.301）pg/ mL，其中無痛癢組、單純癢組及痛癢組β- 內(nèi)啡肽含量均顯著高于正常皮膚組（P lt; 0.05），單純癢組高于無痛癢組及痛癢組（P lt; 0.05），無痛癢組與痛癢組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 增生性瘢痕中β- 內(nèi)啡肽的高表達(dá)，可能與其瘙癢發(fā)生有關(guān)。
目的 人Ⅰ型前膠原基因（Col Ⅰ A1）反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotide，ASODN）對體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞有抑制膠原合成作用，擬進(jìn)一步探討Col Ⅰ A1 ASODN 對裸鼠移植模型體內(nèi)的人增生性瘢痕的膠原合成作用。 方法 SPF 級BALB/c-nunu 品系6 ～ 8 周齡雌性裸鼠60 只，體重約20 g；取行瘢痕切除手術(shù)患者自愿捐贈的瘢痕組織塊去表皮后，移植至裸鼠背部肩胛內(nèi)側(cè)皮下，每只裸鼠移植1 塊，制備人增生性瘢痕裸鼠移植模型。將58 只成功制備模型的裸鼠根據(jù)處理方法不同，隨機分成3 組，于瘢痕移植2 周根據(jù)分組行經(jīng)皮穿刺瘢痕內(nèi)注射。A 組（n=20）：5 μL 濃度為3 mmol/L Col Ⅰ A1 ASODN、3 μL 脂質(zhì)體、92 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基；B 組（n=20）： 3 μL 脂 質(zhì)體、97 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基；C 組（n=18）：100 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基。實驗最初2 周每天注射1 次，之后隔天1 次，至實驗取材。注射后2、4、6 周，對存活裸鼠進(jìn)行瘢痕硬度測量后，處死裸鼠取瘢痕組織行膠原染色組織學(xué)觀察以及透射電鏡觀察；提取細(xì)胞總RNA 后行RT-PCR 測定Col Ⅰ A1 mRNA 相對含量；ELISA 法行Col Ⅰ A1 蛋白定量分析。 結(jié)果 注射后6 周內(nèi)17 只裸鼠死亡；共41 只裸鼠40 塊瘢痕組織符合實驗標(biāo)準(zhǔn)，納入實驗；A、B、C 組各14、13、14 只。注射后2 周，3 組間瘢痕硬度比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；4、6 周時A 組與B、C 組比較， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。隨時間延長，組織學(xué)觀察示3 組Ⅲ型膠原表達(dá)上升，A 組最明顯，Ⅰ型膠原排列規(guī)則。透射電鏡觀察示A 組成纖維細(xì)胞退化，膠原纖維排列更趨于一致；B、C 組膠原纖維排列也逐漸規(guī)則。注射后2、4 周3 組間Col Ⅰ A1 mRNA 和蛋白表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；6 周時A 組與B、C 組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 在人增生性瘢痕裸鼠移植模型的瘢痕內(nèi)注射Col Ⅰ A1 ASODN 可抑制Col Ⅰ A1 mRNA 及Ⅰ型膠原表達(dá)，促進(jìn)瘢痕組織成熟、軟化，脂質(zhì)體可促進(jìn)該抑制效果。
探討陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)Ⅰ 型前膠原基因（Col Ⅰ A1）反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotide，ASODN）轉(zhuǎn)染對人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞Col Ⅰ A1 表達(dá)的影響。 方法 取患者自愿捐贈瘢痕組織，采用組織塊法培養(yǎng)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞并傳代。于6 孔板內(nèi)按32.25 × 104 個/ 孔的密度接種第4 代細(xì)胞，根據(jù)轉(zhuǎn)染液不同分為4 組：A 組為脂質(zhì)體加Col Ⅰ A1 ASODN，B 組為Col Ⅰ A1 ASODN，C 組為脂質(zhì)體，D 組為空白對照。轉(zhuǎn)染后8 h，1、2、3、4 d 分別提取細(xì)胞總RNA，行RT-PCR 后測定Col Ⅰ A1 mRNA 表達(dá)量；胃酶消化法提取ECM 中Col Ⅰ A1 蛋白，ELISA 測定其濃度。 結(jié)果 擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示條帶清晰，無雜帶、明顯的引物二聚體及拖尾現(xiàn)象。Col Ⅰ A1 mRNA 相對表達(dá)量：轉(zhuǎn)染后8 h，A 組小于B、C、D 組，B、C 組小于D 組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；B、C 組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；轉(zhuǎn)染后1 d，A、B 組小于C、D 組（P lt; 0.05），A、B 組間和C、D 組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05） ；轉(zhuǎn)染后2 d，各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；轉(zhuǎn)染后3、4 d，A 組小于B、C、D 組，B 組小于C、D 組（P lt; 0.05），C、D 組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。Col Ⅰ蛋白濃度：轉(zhuǎn)染后8 h，A組小于B、C、D 組，B、C 組小于D 組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），B、C 組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（PP gt; 0.05）；轉(zhuǎn)染后1 d，各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；轉(zhuǎn)染后2、3、4 d，A、B 組小于C、D 組，C 組小于D 組（P lt; 0.05），A、B 組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 Col Ⅰ A1 ASODN 抑制Col Ⅰ A1 mRNA 和蛋白表達(dá)；陽離子脂質(zhì)體作為載體有增強效果，促進(jìn)ASODN 進(jìn)入細(xì)胞并在核內(nèi)分布。
【摘 要】 目的 研究不同時期兔耳增生性瘢痕組織血管生成，探索新的增生性瘢痕防治方法。 方法 19 只日本大耳白兔，體重2.0 ～ 2.5 kg，制備兔耳增生性瘢痕模型。其中8 只于創(chuàng)面上皮化后10、30、60 及90 d 行微血管計數(shù)、微循環(huán)監(jiān)測及HE 染色觀察。另11 只選擇每只兔的左、右側(cè)耳為實驗組及對照組，于上皮化后10 d，實驗組兔耳瘢痕局部多點注射基因重組血管生成抑制因子1（adenovirus extracellular protein with metalloprotease and thrombospondin 1domains，Ad-METH1）重組腺病毒 40 μL，對照組注射等量空載腺病毒。取1 只兔于注射后3 d，采用RT-PCR 和Westernblot 方法檢測基因轉(zhuǎn)染后瘢痕組織中METH1 mRNA 和蛋白的表達(dá)。余10 只兔注射后30 d，行兩組大體觀察、微血管計數(shù)及HE 染色。 結(jié)果 上皮化后10、30、60 及90 d 瘢痕組織微血管計數(shù)分別為（42.37±3.89）、（49.46±4.13）、（33.12±4.34）及（13.24±2.31）支；瘢痕組織微循環(huán)灌注分別為（37.75±2.11）、（59.87±6.46）、（44.53±6.14）及（29.21±1.84）PU；上皮化后10 ～ 60 d 微血管計數(shù)及血流灌注值明顯高于上皮化后90 d，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。兔耳創(chuàng)面上皮化后10 ～ 30 d 組織學(xué)為瘢痕增生早期和增生期表現(xiàn)；60 d 時仍為增生期表現(xiàn)，但已出現(xiàn)成熟跡象；90 d 時大部分瘢痕軟化，為成熟期表現(xiàn)。Ad-METH1 注射后3 d，實驗組METH1 mRNA 及蛋白有較高水平的表達(dá)，對照組未檢測到靶基因表達(dá)；注射Ad-METH1 后30 d，大體觀察：實驗組瘢痕顏色接近正常兔耳膚色，質(zhì)地接近正常；對照組瘢痕明顯高出兔耳腹側(cè)皮面，質(zhì)地堅硬；瘢痕組織微血管計數(shù)實驗組為（12.38±2.56）支，對照組為（48.12±6.46）支，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）。組織學(xué)染色顯示實驗組瘢痕微血管分布較少，成纖維細(xì)胞散在，膠原排列有序；對照組見大量成纖維細(xì)胞，血管分布豐富，膠原纖維粗大、排列紊亂。 結(jié)論 血管生成與增生性瘢痕的形成有密切關(guān)系，血管抑制基因治療有望成為一種有效的增生性瘢痕防治方法。
【摘 要】 目的 通過將轉(zhuǎn)染TGF-β3c2s2 基因的兔BMSCs 移植于兔耳瘢痕模型，觀察轉(zhuǎn)基因BMSCs 對創(chuàng)面愈合后增生性瘢痕形成的影響。 方法 成年健康日本大耳白兔20 只，體重1.7 ～ 2.5 kg，雌雄不拘。取第3 代兔BMSCs，經(jīng)Ad-TGF-β3c2s2 在感染復(fù)數(shù)150 下轉(zhuǎn)染，培養(yǎng)孵育24 h 后，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105/mL 備用。將純化、濃縮的Ad-TGF-β3c2s2顆粒，DMEM/F12（不含F(xiàn)BS）稀釋為1×108 pfu/mL 備用。于20 只日本大耳白兔雙側(cè)兔耳分別制備兩個2 cm × 2 cm 大小的腹側(cè)全層皮膚、軟骨缺損創(chuàng)面。將每只兔的4 個創(chuàng)面隨機分為空白對照組（A組）、Ad-TGF-β3c2s2 組（B組）、BMSCs 組（C組）和BMSCs/Ad-TGF-β3c2s2 組（D 組），并以自身正常皮膚作為正常對照（E 組）。將備好的細(xì)胞及病毒液分別按創(chuàng)面分組進(jìn)行局部移植。于術(shù)后21、45、90 d 行大體觀察、瘢痕硬度和厚度測定、HE 染色和免疫組織化學(xué)檢測。 結(jié)果 大體觀察：A、B、C 組上皮化后創(chuàng)面均逐漸形成不同程度的瘢痕，傷后45 d 瘢痕增生程度達(dá)高峰，明顯高出皮膚表面，持續(xù)至90 d，D 組在觀察期內(nèi)均無明顯高出周圍皮膚的瘢痕形成。術(shù)后45 d 和90 d，A、B、C 組瘢痕厚度和硬度明顯高于D 組，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01），而B 組低于A、C 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）；D 組愈合后創(chuàng)面厚度和硬度與正常皮膚接近。HE 染色觀察：A、C 組傷后45 d 可見淺層組織結(jié)構(gòu)排列紊亂，膠原纖維粗大，呈交錯網(wǎng)織狀排列；B 組和D組結(jié)構(gòu)與正常皮膚接近，但較E 組膠原排列致密，表皮較A、C 組??；90 d 各組結(jié)構(gòu)與45 d 相似。BrdU 免疫組織化學(xué)觀察，傷后21、45 d，C、D 組均能見到散在分布、胞核染色陽性的棕色細(xì)胞，A、B、E 組均為陰性。 結(jié)論 創(chuàng)面局部移植人TGF- β3c2s2 基因修飾的BMSCs，具有抑制創(chuàng)面愈合后增生性瘢痕的作用。
【摘 要】 目的 了解病理性瘢痕（增生性瘢痕與瘢痕疙瘩）中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物和銅鋅超氧化物歧化酶（copper，zinc-superoxide dismutase，CuZn-SOD）的變化。 方法 取2005 年5 月－ 2005 年8 月收治患者自愿捐獻(xiàn)的標(biāo)本。瘢痕疙瘩組10 例，年齡16 ～ 35 歲，平均病程2.2 年；增生性瘢痕組10 例，年齡17 ～ 32 歲，平均病程8 個月；正常皮膚組8 例，年齡16 ～ 34 歲。應(yīng)用化學(xué)比色法測定3 組標(biāo)本中 CuZn-SOD 活力和丙二醛（malonaldehyde，MDA）含量，采用免疫組織化學(xué)方法觀察CuZn-SOD 蛋白在病理性瘢痕中的表達(dá)，并對其進(jìn)行評分。 結(jié)果 正常皮膚組、增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組MDA 含量分別為（0.821 3 ± 0.086 4）、（1.139 0 ± 0.106 7）、（1.190 0 ± 0.074 8）nmol/mg prot；CuZn-SOD 活力分別為（20.60 ± 5.56）、（31.65 ± 2.21）、（34.36 ± 5.01）U/mg prot。增生性瘢痕組和瘢痕疙瘩組MDA 含量與CuZn-SOD 活力同正常皮膚組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。免疫組織化學(xué)染色觀察：3 組表皮角質(zhì)形成細(xì)胞和真皮成纖維細(xì)胞均有CuZn-SOD 蛋白陽性表達(dá)。正常皮膚組、增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組在表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中免疫組織化學(xué)評分分別為（2.20 ± 0.45）、（4.14 ± 0.90）、（4.43 ± 0.79）分；在真皮成纖維細(xì)胞中評分分別為（1.60 ± 0.89）、（4.00 ± 0.82）、（4.43 ± 0.53）分。增生性瘢痕組和瘢痕疙瘩組CuZn-SOD 蛋白表達(dá)與正常皮膚組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt;0.05）。 結(jié)論 病理性瘢痕中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA 含量增加，CuZn-SOD 活力升高、表達(dá)增強。
目的 探討壓應(yīng)力對體外培養(yǎng)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖和凋亡的影響。方法 應(yīng)用組織塊培養(yǎng)法獲取人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞。以簡易氣控加壓細(xì)胞培養(yǎng)儀給細(xì)胞 施5、10、15、25、50、100、150mmHg(1mmHg=0.133 kPa)壓力(n=6)，持續(xù)4 d，作為實驗組；不施壓設(shè)為對照組(n=6)。分別以MTT法測定細(xì)胞吸光度（A）值并計算生長抑制率(inhibition ratio,IR)，流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞生長周期及Annexin-V-PI標(biāo)記法測定細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果 5、10、15、25、50、100、150mmHg壓力組及對照組，細(xì)胞A值分別為0.228±0.004、0.226±0.003、0.213±0.005、0.180±0.005、0.172±0.007、0.165±0.004、0.164±0.004、0.230±0.005，IR分別為0.8%、2.0%、7.3%、21.7%、25.2%、28.2%、28.2%和0。DNA G1期細(xì)胞百分比分別為71.80％±0.44％、72.32％±0.40％、74.56％±1.01％、82.82％±2.76％、86.77％±2.06％、88.23％±1.27％、89.11％±1.74％、71.46％±0.49％，早期細(xì)胞凋亡率分別為4.22％±0.49％、5.12％±0.74％、8.58％±0.79%、19.28％±140%、25.60％±1.21%、35.80％±2.39%、36.18％±2.38%、4.00％±0.36％。其中5、10mmHg壓力組上述各指標(biāo)與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞ 0.05)；15、25、50、100、150mmHg壓力組各指標(biāo)與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；10、15、25、50mmHg壓力組細(xì)胞A值和G1期細(xì)胞百分比組間比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01), 50、100、150 mmHg壓力組各組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；10、15、25、50、100mmHg壓力組早期細(xì)胞調(diào)亡率組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01), 100、150mmHg壓力組組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 結(jié)論 適當(dāng)?shù)某掷m(xù)壓應(yīng)力對增生性瘢痕成纖維細(xì)胞具有誘導(dǎo)凋亡、抑制增殖的復(fù)合效應(yīng)，是臨床上壓迫療法治療增生性瘢痕的重要機制之一。
目的 探討青蒿琥酯(artesunate，Art)誘導(dǎo)皮膚瘢痕成纖維細(xì)胞凋亡的作用及機制。 方法 取自愿捐獻(xiàn)的人耳垂增生性瘢痕，采用組織塊貼壁法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。經(jīng)免疫組織化學(xué)染色鑒定后，取第3～5代成纖維細(xì)胞，采用含60、120和240 mg/L Art培養(yǎng)液各5 ml培養(yǎng)作為實驗組，僅加入等量的培養(yǎng)液作為對照組。于倒置顯微鏡及透射電鏡觀察，采用流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期。另取第3～5代成纖維細(xì)胞，實驗組采用30、60和120 mg/L Art培養(yǎng)液，對照組僅加入等量的培養(yǎng)液，觀察細(xì)胞內(nèi)鈣離子的變化。 結(jié)果 原代成纖維細(xì)胞呈典型的梭形貼壁生長，免疫組織化學(xué)鑒定細(xì)胞波形蛋白呈陽性表達(dá)；倒置顯微鏡下觀察Art在60~240 mg/L濃度范圍內(nèi)抑制成纖維細(xì)胞生長且呈劑量及時間依賴性，細(xì)胞出現(xiàn)凋亡征象；透射電鏡觀察，各實驗組出現(xiàn)染色質(zhì)濃縮，沿著核膜排列，甚至核碎裂現(xiàn)象。細(xì)胞周期分析顯示各實驗組與對照組比較，凋亡細(xì)胞比例、處于G0～G1、S、G2～M期細(xì)胞數(shù)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，實驗組均出現(xiàn)典型的凋亡峰，且隨藥物濃度增加，峰值越大。Art在30~120 mg/L作用成纖維細(xì)胞 24 h可引起細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度持續(xù)增加，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論 Art通過作用于成纖維細(xì)胞周期誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高可能是其誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞凋亡的機制之一。
目的 探討熱休克蛋白47(heat shock protein 47, HSP47)在病理性瘢痕中的表達(dá)與膠原沉積的相關(guān)性。 方法 取經(jīng)病理科確診的正常皮膚（10名）、增生性瘢痕（19例）和瘢痕疙瘩（16例）組織標(biāo)本，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法、苦味酸天狼星紅偏振光分析法檢測組織中HSP47的表達(dá)及膠原纖維含量。 結(jié)果 增生性瘢痕平均IOD值521 159.50±272 994.13，瘢痕疙瘩組織平均IOD值407 440.30±295 780.63中HSP47表達(dá)量顯著高于正常皮膚組織平均IOD值13 050.17±4 789.41，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；HSP47的表達(dá)量與病理性瘢痕總膠原纖維含量呈正相關(guān)關(guān)系（r＝0.386，P＜0.05）。 結(jié)論 HSP47在病理性瘢痕中異常高表達(dá)，并可能在病理性瘢痕膠原沉積的過程中發(fā)揮重要作用。
目的 探討肌成纖維細(xì)胞在病理性瘢痕形成機制中的作用。 方法 對1998年～2000年門診或住院的13例增生性瘢痕,14例瘢痕疙瘩及7例成熟瘢痕患者的相應(yīng)組織，應(yīng)用光鏡、電鏡及免疫組織化學(xué)染色，進(jìn)行觀察、檢測。 結(jié)果 增生性瘢痕的超微結(jié)構(gòu)中均可見典型的肌成纖維細(xì)胞;免疫組織化學(xué)染色可見有不同程度表達(dá)的肌成纖維細(xì)胞。瘢痕疙瘩及成熟瘢痕的超微結(jié)構(gòu)和免疫組織化學(xué)結(jié)果均未見肌成纖維細(xì)胞。 結(jié)論 肌成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為可能與增生性瘢痕的形成及瘢痕畸形有關(guān)，并可用于增生性瘢痕與瘢痕疙瘩的鑒別。