目的 阿片肽與增生性瘢痕患者感覺異常有關，通過比較β- 內(nèi)啡肽在人正常皮膚與增生性瘢痕組織中的表達情況，探討其在增生性瘢痕感覺異常發(fā)生、發(fā)展 中所起作用。 方法 取42 例增生性瘢痕患者自愿捐贈的增生性瘢痕組織；男15 例，女27 例；年齡16 ～ 50 歲，平均32.6 歲；瘢痕形成時間1 ～ 20 年，平均4.5 年。根據(jù)患者感覺情況，將瘢痕組織分為3 組，無痛癢組（n=20）、單純癢組（n=14）及痛癢組（n=8）。另取行植皮手術患者自愿捐贈的正常皮膚組織5 例作為正常對照組，男3 例，女2 例；年齡15 ～ 37 歲，平均24.6 歲。采用免疫熒光染色觀察β- 內(nèi)啡肽定位情況，ELISA 法檢測組織中β- 內(nèi)啡肽含量。 結果 各組組織中均可見β- 內(nèi)啡肽表達，主要位于真皮層周圍神經(jīng)末梢、成纖維細胞和單核樣細胞；其中單純癢組和痛癢組β- 內(nèi)啡肽表達明顯強于無痛癢組與正常對照組。無痛癢組、單純癢組、痛癢組及正常對照組組織β- 內(nèi)啡肽含量分別為（617.401 ± 97.518）、（739.543 ± 94.149）、（623.294 ± 149.613）、（319.734 ± 85.301）pg/ mL，其中無痛癢組、單純癢組及痛癢組β- 內(nèi)啡肽含量均顯著高于正常皮膚組（P lt; 0.05），單純癢組高于無痛癢組及痛癢組（P lt; 0.05），無痛癢組與痛癢組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結論 增生性瘢痕中β- 內(nèi)啡肽的高表達，可能與其瘙癢發(fā)生有關。
目的 人Ⅰ型前膠原基因（Col Ⅰ A1）反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotide，ASODN）對體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖維細胞有抑制膠原合成作用，擬進一步探討Col Ⅰ A1 ASODN 對裸鼠移植模型體內(nèi)的人增生性瘢痕的膠原合成作用。 方法 SPF 級BALB/c-nunu 品系6 ～ 8 周齡雌性裸鼠60 只，體重約20 g；取行瘢痕切除手術患者自愿捐贈的瘢痕組織塊去表皮后，移植至裸鼠背部肩胛內(nèi)側皮下，每只裸鼠移植1 塊，制備人增生性瘢痕裸鼠移植模型。將58 只成功制備模型的裸鼠根據(jù)處理方法不同，隨機分成3 組，于瘢痕移植2 周根據(jù)分組行經(jīng)皮穿刺瘢痕內(nèi)注射。A 組（n=20）：5 μL 濃度為3 mmol/L Col Ⅰ A1 ASODN、3 μL 脂質體、92 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基；B 組（n=20）： 3 μL 脂 質體、97 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基；C 組（n=18）：100 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基。實驗最初2 周每天注射1 次，之后隔天1 次，至實驗取材。注射后2、4、6 周，對存活裸鼠進行瘢痕硬度測量后，處死裸鼠取瘢痕組織行膠原染色組織學觀察以及透射電鏡觀察；提取細胞總RNA 后行RT-PCR 測定Col Ⅰ A1 mRNA 相對含量；ELISA 法行Col Ⅰ A1 蛋白定量分析。 結果 注射后6 周內(nèi)17 只裸鼠死亡；共41 只裸鼠40 塊瘢痕組織符合實驗標準，納入實驗；A、B、C 組各14、13、14 只。注射后2 周，3 組間瘢痕硬度比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）；4、6 周時A 組與B、C 組比較， 差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。隨時間延長，組織學觀察示3 組Ⅲ型膠原表達上升，A 組最明顯，Ⅰ型膠原排列規(guī)則。透射電鏡觀察示A 組成纖維細胞退化，膠原纖維排列更趨于一致；B、C 組膠原纖維排列也逐漸規(guī)則。注射后2、4 周3 組間Col Ⅰ A1 mRNA 和蛋白表達量比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；6 周時A 組與B、C 組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結論 在人增生性瘢痕裸鼠移植模型的瘢痕內(nèi)注射Col Ⅰ A1 ASODN 可抑制Col Ⅰ A1 mRNA 及Ⅰ型膠原表達，促進瘢痕組織成熟、軟化，脂質體可促進該抑制效果。
探討陽離子脂質體介導Ⅰ 型前膠原基因（Col Ⅰ A1）反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotide，ASODN）轉染對人增生性瘢痕成纖維細胞Col Ⅰ A1 表達的影響。 方法 取患者自愿捐贈瘢痕組織，采用組織塊法培養(yǎng)人增生性瘢痕成纖維細胞并傳代。于6 孔板內(nèi)按32.25 × 104 個/ 孔的密度接種第4 代細胞，根據(jù)轉染液不同分為4 組：A 組為脂質體加Col Ⅰ A1 ASODN，B 組為Col Ⅰ A1 ASODN，C 組為脂質體，D 組為空白對照。轉染后8 h，1、2、3、4 d 分別提取細胞總RNA，行RT-PCR 后測定Col Ⅰ A1 mRNA 表達量；胃酶消化法提取ECM 中Col Ⅰ A1 蛋白，ELISA 測定其濃度。 結果 擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示條帶清晰，無雜帶、明顯的引物二聚體及拖尾現(xiàn)象。Col Ⅰ A1 mRNA 相對表達量：轉染后8 h，A 組小于B、C、D 組，B、C 組小于D 組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；B、C 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）；轉染后1 d，A、B 組小于C、D 組（P lt; 0.05），A、B 組間和C、D 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05） ；轉染后2 d，各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；轉染后3、4 d，A 組小于B、C、D 組，B 組小于C、D 組（P lt; 0.05），C、D 組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。Col Ⅰ蛋白濃度：轉染后8 h，A組小于B、C、D 組，B、C 組小于D 組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間差異無統(tǒng)計學意義（PP gt; 0.05）；轉染后1 d，各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；轉染后2、3、4 d，A、B 組小于C、D 組，C 組小于D 組（P lt; 0.05），A、B 組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結論 Col Ⅰ A1 ASODN 抑制Col Ⅰ A1 mRNA 和蛋白表達；陽離子脂質體作為載體有增強效果，促進ASODN 進入細胞并在核內(nèi)分布。
【摘 要】 目的 研究不同時期兔耳增生性瘢痕組織血管生成，探索新的增生性瘢痕防治方法。 方法 19 只日本大耳白兔，體重2.0 ～ 2.5 kg，制備兔耳增生性瘢痕模型。其中8 只于創(chuàng)面上皮化后10、30、60 及90 d 行微血管計數(shù)、微循環(huán)監(jiān)測及HE 染色觀察。另11 只選擇每只兔的左、右側耳為實驗組及對照組，于上皮化后10 d，實驗組兔耳瘢痕局部多點注射基因重組血管生成抑制因子1（adenovirus extracellular protein with metalloprotease and thrombospondin 1domains，Ad-METH1）重組腺病毒 40 μL，對照組注射等量空載腺病毒。取1 只兔于注射后3 d，采用RT-PCR 和Westernblot 方法檢測基因轉染后瘢痕組織中METH1 mRNA 和蛋白的表達。余10 只兔注射后30 d，行兩組大體觀察、微血管計數(shù)及HE 染色。 結果 上皮化后10、30、60 及90 d 瘢痕組織微血管計數(shù)分別為（42.37±3.89）、（49.46±4.13）、（33.12±4.34）及（13.24±2.31）支；瘢痕組織微循環(huán)灌注分別為（37.75±2.11）、（59.87±6.46）、（44.53±6.14）及（29.21±1.84）PU；上皮化后10 ～ 60 d 微血管計數(shù)及血流灌注值明顯高于上皮化后90 d，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。兔耳創(chuàng)面上皮化后10 ～ 30 d 組織學為瘢痕增生早期和增生期表現(xiàn)；60 d 時仍為增生期表現(xiàn)，但已出現(xiàn)成熟跡象；90 d 時大部分瘢痕軟化，為成熟期表現(xiàn)。Ad-METH1 注射后3 d，實驗組METH1 mRNA 及蛋白有較高水平的表達，對照組未檢測到靶基因表達；注射Ad-METH1 后30 d，大體觀察：實驗組瘢痕顏色接近正常兔耳膚色，質地接近正常；對照組瘢痕明顯高出兔耳腹側皮面，質地堅硬；瘢痕組織微血管計數(shù)實驗組為（12.38±2.56）支，對照組為（48.12±6.46）支，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。組織學染色顯示實驗組瘢痕微血管分布較少，成纖維細胞散在，膠原排列有序；對照組見大量成纖維細胞，血管分布豐富，膠原纖維粗大、排列紊亂。 結論 血管生成與增生性瘢痕的形成有密切關系，血管抑制基因治療有望成為一種有效的增生性瘢痕防治方法。
【摘 要】 目的 通過將轉染TGF-β3c2s2 基因的兔BMSCs 移植于兔耳瘢痕模型，觀察轉基因BMSCs 對創(chuàng)面愈合后增生性瘢痕形成的影響。 方法 成年健康日本大耳白兔20 只，體重1.7 ～ 2.5 kg，雌雄不拘。取第3 代兔BMSCs，經(jīng)Ad-TGF-β3c2s2 在感染復數(shù)150 下轉染，培養(yǎng)孵育24 h 后，調(diào)整細胞濃度為1×105/mL 備用。將純化、濃縮的Ad-TGF-β3c2s2顆粒，DMEM/F12（不含F(xiàn)BS）稀釋為1×108 pfu/mL 備用。于20 只日本大耳白兔雙側兔耳分別制備兩個2 cm × 2 cm 大小的腹側全層皮膚、軟骨缺損創(chuàng)面。將每只兔的4 個創(chuàng)面隨機分為空白對照組（A組）、Ad-TGF-β3c2s2 組（B組）、BMSCs 組（C組）和BMSCs/Ad-TGF-β3c2s2 組（D 組），并以自身正常皮膚作為正常對照（E 組）。將備好的細胞及病毒液分別按創(chuàng)面分組進行局部移植。于術后21、45、90 d 行大體觀察、瘢痕硬度和厚度測定、HE 染色和免疫組織化學檢測。 結果 大體觀察：A、B、C 組上皮化后創(chuàng)面均逐漸形成不同程度的瘢痕，傷后45 d 瘢痕增生程度達高峰，明顯高出皮膚表面，持續(xù)至90 d，D 組在觀察期內(nèi)均無明顯高出周圍皮膚的瘢痕形成。術后45 d 和90 d，A、B、C 組瘢痕厚度和硬度明顯高于D 組，且差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01），而B 組低于A、C 組，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）；D 組愈合后創(chuàng)面厚度和硬度與正常皮膚接近。HE 染色觀察：A、C 組傷后45 d 可見淺層組織結構排列紊亂，膠原纖維粗大，呈交錯網(wǎng)織狀排列；B 組和D組結構與正常皮膚接近，但較E 組膠原排列致密，表皮較A、C 組??；90 d 各組結構與45 d 相似。BrdU 免疫組織化學觀察，傷后21、45 d，C、D 組均能見到散在分布、胞核染色陽性的棕色細胞，A、B、E 組均為陰性。 結論 創(chuàng)面局部移植人TGF- β3c2s2 基因修飾的BMSCs，具有抑制創(chuàng)面愈合后增生性瘢痕的作用。
【摘 要】 目的 了解病理性瘢痕（增生性瘢痕與瘢痕疙瘩）中脂質過氧化產(chǎn)物和銅鋅超氧化物歧化酶（copper，zinc-superoxide dismutase，CuZn-SOD）的變化。 方法 取2005 年5 月－ 2005 年8 月收治患者自愿捐獻的標本。瘢痕疙瘩組10 例，年齡16 ～ 35 歲，平均病程2.2 年；增生性瘢痕組10 例，年齡17 ～ 32 歲，平均病程8 個月；正常皮膚組8 例，年齡16 ～ 34 歲。應用化學比色法測定3 組標本中 CuZn-SOD 活力和丙二醛（malonaldehyde，MDA）含量，采用免疫組織化學方法觀察CuZn-SOD 蛋白在病理性瘢痕中的表達，并對其進行評分。 結果 正常皮膚組、增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組MDA 含量分別為（0.821 3 ± 0.086 4）、（1.139 0 ± 0.106 7）、（1.190 0 ± 0.074 8）nmol/mg prot；CuZn-SOD 活力分別為（20.60 ± 5.56）、（31.65 ± 2.21）、（34.36 ± 5.01）U/mg prot。增生性瘢痕組和瘢痕疙瘩組MDA 含量與CuZn-SOD 活力同正常皮膚組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。免疫組織化學染色觀察：3 組表皮角質形成細胞和真皮成纖維細胞均有CuZn-SOD 蛋白陽性表達。正常皮膚組、增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組在表皮角質形成細胞中免疫組織化學評分分別為（2.20 ± 0.45）、（4.14 ± 0.90）、（4.43 ± 0.79）分；在真皮成纖維細胞中評分分別為（1.60 ± 0.89）、（4.00 ± 0.82）、（4.43 ± 0.53）分。增生性瘢痕組和瘢痕疙瘩組CuZn-SOD 蛋白表達與正常皮膚組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P gt;0.05）。 結論 病理性瘢痕中脂質過氧化產(chǎn)物MDA 含量增加，CuZn-SOD 活力升高、表達增強。
目的 探討壓應力對體外培養(yǎng)人增生性瘢痕成纖維細胞增殖和凋亡的影響。方法 應用組織塊培養(yǎng)法獲取人增生性瘢痕成纖維細胞。以簡易氣控加壓細胞培養(yǎng)儀給細胞 施5、10、15、25、50、100、150mmHg(1mmHg=0.133 kPa)壓力(n=6)，持續(xù)4 d，作為實驗組；不施壓設為對照組(n=6)。分別以MTT法測定細胞吸光度（A）值并計算生長抑制率(inhibition ratio,IR)，流式細胞儀測定細胞生長周期及Annexin-V-PI標記法測定細胞凋亡情況。結果 5、10、15、25、50、100、150mmHg壓力組及對照組，細胞A值分別為0.228±0.004、0.226±0.003、0.213±0.005、0.180±0.005、0.172±0.007、0.165±0.004、0.164±0.004、0.230±0.005，IR分別為0.8%、2.0%、7.3%、21.7%、25.2%、28.2%、28.2%和0。DNA G1期細胞百分比分別為71.80％±0.44％、72.32％±0.40％、74.56％±1.01％、82.82％±2.76％、86.77％±2.06％、88.23％±1.27％、89.11％±1.74％、71.46％±0.49％，早期細胞凋亡率分別為4.22％±0.49％、5.12％±0.74％、8.58％±0.79%、19.28％±140%、25.60％±1.21%、35.80％±2.39%、36.18％±2.38%、4.00％±0.36％。其中5、10mmHg壓力組上述各指標與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞ 0.05)；15、25、50、100、150mmHg壓力組各指標與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；10、15、25、50mmHg壓力組細胞A值和G1期細胞百分比組間比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01), 50、100、150 mmHg壓力組各組間比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；10、15、25、50、100mmHg壓力組早期細胞調(diào)亡率組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01), 100、150mmHg壓力組組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 結論 適當?shù)某掷m(xù)壓應力對增生性瘢痕成纖維細胞具有誘導凋亡、抑制增殖的復合效應，是臨床上壓迫療法治療增生性瘢痕的重要機制之一。
目的 探討青蒿琥酯(artesunate，Art)誘導皮膚瘢痕成纖維細胞凋亡的作用及機制。 方法 取自愿捐獻的人耳垂增生性瘢痕，采用組織塊貼壁法進行細胞培養(yǎng)。經(jīng)免疫組織化學染色鑒定后，取第3～5代成纖維細胞，采用含60、120和240 mg/L Art培養(yǎng)液各5 ml培養(yǎng)作為實驗組，僅加入等量的培養(yǎng)液作為對照組。于倒置顯微鏡及透射電鏡觀察，采用流式細胞儀觀察細胞凋亡及細胞周期。另取第3～5代成纖維細胞，實驗組采用30、60和120 mg/L Art培養(yǎng)液，對照組僅加入等量的培養(yǎng)液，觀察細胞內(nèi)鈣離子的變化。 結果 原代成纖維細胞呈典型的梭形貼壁生長，免疫組織化學鑒定細胞波形蛋白呈陽性表達；倒置顯微鏡下觀察Art在60~240 mg/L濃度范圍內(nèi)抑制成纖維細胞生長且呈劑量及時間依賴性，細胞出現(xiàn)凋亡征象；透射電鏡觀察，各實驗組出現(xiàn)染色質濃縮，沿著核膜排列，甚至核碎裂現(xiàn)象。細胞周期分析顯示各實驗組與對照組比較，凋亡細胞比例、處于G0～G1、S、G2～M期細胞數(shù)差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，實驗組均出現(xiàn)典型的凋亡峰，且隨藥物濃度增加，峰值越大。Art在30~120 mg/L作用成纖維細胞 24 h可引起細胞內(nèi)鈣離子濃度持續(xù)增加，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 結論 Art通過作用于成纖維細胞周期誘導細胞凋亡，細胞內(nèi)鈣離子濃度升高可能是其誘導成纖維細胞凋亡的機制之一。
目的 探討熱休克蛋白47(heat shock protein 47, HSP47)在病理性瘢痕中的表達與膠原沉積的相關性。 方法 取經(jīng)病理科確診的正常皮膚（10名）、增生性瘢痕（19例）和瘢痕疙瘩（16例）組織標本，應用免疫組織化學方法、苦味酸天狼星紅偏振光分析法檢測組織中HSP47的表達及膠原纖維含量。 結果 增生性瘢痕平均IOD值521 159.50±272 994.13，瘢痕疙瘩組織平均IOD值407 440.30±295 780.63中HSP47表達量顯著高于正常皮膚組織平均IOD值13 050.17±4 789.41，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；HSP47的表達量與病理性瘢痕總膠原纖維含量呈正相關關系（r＝0.386，P＜0.05）。 結論 HSP47在病理性瘢痕中異常高表達，并可能在病理性瘢痕膠原沉積的過程中發(fā)揮重要作用。
目的 探討肌成纖維細胞在病理性瘢痕形成機制中的作用。 方法 對1998年～2000年門診或住院的13例增生性瘢痕,14例瘢痕疙瘩及7例成熟瘢痕患者的相應組織，應用光鏡、電鏡及免疫組織化學染色，進行觀察、檢測。 結果 增生性瘢痕的超微結構中均可見典型的肌成纖維細胞;免疫組織化學染色可見有不同程度表達的肌成纖維細胞。瘢痕疙瘩及成熟瘢痕的超微結構和免疫組織化學結果均未見肌成纖維細胞。 結論 肌成纖維細胞的生物學行為可能與增生性瘢痕的形成及瘢痕畸形有關，并可用于增生性瘢痕與瘢痕疙瘩的鑒別。