研究肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)對培養(yǎng)的人外泌汗腺上皮細胞(human eccrine sweat gland epithelial cells,hESGc)的促增殖作用,以及細胞內(nèi)磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2,p-ERK1/2)蛋白的表達。 方法 在無血清角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)基(keratinocyte serum free medium,KSFM)中培養(yǎng)hESGc,取第1 代細胞進行實驗。免疫組織化學染色檢測C-met 表達。MTT 法檢測HGF 對hESGc 的促增殖作用,實驗分為3 組:空白組、對照組和實驗組??瞻捉M僅含200 μL KSFM;對照組于96 孔板以2 × 103 個/ 孔接種hESGc,并加入200 μL KSFM;實驗組于96 孔板以2 × 103 個/ 孔接種hESGc 并加入200 μLKSFM 后,再分別加入不同濃度(2、20、40、80 ng/mL)HGF。實驗組于加入各濃度HGF 前以及加入后2、4 d,觀察細胞增殖情況。實驗組于加入40 ng/mL HGF 后即刻,5、30、90 和120 min,采用Western blot 方法檢測細胞內(nèi)p-ERK1/2表達規(guī)律。 結(jié) 果 hESGc 抗-C-met 免疫組織化學染色胞漿可見陽性染色,細胞核染色為藍色。MTT 法檢測示40、80 ng/ mLHGF 對hESGc 具有顯著促增殖作用(P lt; 0.05)。在含40 ng/mL HGF 的KSFM中培養(yǎng)2 d,吸光度(A)值為0.239 3 ±0.070 9,增殖率為74.2%,對照組A 值為0.137 4 ± 0.029 0;培養(yǎng)4 d,40 ng/mL HGF 實驗組A 值為0.287 8 ± 0.074 3,增殖率為74.8%,對照組A 值為0.164 6 ± 0.035 0,兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05)。在含80 ng/mL HGF 的KSFM中培養(yǎng)2 d,A 值為0.212 3 ± 0.059 2,增殖率為54.5%;培養(yǎng)4 d,80 ng/mL HGF 實驗組A 值為0.231 0 ± 0.056 7,增殖率為40.3%;與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05)。p-ERK1/2 在40 ng/mL HGF 刺激5 min 后表達達高峰,相對積分吸光度值(relative integral absorbance,RIA)為0.593 2 ± 0.192 2,較刺激后即刻增加8.1 倍(P lt; 0.01);刺激30、90 及120 min 后RIA 與刺激后即刻比較,差異無統(tǒng)計學意義(Pgt; 0.05) 結(jié)論 HGF 可促進hESGc 增殖,并能引起ERK1/2蛋白磷酸化。