目的探討基于 Krüppel 樣因子 4（KLF4）的單核巨噬細(xì)胞亞群調(diào)控途徑在間質(zhì)性肺疾病發(fā)生發(fā)展中的作用。方法選取武警特色醫(yī)學(xué)中心 2015 年 5 月至 2017 年 1 月住院的 36 例肺纖維化患者作為研究對(duì)象（肺纖維化組），入院后行肺功能檢測(cè)、動(dòng)脈血?dú)夥治?、留取清晨外周血以及支氣管肺泡灌洗液，流式?xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血單核細(xì)胞亞群以及肺泡灌洗液巨噬細(xì)胞亞群，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)外周血 KLF4 的表達(dá)；選取 10 例需行支氣管鏡檢查的無(wú)肺纖維化患者作為肺泡灌洗液巨噬細(xì)胞亞群對(duì)照 B 組；選取 30 例正常人群作為外周血單核細(xì)胞亞群及 KLF4 對(duì)照 A 組。分析和比較肺纖維化組和對(duì)照 A 組對(duì)象外周血 KLF4 表達(dá)和單核細(xì)胞亞群，分析和比較肺纖維化組和對(duì)照 B 組對(duì)象肺泡灌洗液巨噬細(xì)胞亞群，進(jìn)一步分析肺纖維化患者 KLF4 表達(dá)和巨噬細(xì)胞亞群的關(guān)系，以及單核細(xì)胞亞群和巨噬細(xì)胞亞群與肺功能的關(guān)系。結(jié)果肺纖維化組單核細(xì)胞 CD14++CD16– 亞型明顯低于對(duì)照 A 組（P<0.05），而 CD14++CD16+亞型及 CD14+CD16++亞型較對(duì)照 A 組升高，且 CD14++CD16+亞型較對(duì)照 A 組明顯升高（P<0.05），但相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞三個(gè)亞型分化比例與患者 DLCO 及 PaO2 之間無(wú)相關(guān)性。肺纖維化組肺泡巨噬細(xì)胞 M1 亞型明顯低于對(duì)照 B 組（P<0.05），而 M2 亞型則明顯高于對(duì)照 B 組（P<0.05）。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)肺纖維化組 M2 亞型分化比例與患者 DLCO 及 PaO2 之間呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。KLF4 蛋白在肺纖維化患者外周血表達(dá)量明顯增高，且 KLF4 的表達(dá)與 M2 型巨噬細(xì)胞的數(shù)量呈正相關(guān)（ρ=0.378，P=0.122）。結(jié)論CD16+單核細(xì)胞在肺纖維化發(fā)生、發(fā)展中起到一定的作用，但外周血單核細(xì)胞亞群分化與肺纖維化發(fā)展的程度不直接相關(guān)。巨噬細(xì)胞不同的亞型分化在間質(zhì)性肺疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，M2 型巨噬細(xì)胞與肺纖維化的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。KLF4 參與的單核巨噬細(xì)胞亞群調(diào)控可能參與了肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展。
目的 探討博萊霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化模型中, Krüppel 樣因子4( KLF4) 的表達(dá)及其意義。方法 C57BL/6 小鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組( Control) 和博萊霉素組( BLM) , 經(jīng)氣管內(nèi)注入博萊霉素( 2. 5 mg/kg) 建立實(shí)驗(yàn)性小鼠肺纖維化模型, 注入等量生理鹽水作為對(duì)照組, 分別于術(shù)后第12 h、1 d、2 d、3 d、7 d、14 d 及28 d 取材, 采用HE 染色和Masson 染色觀察肺組織病理變化及膠原的沉積部位和數(shù)量, 實(shí)時(shí)定量PCR 法和免疫組織化學(xué)法分別檢測(cè)各組肺組織中KLF4 mRNA 和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化過(guò)程中, 第1、2 及3 d 表現(xiàn)為急性炎癥; 第7 d 炎癥加重, 并出現(xiàn)膠原沉積; 第14 d 肺泡結(jié)構(gòu)塌陷, 膠原沉積明顯; 第28 d 肺泡結(jié)構(gòu)基本正常, 炎癥程度和膠原沉積較輕。與對(duì)照組相比, 博萊霉素組小鼠肺組織中KLF4 mRNA 的表達(dá)水平第1 d 開(kāi)始升高, 而后降低, 第3 d 達(dá)最低后逐漸升高直至第28 d。博萊霉素組小鼠肺組織中KLF4 蛋白的表達(dá)趨勢(shì)與mRNA 水平基本一致, 第1 d 開(kāi)始升高, 而后降低, 第3 d 達(dá)最低后逐漸增加至第14 d 后再次降低。結(jié)論 KLF4 在博萊霉素致肺纖維化過(guò)程中呈現(xiàn)明顯的動(dòng)態(tài)變化, 并可能參與了肺纖維化的發(fā)生與發(fā)展。
目的探討阿托伐他汀對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺纖維化的干預(yù)作用及機(jī)制。 方法將C57BL/6小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、博萊霉素組和阿托伐他汀組,博萊霉素組和阿托伐他汀組一次性經(jīng)氣管內(nèi)注入博萊霉素(2.5 mg/kg)建立實(shí)驗(yàn)性小鼠肺纖維化模型,對(duì)照組注入等量生理鹽水。阿托伐他汀組在氣管滴注博萊霉素后每日1次灌胃給予阿托伐他汀10 mg·kg-1·d-1。分別于術(shù)后第3、14及28 d處死動(dòng)物,采用HE染色、Masson染色方法觀察肺組織病理變化以及膠原的沉積部位和數(shù)量,實(shí)時(shí)定量PCR法和免疫組織化學(xué)法分別檢測(cè)各組肺組織中Krüppel樣因子4(KLF4)mRNA和蛋白表達(dá)水平,以及明膠酶譜分析法檢測(cè)各組肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)的活性。 結(jié)果(1)博萊霉素造模后,小鼠肺組織第3 d表現(xiàn)為急性炎癥,第14 d膠原沉積加重,肺泡結(jié)構(gòu)破壞,第28 d肺泡結(jié)構(gòu)、炎癥程度及膠原沉積較第14 d減輕。阿托伐他汀組各時(shí)間點(diǎn)炎癥程度和膠原沉積較博萊霉素組均明顯減輕。(2)阿托伐他汀組各時(shí)間點(diǎn)KLF4表達(dá)水平明顯低于博萊霉素組(P均<0.05),其中第3 d阿托伐他汀組KLF4 mRNA表達(dá)水平(0.502±0.261)高于博萊霉素組(0.326±0.164,P<0.05),但其蛋白表達(dá)水平(0.048±0.015)低于博萊霉素組(0.130±0.017),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);(3)染博萊霉素后第3 d(3.136±1.321)和第14 d(3.449±0.356),小鼠肺組織MMP-2活性較對(duì)照組(0.983±0.147)明顯上調(diào)(P<0.05),而阿托伐他汀干預(yù)后兩組MMP-2的活性(2.191±0.800,2.506±0.761)明顯下調(diào)(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論在實(shí)驗(yàn)性肺纖維化中,阿托伐他汀可能是通過(guò)對(duì)KLF4的調(diào)節(jié)來(lái)實(shí)現(xiàn)其抗炎和抗纖維化的作用。