目的 胰島的純度和活性對胰島移植治療糖尿病的療效有很大影響。探討一種大鼠胰島分離純化的新方法，以獲得高純度、高產(chǎn)量、活性好的胰島。 方法 選取健康成年雄性SD 大鼠10 只，體重250 ～ 300 g，逆行膽總管灌注Ⅴ型膠原酶溶液，38℃水浴消化約15 min 后，采用兩種方法純化胰島細胞：A 組采用Ficoll 400 不連續(xù)密度梯度液，B 組采用Ficoll-Paque? PLUS 溶液。行雙硫腙（dithizone，DTZ）染色鑒定胰島并計算胰島當量（islet equivalent quantity，IEQ）、胰島純度，錐蟲藍染色檢測胰島活性。取B 組胰島用海藻酸鈉- 聚左賴氨酸- 海藻酸鈉（alginate/poly-Llysine/ alginate，APA）包裹制備胰島微囊，體外靜止葡萄糖刺激胰島素釋放實驗檢測微囊化和未微囊化胰島的生物學活性。 結(jié)果 DTZ 染色示胰島呈猩紅色，有圓形、橢圓形和不規(guī)則形，胰島邊緣清晰，大部分直徑為50 ～ 300 μm。A、B組IEQ 值分別為338.04 ± 76.61 和834.80 ± 54.00，比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。A、B 組胰島純度分別為88.31% ± 2.67% 和95.63% ± 1.96%，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。A、B 組胰島活率分別為67.40% ± 5.15% 和86.05% ± 2.52%，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。胰島APA 微囊囊形呈完整圓形，大小均勻，微囊直徑為1.5 ～ 2.0 mm，每個微囊中包裹1 ～ 3 個胰島。葡萄糖刺激釋放胰島素實驗顯示，未微囊化胰島和微囊化胰島在低糖下的胰島素分泌濃度分別為（5.53 ±1.64） ng/ mL 和（4.76 ± 0.26）ng/mL，高糖下分別為（11.95 ± 2.07）ng/mL 和（14.34 ± 3.18）ng/mL，高糖刺激下胰島素釋放量為低糖刺激的2 倍多，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；兩組的刺激指數(shù)分別為2.16 ± 0.30 和3.01 ± 0.59，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 Ficoll-Paque? PLUS 溶液作為純化液分離純化胰島的方法具有操作簡便、胰島產(chǎn)量高、純度高等優(yōu)點，獲得的胰島經(jīng)微囊化或未微囊化體外培養(yǎng)均有良好活性。
目的 對微膠囊技術(shù)及其在骨科疾病方面的應用進行綜述。 方法 廣泛查閱近年相關(guān)文獻，介紹微膠囊技術(shù)的基礎知識及其在骨科疾病上的應用。 結(jié)果 較全面地對微膠囊技術(shù)的材料、制備方法、性能評價、緩釋性能、免疫隔離和可包裹的細胞系進行了回顧，分析了其作為骨科藥物和轉(zhuǎn)基因細胞的載體，用于促進骨愈合，基因治療骨腫瘤、骨感染和骨軟骨再生的作用。 結(jié)論 微膠囊可以作為骨科藥物和轉(zhuǎn)基因細胞的載體，治療骨科相關(guān)疾病。
探討微囊微環(huán)境對HepG2細胞氧化應激基因表達影響及外源性抗氧化物質(zhì)干預效果。采用靜電液滴法制備微囊化細胞,real-time PCR法檢測不同培養(yǎng)方式下血紅素加氧酶-1(HO-1)和谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶-A1(GST-A1)表達;通過MTT法檢測細胞活性、ELISA法檢測白蛋白含量,比較還原型谷胱甘肽(GSH)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)干預后指標變化。結(jié)果顯示,培養(yǎng)第6 d和第16 d時,微囊細胞中HO-1基因表達水平分別為同天數(shù)下平面細胞的4.9倍和3.1倍,GST-A1表達分別為平面細胞的11.2倍和33倍(P＜0.05);添加5~10 mmol/L NAC后,微囊化細胞活性較對照組增加40%~70%,白蛋白水平增加20%~30%(P＜0.05),而GSH在10 mmol/L時可使囊內(nèi)細胞活性增加20%~55%,白蛋白水平增加15%(P＜0.05)。結(jié)果提示微囊內(nèi)存在氧化應激因素誘導基因表達改變,NAC和GSH能緩解其對細胞的抑制作用。
目的探討微囊化轉(zhuǎn)基因 BMSCs 移植修復兔早期激素性股骨頭壞死（steroid-induced osteonecrosis of femoral head，SONFH）的療效。方法采用高壓靜電法制備海藻酸鈉-多聚賴氨酸-海藻酸鈉（sodium alginate-poly-L-lysine-sodium alginate，APA）微囊化高表達 Foxc2 轉(zhuǎn)基因 BMSCs，取部分細胞成骨誘導培養(yǎng)，2、3 周時茜素紅染色觀察。取 40 只新西蘭大白兔，采用激素加內(nèi)毒素方法制備 SONFH 模型，經(jīng) MRI 篩選造模成功 32 只，將其隨機分為 A、B、C、D 4 組（n=8）；另取 6 只正常兔作為正常對照組（E 組）。A 組模型動物不作任何處理；B、C、D 組動物雙側(cè)后肢股骨頭行髓芯減壓后，分別于減壓區(qū)注入生理鹽水、同種異體 BMSCs、APA 微囊化轉(zhuǎn)基因 BMSCs。術(shù)后 6、12 周取股骨頭標本行 HE 染色，觀察骨長入情況；免疫組織化學染色觀察骨鈣蛋白（osteocalcin，OCN）、過氧化酶體增殖劑激活受體 γ 2（peroxisome proliferative activated receptor γ 2，PPARγ-2）和 VEGF 蛋白表達；術(shù)后 12 周透射電鏡觀察骨微結(jié)構(gòu)，生物力學測定松質(zhì)骨及軟骨下骨最大壓縮強度及平均彈性模量。結(jié)果誘導培養(yǎng) 2、3 周，茜素紅染色后均可見鈣結(jié)節(jié)形成，且 3 周時數(shù)量較 2 周時增加。各組實驗動物均存活至實驗完成。組織學及透射電鏡觀察示，與 A、B、C 組比較，D 組骨小梁排列較整齊，骨空骨陷窩較少，有豐富的功能細胞器，可見明顯成骨，且 12 周時壞死區(qū)被完全修復。免疫組織化學染色示，術(shù)后 6、12 周，A、B、C 組 OCN 及 VEGF 表達均低于 D、E 組，B、C 組高于 A 組，E 組高于 D 組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。A、B、C 組 PPARγ-2 表達高于 D、E 組，A 組高于 B、C 組，D 組高于E 組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。術(shù)后 12 周生物力學測試顯示，D、E 組股骨頭松質(zhì)骨、軟骨下骨平均彈性模量和最大壓縮強度均高于 A、B、C 組（P<0.05）；A、B、C 組間及 D、E 組間比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結(jié)論微囊化轉(zhuǎn)基因 BMSCs 體內(nèi)移植可修復兔早期 SONFH。