目的 探討在體神經(jīng)元缺氧缺血條件下缺氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）蛋白的表達(dá)及三磷酸肌醇激酶（phosphoinositid 3-kinase/Akt，PI3K/Akt）信號通路的激活，推測PI3K/Akt 信號通路與神經(jīng)元HIF-1α 表達(dá)調(diào)節(jié)的關(guān)系，以期更確切地闡明PI3K/Akt 在發(fā)育期腦缺氧缺血性損傷（hypoxia ischemia brain damage，HIBD）神經(jīng)元HIF-1α 表達(dá)中的作用。 方法 10 d 齡SD 大鼠56 只，分為正常對照組（n=12）、假手術(shù)組（n=12）、實(shí)驗(yàn)組（n=24）、wortmannin 干預(yù)組（n=4）和溶劑干預(yù)組（n=4）。實(shí)驗(yàn)組在乙醚麻醉下行右側(cè)頸總動脈結(jié)扎，氮氧混合氣（92% N2、8% O2）缺氧2.5 h，即為HIBD 模型；假手術(shù)組不結(jié)扎頸總動脈，不作缺氧處理；正常對照組不作任何處理。wortmannin 干預(yù)組和溶劑干預(yù)組分別在側(cè)腦室內(nèi)注射wortmannin 和DMSO、PBS 3 μL，30 min 后制備HIBD 模型。分別于建模后4、8 及24 h處死動物取腦組織，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測HIF-1α、Akt 蛋白的分布和表達(dá)，Western blot 檢測HIF-1α、Akt 及p-Akt 蛋白含量。 結(jié) 果 實(shí)驗(yàn)組HIF-1α 蛋白表達(dá)在術(shù)后4 h 明顯升高，8 h 達(dá)高峰，24 h 后下降；p-Akt 蛋白于術(shù)后4 h 明顯升高，8 h 后下降。正常對照組各時(shí)間點(diǎn)HIF-1α 和p-Akt 均有極少量弱陽性表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)HIF-1α 蛋白表達(dá)明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01） ；實(shí)驗(yàn)組p-Akt 于4 h 和8 h 明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。Akt 蛋白表達(dá)隨術(shù)后時(shí)間的延長無明顯變化，與正常對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后4 h wortmannin 干預(yù)組的HIF-1α 蛋白的表達(dá)明顯下降，與溶劑干預(yù)組及實(shí)驗(yàn)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。 結(jié)論 發(fā)育期HIBD 時(shí)，可激活PI3K/Akt 信號通路，并誘導(dǎo)HIF-1α 表達(dá)增加，可針對PI3K/Akt 信號通路和HIF-1α 尋找新生兒HIBD新的治療靶點(diǎn)。
目的 探討缺氧缺血性腦損傷(hypoxia ischemia brain damage, HIBD)時(shí)缺氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia inducible factor 1α, HIF 1α）表達(dá)與神經(jīng)元凋亡的相關(guān)性，探索HIF-1α在神經(jīng)元凋亡中的作用及對損傷神經(jīng)修復(fù)重建的意義。方法 新生10 d SD大鼠40只，隨機(jī)分為對照組和實(shí)驗(yàn)組，每組20只。實(shí)驗(yàn)組在乙醚麻醉下行右側(cè)頸總動脈結(jié)扎，氮氧混合氣（92%氮?dú)狻?%氧氣 ）缺氧2.5h，即為HIBD模型；對照組分離頸總動脈，不結(jié)扎，不作缺氧處理。分別于術(shù)后4、8、24、48及72h處死兩組動物取腦組織，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測HIF-1α、活化的半胱天冬氨酸酶3（cleaved caspase 3，CC3）的表達(dá)，應(yīng)用TUNEL檢測凋亡細(xì)胞。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組HIF-1α蛋白表達(dá)在術(shù)后4h明顯升高，8 h達(dá)高峰，24h后下降；CC3蛋白于術(shù)后4 h開始表達(dá)，8 h有少量表達(dá)，24h明顯升高，48h及72h維持較高 水平。對照組各時(shí)間點(diǎn)HIF-1α和CC3均有極少量弱陽性表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組HIF-1α和CC3蛋白表達(dá)明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。TUNEL染色顯示實(shí)驗(yàn)組術(shù)后隨時(shí)間延長陽性細(xì)胞數(shù)逐漸增多，72h達(dá)高峰；但對照組TUNEL陽性細(xì)胞極少。兩組比較差 異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論 HIF-1α與促凋亡蛋白CC3表 達(dá)趨勢相反， HIF-1α對新生兒HIBD神經(jīng)元可能具有保護(hù)作用，可望對缺氧缺血神經(jīng)的修復(fù)重建發(fā)揮一定作用。