華西醫(yī)學(xué)期刊出版社
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找到 作者 包含"方玉" 1條結(jié)果
  • 超濾離心法降低重組人脫細(xì)胞真皮基質(zhì)牛血清白蛋白殘留量檢測(cè)中基質(zhì)效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究

    目的 探討采用超濾離心法減少重組人脫細(xì)胞真皮基質(zhì)(recombination human acellular dermal matrix,rhADM)樣品浸提液對(duì)ELISA 方法檢測(cè)牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)殘留量的基質(zhì)效應(yīng)。 方 法 清洗rhADM 后,制備rhADM 生理鹽水浸提液。取超濾離心管若干,分別加入1 mg/mL BSA 溶液(預(yù)飽和方式1,記作PR1)、10 μg/mL BSA 溶液(預(yù)飽和方式2,記作PR2)和rhADM 浸提液2 mL(記作rhADM1 和rhADM2),1 500 × g 離心20 min,重復(fù)操作3 次后取出離心管內(nèi)管,放入未使用的15 mL 離心管中,在PR1 和PR2 管中加入10 μg/mL BSA 溶液4 mL,rhADM 管中加入rhADM 浸提液4 mL,同上法離心后,收集濾液。用ELISA 法測(cè)定BSA 含量。計(jì)算不同預(yù)飽和方式下10 μg/mL BSA 溶液的BSA 回收率(以未經(jīng)處理的10 μg/mL BSA 溶液作為基礎(chǔ)樣品,分別記作R10 和R20);計(jì)算濾液稀釋倍數(shù)的對(duì)數(shù)與測(cè)定吸光度(A)值的相關(guān)系數(shù),并與未經(jīng)超濾離心處理的浸提液檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。 結(jié)果 采用預(yù)飽和方式1 處理后,PR1 BSA 濃度為(23.80 ± 1.58)μg/mL,R10 為(9.04 ± 0.24)μg/mL,BSA 回收率為263.4% ±16.9%。采用預(yù)飽和方式2 處理后,PR2 BSA 濃度為(8.64 ± 0.24)μg/mL,R20 為(8.12 ± 1.01) μg/ mL,BSA 的回收率為106.5% ± 3.0%。預(yù)飽和方式2 的回收率符合檢測(cè)要求。不同預(yù)飽和方式下BSA 回收率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.01)。經(jīng)超濾離心處理后,濾液稀釋倍數(shù)的對(duì)數(shù)與A 值之間的相關(guān)性明顯提高,相關(guān)系數(shù)由 — 0.727 提高至 — 0.960。超濾處理后的相關(guān)系數(shù)符合檢測(cè)要求。 結(jié)論 超濾離心處理可以有效減少rhADM 樣品浸提液的基質(zhì)效應(yīng)對(duì)BSA 殘留量檢測(cè)的影響;樣品浸提液自身對(duì)超濾離心管的預(yù)飽和處理,可得到較為理想的BSA 回收率。

    發(fā)表時(shí)間:2016-09-01 09:17 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
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