目的 觀察三唑類聯(lián)合棘白菌素類抗真菌藥物對(duì)曲霉的體外抑菌活性。方法 采用EUCAST方法檢測(cè)62株曲霉對(duì)伏立康唑(VRC)、伊曲康唑(ICZ)、卡泊芬凈(CAS)和米卡芬凈(MICA)的體外敏感性,觀察各藥物的100%被抑菌最小濃度(MIC-0),VRC和ICZ的50%被抑菌最小濃度(MIC-2),以及CAS和MICA的最低有效濃度(MEC)。分別以MIC-0和MIC-2與MEC為觀察終點(diǎn),采用棋盤法檢測(cè)VRC或ICZ聯(lián)合CAS或MICA的分?jǐn)?shù)抑菌濃度(FIC)。結(jié)果 以MIC-0為終點(diǎn)的FIC,有2株煙曲霉對(duì)ICZ聯(lián)合CAS或MICA表現(xiàn)為無(wú)關(guān)作用,其他煙曲霉株以及黃曲霉株和黑曲霉株對(duì)VRC或ICZ聯(lián)合CAS或MICA均表現(xiàn)為協(xié)同作用;以MIC-2與MEC為終點(diǎn)的FIC,對(duì)VRC和CAS、VRC和MICA、ICZ和CAS以及ICZ和MICA的聯(lián)合表現(xiàn)為協(xié)同作用的煙曲霉(n=35)分別有16株、21株、11株和14株,黃曲霉(n=20)分別有9株、13株、9株和11株,黑曲霉(n=7)分別有0株、2株、1株和1株。結(jié)論 不同的觀察終點(diǎn),兩藥聯(lián)合的敏感性結(jié)果差異較大,體外無(wú)法判斷三唑類聯(lián)合棘白菌素類抗真菌藥物對(duì)曲霉抑菌活性的影響,需要在侵襲性曲霉病動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步證實(shí)。
目的 研究大鼠哮喘模型接觸煙曲霉菌孢子后的氣道炎癥和氣道反應(yīng)性的改變。方法 70只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為Ⅰ和Ⅱ兩大組（每組35只），每組下分為空白對(duì)照組（5只）、哮喘組（10只）、孢子滴鼻對(duì)照組（10只）和孢子滴鼻哮喘組（10只）。以卵白蛋白（OVA）致敏并激發(fā)建立大鼠哮喘模型，分別在OVA激發(fā)前（Ⅰ組）或激發(fā)后（Ⅱ組）予煙曲霉菌孢子滴鼻。通過(guò)BCA法檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液（BALF）上清中總蛋白濃度以觀察支氣管上皮損傷情況，并進(jìn)行BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類。通過(guò)測(cè)定跨肺壓和氣體流速來(lái)計(jì)算大鼠氣道阻力和予以不同濃度乙酰膽堿（Ach）刺激后的氣道反應(yīng)性變化。結(jié)果 在Ⅰ組中，激發(fā)前孢子滴鼻哮喘組（CA組）BALF上清中總蛋白濃度較未用孢子滴鼻的哮喘組（A1組）明顯增多［（1.125±0.254）μg/mL比（0.825±0.173）μg/mL，Plt;0.01］，且CA組大鼠在給予不同濃度Ach后的氣道阻力［（0.997±0.196）cm H2O?mL-1?s-1，（1.123±0.142） cm H2O?mL-1?s-1，（1.130±0.197）cm H2O?mL-1?s-1］均較A1組[（0.655±0.089）cm H2O?mL-1?s-1，（0.687±0.048）cm H2O?mL-1?s-1，（0.821±0.043）cm H2O?mL-1?s-1]顯著升高（P均lt;0.05）。但在Ⅱ組中，激發(fā)后孢子滴鼻哮喘組（AC組）BALF上清中總蛋白濃度，基礎(chǔ)氣道阻力和給予Ach后氣道阻力與哮喘組（A2組）比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均gt;0.05）。CA組BALF細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞分類與A1組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但AC組BALF中性粒細(xì)胞較A2組明顯升高［（2.488±0.420）×106比（0.936±0.459）×106，Plt;0.05］。結(jié)論 哮喘大鼠在霧化激發(fā)前接觸煙曲霉菌孢子，能加重其支氣管上皮損傷和增加氣道反應(yīng)性。
目的 了解非中性粒細(xì)胞缺乏患者發(fā)生侵襲性曲霉?。↖A）的危險(xiǎn)因素、臨床特征及預(yù)后。方法 根據(jù)歐洲癌癥研究和治療侵襲性真菌感染協(xié)作組以及美國(guó)變態(tài)反應(yīng)和感染性疾病學(xué)會(huì)真菌病研究組（EORTC/MSG）2002年的定義及我國(guó)侵襲性肺曲霉病的分級(jí)診斷標(biāo)準(zhǔn)，納入鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2001年1月~2006年12月診斷的54例IA患者（其中確診9例，臨床診斷30例，擬診15例），進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果 中性粒細(xì)胞缺乏組24例，其中20例為血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者；非中性粒細(xì)胞缺乏組30例，11例為接受激素治療的慢性阻塞性肺疾?。–OPD）患者。發(fā)熱、胸悶、咳嗽、胸痛、咯血為常見(jiàn)癥狀。胸部CT顯示節(jié)段性肺實(shí)變?cè)谥行粤＜?xì)胞缺乏組多見(jiàn)，非中性粒細(xì)胞缺乏組則以多發(fā)結(jié)節(jié)陰影為主。結(jié)節(jié)或?qū)嵶冇皟?nèi)空洞形成較暈輪征、新月征更常見(jiàn)。IA總體病死率達(dá)72.2%，非中性粒細(xì)胞缺乏組高于中性粒細(xì)胞缺乏組（83.3%比58.3%，P=0.042）。預(yù)后危險(xiǎn)因素分析表明，繼發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)IA及延遲診斷與預(yù)后有關(guān)。結(jié)論 非中性粒細(xì)胞缺乏患者發(fā)生IA并非少見(jiàn)，病死率高，接受激素治療的COPD患者是發(fā)生IA的主要危險(xiǎn)因素。
曲霉在自然界中廣泛分布，約20種曲霉能感染人類和動(dòng)物，其中最常見(jiàn)的有煙曲霉、黃曲霉、土曲霉和黑曲霉等。曲霉孢子在空氣中傳播，人吸入后曲霉可以在氣道內(nèi)定植、致敏、感染，當(dāng)人體免疫功能低下時(shí)可產(chǎn)生危及生命的侵襲性肺曲霉?。↖PA）。近年來(lái)IPA發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，已成為僅次于念珠菌病的主要肺部真菌感染性疾病[1]。雖然IPA已成為器官移植受者、惡性血液病和惡性腫瘤患者等高危人群的重要死因，但對(duì)其發(fā)病機(jī)制了解甚少。本文著重論述近年來(lái)IPA發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展。
目的 觀察反復(fù)吸入煙曲霉（AF）孢子對(duì)慢性阻塞性肺疾?。–OPD）大鼠氣道炎癥和重構(gòu)的影響。方法 50只Wistar大鼠隨機(jī)分為A、B、C、D及E組，每組10只。A、B、C和D組用氣管內(nèi)吸入脂多糖聯(lián)合熏香煙的方法建立COPD模型，E組為正常對(duì)照組。建模后A、B和C組分別經(jīng)鼻吸入高濃度AF孢子（1×106cfu/次）、低濃度AF孢子（1×103cfu/次）和生理鹽水100 mL，每周2次，連續(xù)5周；D組無(wú)處理。測(cè)定支氣管肺泡灌洗液（BALF）中白細(xì)胞總數(shù)及分類，白細(xì)胞介素8（IL-8）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子b（TGF-b）的水平；肺組織病理切片HE、PAS和Masson染色，觀察氣道炎癥并行半定量評(píng)分及病理圖像的形態(tài)學(xué)測(cè)量分析。結(jié)果 與E組比較，D組大鼠出現(xiàn)典型COPD病理改變，模型建立成功。A組和B組BALF中白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞百分比均高于C組和D組（P均lt;0.01）；A組和B組BALF中的IL-8和TGF-b濃度均高于C組和D組（P均lt;0.01）；A組的氣道炎癥評(píng)分高于B、C和D組（P均lt;0.01）；A組和B組的管壁總厚度（WAt/Pbm）、平滑肌層厚度（WAm/Pbm）、管壁膠原沉積厚度（WCt/Pbm）、管壁外層膠原沉積厚度（WCo/Pbm）及杯狀細(xì)胞占上皮細(xì)胞比例均高于C組和D組（P均lt;0.01）；A組和B組BALF中IL-8與中性粒細(xì)胞百分比、氣道炎癥評(píng)分及杯狀細(xì)胞占上皮細(xì)胞百分比呈正相關(guān)（r=0.856，Plt;0.01；r＝0.884，Plt;0.01；r=0.702，Plt;0.05）；TGF-b與WAt/Pbm、WCt/Pbm、WCo/Pbm及杯狀細(xì)胞占上皮細(xì)胞百分比呈正相關(guān)（r=0.706，Plt;0.05；r=0.802，Plt;0.01；r=0.876，Plt;0.01；r=0.713，Plt;0.05）。結(jié)論 反復(fù)吸入AF孢子可加重COPD大鼠氣道炎癥，并促進(jìn)氣道重構(gòu)。
目的 探討COPD 患者并發(fā)持續(xù)喘息與痰真菌培養(yǎng)陽(yáng)性之間的相關(guān)性。方法 收集2005 年1 月～2007 年12 月于上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院3 家醫(yī)院呼吸科住院的COPD 急性加重患者的病史資料, 進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果 共收集到符合入選標(biāo)準(zhǔn)的COPD 持續(xù)喘息組患者35 例, COPD非喘息組患者43 例。持續(xù)喘息組中32 例( 91. 4% ) 痰真菌培養(yǎng)陽(yáng)性, 非喘息組中11 例( 25. 6% ) 陽(yáng)性, 兩組比較差異顯著( P lt;0. 01) 。細(xì)菌陽(yáng)性率無(wú)顯著差異( 28. 6% 比39. 5% , P gt;0. 05) 。在真菌的菌種構(gòu)成方面, 持續(xù)喘息組32 例痰真菌陽(yáng)性患者中曲霉陽(yáng)性12 例, 非喘息組11 例痰真菌陽(yáng)性患者中未檢出曲霉, 曲霉在兩組中分布有顯著差異( P lt;0. 05) 。持續(xù)喘息組抗真菌治療后癥狀緩解率顯著高于未抗真菌治療者( 81. 0% 比36. 4% ,P lt;0. 05) 。結(jié)論 COPD 患者并發(fā)持續(xù)喘息與真菌, 特別是曲霉在氣道內(nèi)定植感染有關(guān)。
肺曲霉病是由曲霉感染或吸入曲霉病原引起的一組急慢性肺部病變，臨床上一般將肺曲霉病分為曲菌球、變態(tài)反應(yīng)性支氣管肺曲霉病和侵襲性肺曲霉病(IPA)三種類型，其中IPA危害最大、病死率最高。現(xiàn)將復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院呼吸科2005年4月～2007年4月診斷的11例IPA報(bào)告如下。
目的 探討慢性煙曲霉暴露對(duì)哮喘大鼠氣道上皮細(xì)胞損傷及表皮生長(zhǎng)因子受體( EGFR) 表達(dá)的影響。方法 56 只雄性Wistar 大鼠隨機(jī)分為7 組( 每組8 只) : 慢性哮喘組( A 組) , 慢性哮喘+ 煙曲霉孢子吸入1 周( B 組) 、3 周( C 組) 和5 周( D 組) 組, 慢性哮喘+ 生理鹽水吸入組( E 組) , 卵白蛋白( OVA) 致敏生理鹽水激發(fā)組( F 組) , OVA 致敏生理鹽水激發(fā)+ 煙曲霉孢子吸入組( G 組) 。測(cè)定大鼠基礎(chǔ)氣道阻力和氣道阻力變化率, ELISA 法測(cè)定BALF 中表皮生長(zhǎng)因子( EGF) 及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α( TGF-α) 濃度, 肺組織切片HE 染色觀察氣道上皮細(xì)胞損傷脫落程度, 過(guò)碘酸雪夫染色( PAS) 觀察氣道上皮杯狀細(xì)胞增生程度, 免疫組化染色測(cè)定氣道上皮細(xì)胞EGFR 表達(dá)強(qiáng)度, 免疫印跡測(cè)定肺組織EGFR 蛋白表達(dá)。結(jié)果 B、C、D 組大鼠BALF 中EGF[ ( 51. 72 ±8. 54) 、( 68. 12 ±7. 85) 、( 86. 24 ±9. 12) pg/mL] 、TGF-α[ ( 55. 26 ±9. 30) 、( 75. 58 ±11. 56) 、( 96. 75 ±14. 66) pg/mL] 、脫落上皮/ 氣道上皮[ ( 11. 25 ±3. 12) % 、( 26. 45 ±5. 56) % 、( 28. 50 ±7. 50) % ] 、杯狀細(xì)胞/ 上皮細(xì)胞面積比值[ ( 16. 42 ±5. 24) %、( 22. 64 ±6. 82) % 、( 36. 38 ±9. 21) % ] 、氣道上皮細(xì)胞EGFR 陽(yáng)性信號(hào)累積光密度( IOD) 值( 82 ±15、120 ±19、165 ±21) 、肺組織EGFR 蛋白表達(dá)IOD 值( 0. 91 ±0. 26、1. 61 ±0. 52、2. 52 ±0. 78) 均高于A、E、F 及G 組( P lt;0. 05 或lt;0. 01) 。C 和D 組大鼠氣道阻力變化率[ ( 61. 91 ±5. 26) % 、( 84. 69 ±6. 38) % ] 均高于A、E、F 及G 組( P 值分別lt; 0. 05 或lt; 0. 01) 。氣道上皮細(xì)胞EGFR 表達(dá)IOD 值與脫落上皮/ 氣道上皮( % ) 及杯狀細(xì)胞/ 上皮細(xì)胞面積比值( % ) 呈正相關(guān)( r =0. 692, P lt;0. 01; r = 0. 657, P lt; 0. 01) 。結(jié)論 慢性煙曲霉暴露加重哮喘大鼠氣道上皮細(xì)胞損傷, 上調(diào)哮喘大鼠氣道上皮細(xì)胞EGFR 表達(dá), 促進(jìn)杯狀細(xì)胞增生, 加重氣道高反應(yīng)性。
隨著免疫抑制人群的增多、檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展, 深部真菌感染日益受到人們的關(guān)注。真菌中的曲霉屬成了這些免疫功能低下患者致病性感染的重要原因, 而煙曲霉在侵襲性曲霉病例中最常見(jiàn)。侵襲力是煙曲霉菌極為重要的致病原因;病原菌侵入上皮、內(nèi)皮細(xì)胞等組織細(xì)胞后才導(dǎo)致了可怕的侵襲性感染。從上世紀(jì)90 年代來(lái), 對(duì)于侵襲的研究已逐步深入, 為探討復(fù)雜的致病機(jī)制打下了基礎(chǔ)。侵襲性煙曲霉病一般的致病過(guò)程認(rèn)為是煙曲霉孢子被宿主吸入下呼吸道, 侵入呼吸道上皮細(xì)胞后發(fā)育成菌絲, 菌絲進(jìn)一步生長(zhǎng), 可侵入血管、進(jìn)入血液, 造成全身播散[ 1] 。因此曲霉與宿主細(xì)胞( 上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等) 的相互作用成了致病過(guò)程的重要環(huán)節(jié)。目前對(duì)病原體與宿主細(xì)胞作用的研究取得了一些進(jìn)展, 對(duì)闡明致病機(jī)制、研究治療靶點(diǎn)等有重要意義。
目的 通過(guò)建立煙曲霉菌絲感染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞( HUVEC) 的體外模型, 觀察煙曲霉菌絲感染后HUVEC 表達(dá)血管假性血友病因子( vWF) 的變化, 以及用不同干預(yù)因素處理對(duì)HUVEC表達(dá)vWF 的影響, 以探討侵襲性曲霉病血管侵襲的機(jī)制。方法 實(shí)驗(yàn)分六組, 即空白對(duì)照組、TNF-α組、煙曲霉菌絲組、細(xì)胞松弛素D組、N-鈣黏蛋白抗體組和地塞米松組, 分別于2、6、12 及18 h 提取細(xì)胞培養(yǎng)上清液, 采用ELISA 法檢測(cè)vWF濃度。結(jié)果 與2 h 比較, 空白對(duì)照組和TNF-α組的vWF表達(dá)量在18 h 增加( P lt;0. 05) , 其余各組vWF表達(dá)量在6、12 及18 h 均增加( P lt;0. 05) ; 各實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組比較, 除N-鈣黏蛋白抗體組HUVEC 的vWF表達(dá)量在2 h無(wú)明顯變化外, 其余各時(shí)間點(diǎn)vWF表達(dá)量均升高( P lt;0. 05) 。TNF-α組HUVEC 的vWF 表達(dá)量在2 h 高于煙曲霉菌絲組, 而在18 h 低于煙曲霉菌絲組。N-鈣黏蛋白抗體組HUVEC 的vWF 表達(dá)量在2 h 和6 h 分別低于煙曲霉菌絲組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)。細(xì)胞松弛素D 組和地塞米松組vWF 在各時(shí)間點(diǎn)與煙曲霉菌絲組的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 煙曲霉菌絲感染后, HUVEC 過(guò)度表達(dá)vWF, N-鈣黏蛋白單克隆抗體可減少vWF 的表達(dá), 而細(xì)胞松弛素D 和地塞米松對(duì)vWF的表達(dá)無(wú)明顯影響。