目的 探討周期性力學(xué)刺激對(duì)體外培養(yǎng)的成肌細(xì)胞自身抗原表達(dá)的影響。 方法 取C2C12細(xì)胞根據(jù)處理方法不同分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組，其中實(shí)驗(yàn)組分為4個(gè)亞組，即2、4、6 d周期性拉伸組（2、4、6 d拉伸組）及1 d拉伸組。2、4、6 d拉伸組：細(xì)胞置于Flexercell 5000柔性基底加載系統(tǒng)，以0.25 Hz拉伸頻率、10%拉伸幅度進(jìn)行每天2 h應(yīng)力加載，連續(xù)加載2、4、6 d；1 d拉伸組：細(xì)胞置于Flexercell 5000柔性基底加載系統(tǒng)，以1 Hz拉伸頻率、15%拉伸幅度拉伸1 h，23 h后收集細(xì)胞；對(duì)照組：細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)1、2、4、6 d。培養(yǎng)期間于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，Western blot檢測(cè)自身抗原DNA依賴蛋白激酶催化亞基（Ku/the catalytic subunit of DNA-dependent protein kinase，DNA-PKcs）、Mi-2（reconfigurable components deacetylase complexes of NuRD）、U1-70（A part of ATP-dependent DNA helicaseⅡ）、組氨酰-tRNA合成酶（histidyl tRNA synthetase，HRS）表達(dá)情況。 結(jié)果 經(jīng)培養(yǎng)后，1 d拉伸組可見脫落細(xì)胞，對(duì)照組1 d時(shí)無細(xì)胞脫落；2 d拉伸組細(xì)胞增殖較對(duì)照組2 d時(shí)明顯；4 d拉伸組細(xì)胞出現(xiàn)分化，6 d拉伸組細(xì)胞部分融合，與對(duì)照組4、6 d時(shí)情況一致。1 d拉伸組細(xì)胞經(jīng)單次拉伸后出現(xiàn)凋亡，相對(duì)DNA增殖指數(shù)（relative DNA proliferation index，DPI）與對(duì)照組1 d時(shí)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.346，P=0.747）。經(jīng)周期性拉伸后，2、4 d拉伸組DPI較對(duì)照組2、4 d時(shí)顯著提高（P lt; 0.05），6 d拉伸組與對(duì)照組6 d時(shí)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.191，P=0.303）。2 d拉伸組DNA-PKcs、Mi-2、HRS和U1-70蛋白相對(duì)表達(dá)量均較對(duì)照組2 d時(shí)明顯降低（P lt; 0.05）； 4 d拉伸組與對(duì)照組4 d時(shí)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。4 d拉伸組各抗原蛋白相對(duì)表達(dá)量均較2 d拉伸組顯著增加（P lt; 0.05），而對(duì)照組4 d 時(shí)均較2 d時(shí)顯著降低（P lt; 0.05）。 結(jié)論 短期力學(xué)刺激可以抑制成肌細(xì)胞自身抗原表達(dá)，但隨時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞分化融合以及對(duì)力學(xué)刺激的適應(yīng)使其對(duì)自身抗原表達(dá)抑制作用減弱。
目的 探討不同頻率的周期性應(yīng)力加載對(duì)體外培養(yǎng)多層肌管極性與分化的影響，篩選優(yōu)化的肌組織體外應(yīng)力加載培養(yǎng)條件。 方法 體外培養(yǎng)C2C12 成肌細(xì)胞于Sylgard 184 鑄型凹槽誘導(dǎo)分化形成多層肌管組織，采用自制體外細(xì)胞拉伸 儀，對(duì)培養(yǎng)并分化的肌管進(jìn)行間歇性應(yīng)力加載：加載幅度10%，加載頻率分別為0（A 組）、0.25（B 組）、0.50（C 組）、1.00 Hz（D 組），加載時(shí)間3 次/d，每次1 h。連續(xù)加載5、7、10 d 時(shí)，觀察各組肌管形態(tài)； RT-PCR 和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time fl uorescent quantitative PCR，QRT-PCR）分析檢測(cè)成肌相關(guān)基因成肌分化抗原（myogenic differentiation antigen，MyoD）、肌細(xì)胞生成素（Myogenin）、結(jié)蛋白（Desmin）、肌球重鏈蛋白（myosin heavy chain，MyHC） mRNA 的表達(dá)差異。 結(jié)果 倒置相差顯微鏡觀察示，應(yīng)力加載促進(jìn)各組肌管的極性融合及數(shù)量增加，其中B 組加載培養(yǎng)7 d 時(shí)，多層肌管排列緊密，極性顯著。加載條件能促進(jìn)成肌相關(guān)基因mRNA 的表達(dá)：組內(nèi)隨加載時(shí)間延長(zhǎng)，各組MyoD 的mRNA 表達(dá)逐漸下降，7、10 d 與5 d 比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；Myogenin、Desmin、MyHC 的mRNA 表達(dá)呈先升高后降低趨勢(shì)，以7 d 表達(dá)量最高；B 組除7 d 與10 d Desmin 的mRNA 表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）外，其余各時(shí)間點(diǎn)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。同時(shí)間點(diǎn)隨加載頻率增加，MyoD、Myogenin、Desmin、MyHC 的mRNA 表達(dá)呈先升高后降低趨勢(shì)，以B 組表達(dá)量最高；除5 d B、C 組Desmin 和10 d A、B 組MyHC 的mRNA 表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05） 外，其余各組與B組各相關(guān)基因mRNA表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 低頻（0.25 Hz）、適時(shí)（7 d）的周期性應(yīng)力加載有利于生長(zhǎng)于Sylgard 184 彈性材料表面的多層肌管極性分化，但隨著應(yīng)力加載時(shí)間延長(zhǎng)，肌管的老化加速。