目的 組織工程皮膚已逐漸應用于臨床，但其免疫原性仍存在爭議。通過重度聯(lián)合免疫缺陷（severe combined immunodeficiency，SCID）小鼠重建人免疫系統(tǒng)，觀察移植的組織工程皮膚的免疫排斥情況。 方法 按朱堂友等的方法體外構建組織工程皮膚和無細胞真皮基質(zhì)。取雄性4 ～ 6 周齡SCID 小鼠20 只，體重16 ～ 17 g，隨機分為4 組（n=5）。A、B、C 組于小鼠側腹部切除1 cm × 1 cm 大小全層皮膚后，A 組移植組織工程皮膚，B 組移植自愿捐贈的人包皮，C 組將無細胞真皮基質(zhì)埋植皮下；D 組為正常對照，不作處理。移植術后2 周A、B、C 組取材行HE 染色，觀察各移植材料存活情況。并于各組小鼠腹腔注射3 × 107 個人脾淋巴細胞，4 周內(nèi)定期行大體、組織學、免疫組織化學、人IgG 免疫熒光染色，觀察是否發(fā)生免疫排斥反應。 結果 HE 染色示A 組組織工程皮膚具有真、表皮雙層結構，類似人正常皮膚組織；B 組人包皮仍保持人皮膚的正常組織結構；C 組無細胞真皮基質(zhì)位于原位，無明顯被降解跡象。植入人脾淋巴細胞后，A、C、D 組HE 染色未見明顯炎性細胞浸潤；同時間點B 組炎性細胞浸潤程度均明顯高于其他3 組，比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。A 組植入人脾淋巴細胞2 周后表皮全層細胞抗人角蛋白14 單克隆抗體（monoclonal anti-body，mAb）染色陽性，抗人Ⅳ型膠原mAb 染色陽性；A、C、D 組抗人CD3、CD4、CD8 mAb 染色均未見陽性細胞；B 組2 周后真皮、皮下組織中大量抗人CD3、CD4 和CD8 mAb 染色陽性細胞。A、C、D 組于植入人脾淋巴細胞后人IgG 免疫熒光染色均未見陽性結果；B 組3 周后真皮深部大血管管壁人IgG mAb 免疫熒光染色陽性。 結論 組織工程皮膚免疫原性較弱，植入SCID 小鼠后未見明顯的免疫排斥反應。
研究肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）對培養(yǎng)的人外泌汗腺上皮細胞（human eccrine sweat gland epithelial cells，hESGc）的促增殖作用，以及細胞內(nèi)磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2，p-ERK1/2）蛋白的表達。 方法 在無血清角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)基（keratinocyte serum free medium，KSFM）中培養(yǎng)hESGc，取第1 代細胞進行實驗。免疫組織化學染色檢測C-met 表達。MTT 法檢測HGF 對hESGc 的促增殖作用，實驗分為3 組：空白組、對照組和實驗組。空白組僅含200 μL KSFM；對照組于96 孔板以2 × 103 個/ 孔接種hESGc，并加入200 μL KSFM；實驗組于96 孔板以2 × 103 個/ 孔接種hESGc 并加入200 μLKSFM 后，再分別加入不同濃度（2、20、40、80 ng/mL）HGF。實驗組于加入各濃度HGF 前以及加入后2、4 d，觀察細胞增殖情況。實驗組于加入40 ng/mL HGF 后即刻，5、30、90 和120 min，采用Western blot 方法檢測細胞內(nèi)p-ERK1/2表達規(guī)律。 結 果 hESGc 抗-C-met 免疫組織化學染色胞漿可見陽性染色，細胞核染色為藍色。MTT 法檢測示40、80 ng/ mLHGF 對hESGc 具有顯著促增殖作用（P lt; 0.05）。在含40 ng/mL HGF 的KSFM中培養(yǎng)2 d，吸光度（A）值為0.239 3 ±0.070 9，增殖率為74.2%，對照組A 值為0.137 4 ± 0.029 0；培養(yǎng)4 d，40 ng/mL HGF 實驗組A 值為0.287 8 ± 0.074 3，增殖率為74.8%，對照組A 值為0.164 6 ± 0.035 0，兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。在含80 ng/mL HGF 的KSFM中培養(yǎng)2 d，A 值為0.212 3 ± 0.059 2，增殖率為54.5%；培養(yǎng)4 d，80 ng/mL HGF 實驗組A 值為0.231 0 ± 0.056 7，增殖率為40.3%；與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。p-ERK1/2 在40 ng/mL HGF 刺激5 min 后表達達高峰，相對積分吸光度值（relative integral absorbance，RIA）為0.593 2 ± 0.192 2，較刺激后即刻增加8.1 倍（P lt; 0.01）；刺激30、90 及120 min 后RIA 與刺激后即刻比較，差異無統(tǒng)計學意義（Pgt; 0.05） 結論 HGF 可促進hESGc 增殖，并能引起ERK1/2蛋白磷酸化。