目的 組織工程皮膚已逐漸應(yīng)用于臨床，但其免疫原性仍存在爭(zhēng)議。通過重度聯(lián)合免疫缺陷（severe combined immunodeficiency，SCID）小鼠重建人免疫系統(tǒng)，觀察移植的組織工程皮膚的免疫排斥情況。 方法 按朱堂友等的方法體外構(gòu)建組織工程皮膚和無(wú)細(xì)胞真皮基質(zhì)。取雄性4 ～ 6 周齡SCID 小鼠20 只，體重16 ～ 17 g，隨機(jī)分為4 組（n=5）。A、B、C 組于小鼠側(cè)腹部切除1 cm × 1 cm 大小全層皮膚后，A 組移植組織工程皮膚，B 組移植自愿捐贈(zèng)的人包皮，C 組將無(wú)細(xì)胞真皮基質(zhì)埋植皮下；D 組為正常對(duì)照，不作處理。移植術(shù)后2 周A、B、C 組取材行HE 染色，觀察各移植材料存活情況。并于各組小鼠腹腔注射3 × 107 個(gè)人脾淋巴細(xì)胞，4 周內(nèi)定期行大體、組織學(xué)、免疫組織化學(xué)、人IgG 免疫熒光染色，觀察是否發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。 結(jié)果 HE 染色示A 組組織工程皮膚具有真、表皮雙層結(jié)構(gòu)，類似人正常皮膚組織；B 組人包皮仍保持人皮膚的正常組織結(jié)構(gòu)；C 組無(wú)細(xì)胞真皮基質(zhì)位于原位，無(wú)明顯被降解跡象。植入人脾淋巴細(xì)胞后，A、C、D 組HE 染色未見明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；同時(shí)間點(diǎn)B 組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度均明顯高于其他3 組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。A 組植入人脾淋巴細(xì)胞2 周后表皮全層細(xì)胞抗人角蛋白14 單克隆抗體（monoclonal anti-body，mAb）染色陽(yáng)性，抗人Ⅳ型膠原mAb 染色陽(yáng)性；A、C、D 組抗人CD3、CD4、CD8 mAb 染色均未見陽(yáng)性細(xì)胞；B 組2 周后真皮、皮下組織中大量抗人CD3、CD4 和CD8 mAb 染色陽(yáng)性細(xì)胞。A、C、D 組于植入人脾淋巴細(xì)胞后人IgG 免疫熒光染色均未見陽(yáng)性結(jié)果；B 組3 周后真皮深部大血管管壁人IgG mAb 免疫熒光染色陽(yáng)性。 結(jié)論 組織工程皮膚免疫原性較弱，植入SCID 小鼠后未見明顯的免疫排斥反應(yīng)。
研究肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）對(duì)培養(yǎng)的人外泌汗腺上皮細(xì)胞（human eccrine sweat gland epithelial cells，hESGc）的促增殖作用，以及細(xì)胞內(nèi)磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2，p-ERK1/2）蛋白的表達(dá)。 方法 在無(wú)血清角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)基（keratinocyte serum free medium，KSFM）中培養(yǎng)hESGc，取第1 代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)C-met 表達(dá)。MTT 法檢測(cè)HGF 對(duì)hESGc 的促增殖作用，實(shí)驗(yàn)分為3 組：空白組、對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組?？瞻捉M僅含200 μL KSFM；對(duì)照組于96 孔板以2 × 103 個(gè)/ 孔接種hESGc，并加入200 μL KSFM；實(shí)驗(yàn)組于96 孔板以2 × 103 個(gè)/ 孔接種hESGc 并加入200 μLKSFM 后，再分別加入不同濃度（2、20、40、80 ng/mL）HGF。實(shí)驗(yàn)組于加入各濃度HGF 前以及加入后2、4 d，觀察細(xì)胞增殖情況。實(shí)驗(yàn)組于加入40 ng/mL HGF 后即刻，5、30、90 和120 min，采用Western blot 方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)p-ERK1/2表達(dá)規(guī)律。 結(jié) 果 hESGc 抗-C-met 免疫組織化學(xué)染色胞漿可見陽(yáng)性染色，細(xì)胞核染色為藍(lán)色。MTT 法檢測(cè)示40、80 ng/ mLHGF 對(duì)hESGc 具有顯著促增殖作用（P lt; 0.05）。在含40 ng/mL HGF 的KSFM中培養(yǎng)2 d，吸光度（A）值為0.239 3 ±0.070 9，增殖率為74.2%，對(duì)照組A 值為0.137 4 ± 0.029 0；培養(yǎng)4 d，40 ng/mL HGF 實(shí)驗(yàn)組A 值為0.287 8 ± 0.074 3，增殖率為74.8%，對(duì)照組A 值為0.164 6 ± 0.035 0，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。在含80 ng/mL HGF 的KSFM中培養(yǎng)2 d，A 值為0.212 3 ± 0.059 2，增殖率為54.5%；培養(yǎng)4 d，80 ng/mL HGF 實(shí)驗(yàn)組A 值為0.231 0 ± 0.056 7，增殖率為40.3%；與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。p-ERK1/2 在40 ng/mL HGF 刺激5 min 后表達(dá)達(dá)高峰，相對(duì)積分吸光度值（relative integral absorbance，RIA）為0.593 2 ± 0.192 2，較刺激后即刻增加8.1 倍（P lt; 0.01）；刺激30、90 及120 min 后RIA 與刺激后即刻比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt; 0.05） 結(jié)論 HGF 可促進(jìn)hESGc 增殖，并能引起ERK1/2蛋白磷酸化。