目的 探討大鼠血清體外擴(kuò)增BMSCs 的可能性，及淤膽大鼠血清和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）體外誘導(dǎo)其分化為肝細(xì)胞，解決肝組織工程細(xì)胞來(lái)源短缺的可行性。 方法 取6 周齡健康雌性Wistar 大鼠股骨和脛骨骨髓細(xì)胞，分離、純化并傳代培養(yǎng)BMSCs。取12 ～ 14 周齡健康Wistar 大鼠40 只，隨機(jī)分為兩組（n=20），制備正常及淤膽大鼠血清。取第3 代BMSCs 按培養(yǎng)液不同分組：A 組，DMEM 加10%FBS；B 組，肝細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基（hepatocyte growth medium，HGM）加5%FBS；C 組，HGM 加5% 正常大鼠血清；D 組，HGM 加5% 淤膽大鼠血清；E 組，HGM 加5% 淤膽大鼠血清、25 μg/L HGF。觀察各組誘導(dǎo)培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)胞形態(tài)變化，MTT 法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）、細(xì)胞角蛋白18（cytokeratin 18，CK18）表達(dá)，高碘酸- 希夫染色檢測(cè)糖原表達(dá)，脲酶- 谷氨酰脫氫酶法檢測(cè)上清液尿素含量。 結(jié)果 誘導(dǎo)培養(yǎng)過(guò)程中D、E 組出現(xiàn)多角形及雙核細(xì)胞，A、B、C 組細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯變化。MTT 生長(zhǎng)曲線顯示C 組細(xì)胞生長(zhǎng)速度最快，B 組最慢，與A、D、E 組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05），A、D、E 組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。D、E 組于誘導(dǎo)培養(yǎng)7 d 開始出現(xiàn)AFP 及CK18 陽(yáng)性表達(dá)，14 d 開始出現(xiàn)糖原陽(yáng)性表達(dá)，同時(shí)間點(diǎn)E 組陽(yáng)性表達(dá)率高于D 組（P lt; 0.05）；D、E 組上清液中尿素含量隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，同時(shí)間點(diǎn)E 組高于D 組（P lt; 0.05）。各時(shí)間點(diǎn)A、B、C 組均未見AFP、CK18、糖原陽(yáng)性表達(dá)，尿素濃度無(wú)明顯變化。 結(jié)論 正常大鼠血清能明顯促進(jìn)BMSCs 增殖；淤膽大鼠血清對(duì)BMSCs 有一定促增殖作用，且能有效誘導(dǎo)其向肝細(xì)胞分化；聯(lián)合使用淤膽血清和HGF 能提高細(xì)胞分化率。
目的 系統(tǒng)評(píng)價(jià)國(guó)內(nèi)有關(guān)套扎治療與硬化劑治療肝硬化食管靜脈曲張出血的有效性和安全性。方法 計(jì)算機(jī)檢索CBMdisc（1979～2006）和CNKI（1994～2006），收集有關(guān)套扎與硬化劑比較治療肝硬化食管靜脈曲張出血的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（RCT）和半隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（CCT），由兩名評(píng)價(jià)員獨(dú)立對(duì)納入文獻(xiàn)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)和數(shù)據(jù)提取，并使用RevMan4.2.7軟件進(jìn)行Meta分析。結(jié)果 共納入9個(gè)RCT，包括1 371例患者，其中套扎組688例，硬化劑組683例。Meta分析結(jié)果顯示：對(duì)于死亡率，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[RR=0.60，95%CI（0.36，0.98）]，套扎治療組低于硬化劑治療組；對(duì)于急診止血率、出血復(fù)發(fā)率和并發(fā)癥發(fā)生率，套扎治療組也顯示出更好的療效趨勢(shì)；而對(duì)于曲張靜脈消失率和曲張靜脈復(fù)發(fā)率，硬化劑治療組則顯示出更好的療效趨勢(shì)。結(jié)論 在治療肝硬化食管靜脈曲張出血患者時(shí)，套扎較硬化劑治療顯示出更好的療效及更少的并發(fā)癥。但由于納入研究質(zhì)量不高，這一結(jié)論的強(qiáng)度受到一定的限制，尚需今后開展高質(zhì)量隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證。
【摘要】 目的 探討丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS4B對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)p53表達(dá)的影響，以及在肝癌發(fā)生中的作用與機(jī)制。 方法 設(shè)置空白對(duì)照組、空白載體組、轉(zhuǎn)染NS4B組、轉(zhuǎn)染p53組、共轉(zhuǎn)染NS4B及p53組。使用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法，轉(zhuǎn)染丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白重組質(zhì)粒PCXN2-NS4B及突變型p53基因重組質(zhì)粒pC53-CX22AN3進(jìn)入Chang肝細(xì)胞內(nèi)，并用G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞。采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)p53表達(dá)率。 結(jié)果 空白對(duì)照組無(wú)p53表達(dá)，空白載體組及轉(zhuǎn)染NS4B組呈弱陽(yáng)性表達(dá)，轉(zhuǎn)染p53組及共轉(zhuǎn)染組呈陽(yáng)性表達(dá)；轉(zhuǎn)染p53組、共轉(zhuǎn)染組分別與空白對(duì)照組、空白載體組及轉(zhuǎn)染NS4B組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （Plt;0.05）。 結(jié)論 NS4B可能抑制p53表達(dá)，也可能阻止其進(jìn)入細(xì)胞核，但NS4B與突變型p53關(guān)系不明確。NS4B導(dǎo)致肝細(xì)胞異常增生，誘導(dǎo)肝癌發(fā)生可能不依賴p53的異常表達(dá)及突變。【Abstract】 Objective To investigate the effect of hepatitis C Virus on-structural protein 4B(HCV NS4B) on expression of p53 in hepatic cell, and to study the role and mechanism in development of hepatocellular carcinoma. Methods The experiment was divided into negative control, pure vector PCXN2, PCXN2-NS4B, PC53-cx22AN3, and co-transfection group. Recombinant plasmid PCXN2-NS4B and mutant p53 gene--PC53-cx22AN3, PC53-cx22AN3 with PCXN2-NS4B, blank vectors were transfected into Chang liver cell by liposome-mediated transfection respectively. Positive cells were screened by G418. The expression rate of p53 was measured by immunocytochemistry. Result No expression rate of p53 gene in control group was found, lower positive expression in group PCXN2 and PCXN2-NS4B. The expression of p53 gene in group PC53-CX22AN3 and co-transfection was ber than the others (Plt;0.005). Conclusion HCV-NS4B may inhibit the expression of p53 gene, and it may play a crucial role in inhibiting p53 transfered to hepatic cells nuclear. But it isn’t clear that the. HCV-NS4B can enhance the role of mutant p53 gene. It suggested that HCV-NS4B induce proliferation of hepatic cell not through regulating the expression of p53.