目的 構建在視網(wǎng)膜組織特異性表達的人血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）165基因。 方法 用聚合酶鏈反應(PCR)方法從BLAB/C鼠全基因組擴增能在視網(wǎng)膜組織特異性表達的rho啟動子，經(jīng)限制性內(nèi)切酶純化后克隆于質(zhì)粒pcDNA3.1+-VEGF165中，建立重組質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165，通過限制性內(nèi)切酶酶切分析及PCR鑒定篩選出正確重組質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165,由jetPEI介導轉(zhuǎn)染人視網(wǎng)膜色素上皮細胞和人臍靜脈內(nèi)皮細胞，并通過免疫組織化學染色以及繪制細胞生長曲線檢測在人視網(wǎng)膜色素上皮細胞和人臍靜脈內(nèi)皮細胞中VEGF蛋白的表達。 結果 在人視網(wǎng)膜色素上皮細胞中，重組質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165比質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165的VEGF蛋白表達強，在人臍靜脈內(nèi)皮細胞，兩者的表達量無明顯差別。 結論 pcDNA3.1+-rho-VEGF165載體的構建為進一步研究VEGF在視網(wǎng)膜新生血管形成中的致病機理提供基礎材料，并為進一步建立視網(wǎng)膜特異性表達VEGF轉(zhuǎn)基因鼠模型建立了基礎。 (中華眼底病雜志,2005,21:106-109)
目的 觀察阻斷p38絲裂素活化蛋白激酶(MAPK)信號通路對糖尿病早期Wistar大鼠血視網(wǎng)膜屏障（BRB）和視網(wǎng)膜節(jié)細胞（RGC）的保護作用。方法 將60只大鼠分為正常對照組及糖尿病組，每組各30只大鼠。對糖尿病組大鼠進行鏈脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病模型，血糖值＞16.7 mmol/L為模型建立成功的判斷標準。正常對照組大鼠腹腔注射等量的枸櫞酸鈉溶液作為對照。采用IgG滲漏法量化BRB功能破壞和血管滲漏，免疫組織化學法檢測視網(wǎng)膜上caspase-3和 血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的熒光表達。糖尿病鼠建模后2周，對實驗組行玻璃體腔注射p38 MAPK抑制劑 SB203580，注射后6周檢測caspase-3和 VEGF的熒光表達，caspase-3免疫熒光染色法計數(shù)RGC凋亡數(shù)量。采用SPSS 13.0應用軟件進行統(tǒng)計分析。結果 正常對照組大鼠中，IgG 染色局限于血管腔內(nèi)，幾乎沒有滲漏的跡象。糖尿病鼠建模后8周，IgG滲漏明顯增加。SB203580璃體腔注射6周后的糖尿病鼠IgG 滲漏減少明顯。熒光免疫組織化學及相對定量分析結果顯示，SB203580玻璃體腔注射6周后的糖尿病鼠視網(wǎng)膜上VEGF熒光表達呈下降趨勢，VEGF相對熒光量從糖尿病鼠8周時較正常對照組高2.9倍減少到僅高于正常對照組1.8倍，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義（t＝5.203，P＜0.01）。caspase-3免疫熒光染色法RGC凋亡計數(shù)結果顯示，SB203580玻璃體腔注射6周后，caspase-3陽性節(jié)細胞凋亡數(shù)與未注射SB203580相比明顯減少，兩者差異有統(tǒng)計學意義（t＝5.731，P＜0.01）。結論 p38 MAPK抑制劑 SB203580能夠減輕糖尿病早期血視網(wǎng)膜屏障的破壞和視網(wǎng)膜節(jié)細胞的調(diào)亡，提示p38 MAPK信號通路在糖尿病早期對DR的發(fā)展起著一定的作用。