目的 檢測體外構建的組織工程骨移植后兔外周血T細胞亞群的變化，對移植組織進行組織學觀察，探討以生物衍生材料作為骨組織工程支架材料的可行性。 方法 組織工程骨以兔骨膜來源的成骨細胞為種子細胞，經(jīng)抗原自消化、部分脫鈣、凍干后的異體骨為支架材料于體外構建。將健康新西蘭白兔48只制成1 cm長橈骨缺損模型后，隨機分成A～D 4組，每組12只，分別用部分脫鈣凍干骨（partial demineralized freezedried bone,PDFDB）、組織工程骨、自體骨、同種異體骨植入兔橈骨節(jié)段性缺損。術后1、2、4周取材,用流式細胞儀檢測4種材料移植早期兔外周血T淋巴細胞亞群的變化；通過常規(guī)組織學檢測觀察2、4、8、12周時4種材料的成骨作用。 結果 B組術后2周材料孔隙內(nèi)有成骨細胞和成軟骨細胞，可見骨、軟骨混合性新生物形成，周邊分布有破骨細胞，部分網(wǎng)架呈蠶食狀被破壞吸收。術后4周，形成的新生骨過渡為編織骨。A、B組材料植入后1、2周外周血CD4+和CD8+ T細胞較術前明顯升高(P＜0.05)；術后4周CD4+ T細胞較術前輕度偏高，但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。C組術后CD4+和CD8+ T細胞升高不明顯(P＞0.05)。D組術后1、2、4周外周血CD4+和CD8+ T細胞較術前及其他各組同期均明顯增高(P＜0.05)。 結論 PDFDB為支架材料構建的細胞材料復合物移植后外周血T淋巴細胞增高，但不影響其良好的修復骨缺損能力，生物衍生骨可作為支架材料應用于骨組織工程研究。
目的 研制具有抗感染作用的WO-1生物衍生骨緩釋材料。方法 應用Ⅰ型膠原和同種骨制備膠原生物衍生骨復合材料，將WO-1吸附于膠原生物衍生骨構建成WO-1生物衍生骨緩釋材料，掃描電鏡觀察其形貌特征；將3 H四環(huán)素（45.1GBq/mmol）以WO-1標準品溶液稀釋，吸附于膠原生物衍生骨，測定緩釋材料中WO-1的體外釋放；將WO-1生物衍生骨緩釋材料置入接種金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和綠膿桿菌的培養(yǎng)基中，檢測其體外抑菌能力。將WO-1生物衍生骨植入24只新西蘭大白兔橈骨缺損處，術后9、16、23及30 d各處死2只兔測定血中WO-1的濃度，以及材料周圍肌肉與骨中的WO-1的濃度。結果 WO-1生物衍生骨復合材料保留了天然骨的三維結構，表面有膠狀膜覆蓋；在體外釋放實驗中第1天呈暴發(fā)釋放，以后呈恒定釋放；對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等骨感染的常見致病菌有持久穩(wěn)定的抑菌能力。體內(nèi)實驗中周圍骨組織及肌肉組織中WO-1在各時間點均保持較高的濃度，組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）,而動物血中WO-1濃度較低，與骨及肌肉組織中WO-1濃度相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論 WO-1生物衍生骨緩釋材料具有良好的藥物緩釋功能及較強的抑菌能力。
目的 制備WO-1膠原生物衍生骨復合支架材料，檢測其理化性質(zhì)及力學強度，為骨組織工程研究和應用提供可選擇的支架材料。方法 將同種異體骨、I型膠原、WO-1進行系列理化處理，制成單純生物衍生骨材料、膠原生物衍生骨復合材料及WO-1膠原生物衍生骨復合材料。制備后的材料行大體及掃描電鏡觀察其形貌特征，X線衍射分析材料成分，并對材料的力學性能進行分析測定。結果 單純生物衍生骨材料具有天然骨的網(wǎng)狀孔隙系統(tǒng)；膠原生物衍生骨復合材料具有天然骨的網(wǎng)狀孔隙系統(tǒng)，微孔表面覆蓋膠原膜；WO-1膠原生物衍生組織工程骨復合支架材料具有骨組織的天然網(wǎng)狀孔隙系統(tǒng)，微孔表面可見膠原膜覆蓋。3種材料的孔徑依次為90～700 μm、75～600 μm、80～600 μm；孔隙率依次為87.96%、80.47%、84.29%，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；其主要成分為羥基磷灰石，彎曲強度和壓縮強度無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。結論 WO.1膠原生物衍生骨復合材料與其它兩種材料相同，可作為一種有效的天然組織工程骨支架材料。
目的 探討低溫保存的組織工程骨修復骨缺損的能力及低溫保存的可行性。方法 將人源性生物衍生骨材料復合成骨細胞構建的組織工程骨，在4℃ 和－196℃的溫度環(huán)境中保存3個月和6個月，同時以未行低溫保存的組織工程骨和生物衍生骨材料作為對照，分別修復實驗兔橈骨的長段骨缺損。80只成年日本大耳白兔，隨機分為4個實驗組（左前肢植入材料）：A3組：組織工程骨在4℃ 保存3個月；A6組：組織工程骨在4℃ 保存6個月；B組：組織工程骨在－196℃ 保存3個月；B6組：組織工程骨在－196℃ 保存6個月。２個對照組（右前肢植入材料）：C組：組織工程骨未行低溫保存；D組：單純生物衍生骨材料。于術后2、4、6和12周行大體和組織學觀察，并于6周和12周行X線片檢查和生物力學檢測。結果 術后大體觀察，A3、A6、B3、B6和C組間無顯著差異，D組骨痂少且斷端更為明顯。各時間點組織學觀察，A3、A6、B3、B6和C組植入材料周圍膠原及骨痂均較D組明顯，術后12周組織學評分，D組與其它各組比較 P值＜0.05。X線片示D組植入材料皮質(zhì)骨無明顯變化，骨痂較少；余各組12周植入材料與自體骨融合，髓腔開通，骨折線消失，塑形好。生物力學檢測D組與其它各組比較P值＜0.05。結論 以4℃和-196℃保存方法能有效保存組織工程骨，對修復骨缺損有明顯效果，這一方法適宜推廣應用。
目的 研究組織工程骨體外構建過程中，成骨細胞與生物衍生骨相互作用的基因表達。方法用人胚骨膜來源的成骨細胞與生物衍生骨體外復合培養(yǎng)構建組織工程骨。培養(yǎng)2、4、6、8和10 d，分別提取總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。用熒光及TaqMan探針行實時定量PCR，分別擴增成骨細胞特異轉(zhuǎn)錄因子（Cbfa1）、成骨細胞特異基因（Osterix）、Ⅰ型膠原、骨鈣素（osteocalcin，OC）和整合素α5和β1（Integrin α5 and β1），讀取擴增循環(huán)數(shù)（Ct值），進行統(tǒng)計學分析。以單純培養(yǎng)的成骨細胞作為對照組。 結果 Cbfa1與Osterix變化一致，其中實驗組Osterix在2 d和 8 d的表達均明顯高于對照組（P＜0.05)。Ⅰ型膠原與OC的表達變化一致，實驗組除10 d時，其余各時間段Ⅰ型膠原表達均明顯低于對照組（P＜0.01)。Intgerin的表達始終處于較高水平，在培養(yǎng)最初的2 d，實驗組Integrin β1表達明顯高于對照組（P＜0.01)。結論 成骨細胞與生物衍生材料復合后，重要基因可持續(xù)正常表達。作為支架材料，生物衍生骨在保持成骨細胞性狀、誘導及促進成骨細胞分化方面有明顯優(yōu)越性；它不僅對細胞順利進入增殖狀態(tài)無影響，而且為細胞增殖提供廣闊而有效的空間。成骨細胞最終可良好分化，充分發(fā)揮成骨功能，并有利于成骨細胞黏附，黏附行為貫穿細胞與材料相互作用的整個過程，而并非局限于開始階段。
目的 制備脫細胞人羊膜（HAAM），檢測其細胞相容性和組織相容性，探討其作為組織工程支架材料的可行性。方法 新鮮人羊膜經(jīng)漂洗后戊二醛交聯(lián)，0.5%SDS震搖24小時，胰蛋白酶消化４小時，充分漂洗，冷凍干燥，分裝，環(huán)氧乙烷消毒備用。倒置相差顯微鏡和掃描電鏡觀察表面結構，測量孔徑，并作HE、Mallory染色。體外培養(yǎng)人成纖維細胞并復合于HAAM，倒置相差顯微鏡和掃描電鏡觀察細胞的黏附、生長，四甲基偶氮唑鹽(MTT)法測定HAAM浸提液對培養(yǎng)的人成纖維細胞的細胞毒性。將HAAM植入SD大鼠背部皮下，觀察其組織相容性。結果 HAAM的一面為網(wǎng)狀結構，孔徑為10～80 nm，另一面為致密纖維結構。HE、Mallory染色表明材料無細胞殘留，均為膠原組成。成纖維細胞能在HAAM上黏附、增殖。MTT示材料細胞毒性為0或1級，動物埋置實驗無異常反應。結論 應用去垢劑-酶消化法處理新鮮人羊膜，能有效去除組織中的細胞和可溶性成分，可進一步降低其免疫原性，保留基質(zhì)及網(wǎng)狀結構，有良好的細胞相容性和組織相容性，可作為組織缺損的修復材料及組織工程的膜支架材料。
目的 研究生物衍生羊膜預防SD大鼠跟腱粘連的效果，并為臨床預防術后跟腱粘連提供實驗數(shù)據(jù)。方法 以28只SD大鼠后肢跟腱為實驗模型，切斷并縫合跟腱，實驗側跟腱包裹生物衍生羊膜，對側不包裹作為對照，術后1、2、4、6、8和12周分別取跟腱，大體及組織學觀察跟腱的粘連、愈合情況。結果 術后各時間點兩側跟腱吻合處炎性細胞浸潤情況、跟腱愈合進程無明顯差別，跟腱粘連的半定量評分表明實驗側和對照側差異有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）。結論 生物衍生羊膜能有效預防跟腱粘連，是一種較為理想的預防跟腱粘連的生物材料。
目的 探討運用組織工程軟骨植入修復兔脛骨平臺外側髁全關節(jié)軟骨淺層缺損的可行性。方法 取 2周齡乳兔軟骨細胞體外培養(yǎng)傳代至第 3代后 ,與人胎盤 型膠原蛋白海綿復合后植入成年兔的脛骨體平臺外側髁淺層完全軟骨缺損區(qū) ,并設立空白對照組 ,分別于術后 4、12和 2 4周取材 ,觀察修復效果。結果 實驗組術后 4周缺損表面未見明顯的新生軟骨形成 ;12周 ,缺損表面有少量的新生軟骨形成 ,組織學切片上可見軟骨細胞呈邊緣不規(guī)則的 ,小蜂窩狀結構 ,軟骨細胞周圍有軟骨陷窩形成 ;2 4周 ,缺損表面的新生軟骨較 4、12周的新生軟骨明顯 ,表面光滑 ,且與周圍組織結合緊密 ,但仍存在部分缺損尚未修復。組織學切片上可見軟骨陷窩形成 ,并分泌甲苯胺藍異染的軟骨基質(zhì)。而對照組則均未見明顯的修復。結論 制成的組織工程軟骨對兔脛骨平臺軟骨淺層完全缺損有修復作用 ,但不能完全修復缺損。
目的 探索凍干脫鈣骨基質(zhì) (FDBM)作為組織工程骨支架的可行性。方法 取兔顱骨外膜的成骨細胞 ,經(jīng)傳代培養(yǎng)后作為種子細胞與FDBM于體外聯(lián)合培養(yǎng) ,通過對復合物相差顯微鏡、光鏡及掃描電鏡等觀察 ,了解細胞在材料中的生長情況。結果 經(jīng)系統(tǒng)處理后的FDBM呈現(xiàn)不規(guī)則的網(wǎng) -孔結構,其孔隙直徑為10 0～40 0 μm,孔隙率為70 %。體外復合培養(yǎng) 8小時 ,成骨細胞即開始貼附于FDBM網(wǎng)架上;復合培養(yǎng)7天,分布于支架材料上的成骨細胞迅速分化增殖,分泌細胞外基質(zhì)并形成鈣結節(jié)。結論 FDBM可作為構建組織工程骨的一種較好支架材料。