目的 檢測(cè)體外構(gòu)建的組織工程骨移植后兔外周血T細(xì)胞亞群的變化，對(duì)移植組織進(jìn)行組織學(xué)觀察，探討以生物衍生材料作為骨組織工程支架材料的可行性。 方法 組織工程骨以兔骨膜來(lái)源的成骨細(xì)胞為種子細(xì)胞，經(jīng)抗原自消化、部分脫鈣、凍干后的異體骨為支架材料于體外構(gòu)建。將健康新西蘭白兔48只制成1 cm長(zhǎng)橈骨缺損模型后，隨機(jī)分成A～D 4組，每組12只，分別用部分脫鈣凍干骨（partial demineralized freezedried bone,PDFDB）、組織工程骨、自體骨、同種異體骨植入兔橈骨節(jié)段性缺損。術(shù)后1、2、4周取材,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)4種材料移植早期兔外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化；通過(guò)常規(guī)組織學(xué)檢測(cè)觀察2、4、8、12周時(shí)4種材料的成骨作用。 結(jié)果 B組術(shù)后2周材料孔隙內(nèi)有成骨細(xì)胞和成軟骨細(xì)胞，可見(jiàn)骨、軟骨混合性新生物形成，周邊分布有破骨細(xì)胞，部分網(wǎng)架呈蠶食狀被破壞吸收。術(shù)后4周，形成的新生骨過(guò)渡為編織骨。A、B組材料植入后1、2周外周血CD4+和CD8+ T細(xì)胞較術(shù)前明顯升高(P＜0.05)；術(shù)后4周CD4+ T細(xì)胞較術(shù)前輕度偏高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。C組術(shù)后CD4+和CD8+ T細(xì)胞升高不明顯(P＞0.05)。D組術(shù)后1、2、4周外周血CD4+和CD8+ T細(xì)胞較術(shù)前及其他各組同期均明顯增高(P＜0.05)。 結(jié)論 PDFDB為支架材料構(gòu)建的細(xì)胞材料復(fù)合物移植后外周血T淋巴細(xì)胞增高，但不影響其良好的修復(fù)骨缺損能力，生物衍生骨可作為支架材料應(yīng)用于骨組織工程研究。
目的 研制具有抗感染作用的WO-1生物衍生骨緩釋材料。方法 應(yīng)用Ⅰ型膠原和同種骨制備膠原生物衍生骨復(fù)合材料，將WO-1吸附于膠原生物衍生骨構(gòu)建成WO-1生物衍生骨緩釋材料，掃描電鏡觀察其形貌特征；將3 H四環(huán)素（45.1GBq/mmol）以WO-1標(biāo)準(zhǔn)品溶液稀釋，吸附于膠原生物衍生骨，測(cè)定緩釋材料中WO-1的體外釋放；將WO-1生物衍生骨緩釋材料置入接種金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和綠膿桿菌的培養(yǎng)基中，檢測(cè)其體外抑菌能力。將WO-1生物衍生骨植入24只新西蘭大白兔橈骨缺損處，術(shù)后9、16、23及30 d各處死2只兔測(cè)定血中WO-1的濃度，以及材料周圍肌肉與骨中的WO-1的濃度。結(jié)果 WO-1生物衍生骨復(fù)合材料保留了天然骨的三維結(jié)構(gòu)，表面有膠狀膜覆蓋；在體外釋放實(shí)驗(yàn)中第1天呈暴發(fā)釋放，以后呈恒定釋放；對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等骨感染的常見(jiàn)致病菌有持久穩(wěn)定的抑菌能力。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中周圍骨組織及肌肉組織中WO-1在各時(shí)間點(diǎn)均保持較高的濃度，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）,而動(dòng)物血中WO-1濃度較低，與骨及肌肉組織中WO-1濃度相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 WO-1生物衍生骨緩釋材料具有良好的藥物緩釋功能及較強(qiáng)的抑菌能力。
目的 制備WO-1膠原生物衍生骨復(fù)合支架材料，檢測(cè)其理化性質(zhì)及力學(xué)強(qiáng)度，為骨組織工程研究和應(yīng)用提供可選擇的支架材料。方法 將同種異體骨、I型膠原、WO-1進(jìn)行系列理化處理，制成單純生物衍生骨材料、膠原生物衍生骨復(fù)合材料及WO-1膠原生物衍生骨復(fù)合材料。制備后的材料行大體及掃描電鏡觀察其形貌特征，X線衍射分析材料成分，并對(duì)材料的力學(xué)性能進(jìn)行分析測(cè)定。結(jié)果 單純生物衍生骨材料具有天然骨的網(wǎng)狀孔隙系統(tǒng)；膠原生物衍生骨復(fù)合材料具有天然骨的網(wǎng)狀孔隙系統(tǒng)，微孔表面覆蓋膠原膜；WO-1膠原生物衍生組織工程骨復(fù)合支架材料具有骨組織的天然網(wǎng)狀孔隙系統(tǒng)，微孔表面可見(jiàn)膠原膜覆蓋。3種材料的孔徑依次為90～700 μm、75～600 μm、80～600 μm；孔隙率依次為87.96%、80.47%、84.29%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；其主要成分為羥基磷灰石，彎曲強(qiáng)度和壓縮強(qiáng)度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 WO.1膠原生物衍生骨復(fù)合材料與其它兩種材料相同，可作為一種有效的天然組織工程骨支架材料。
目的 探討低溫保存的組織工程骨修復(fù)骨缺損的能力及低溫保存的可行性。方法 將人源性生物衍生骨材料復(fù)合成骨細(xì)胞構(gòu)建的組織工程骨，在4℃ 和－196℃的溫度環(huán)境中保存3個(gè)月和6個(gè)月，同時(shí)以未行低溫保存的組織工程骨和生物衍生骨材料作為對(duì)照，分別修復(fù)實(shí)驗(yàn)兔橈骨的長(zhǎng)段骨缺損。80只成年日本大耳白兔，隨機(jī)分為4個(gè)實(shí)驗(yàn)組（左前肢植入材料）：A3組：組織工程骨在4℃ 保存3個(gè)月；A6組：組織工程骨在4℃ 保存6個(gè)月；B組：組織工程骨在－196℃ 保存3個(gè)月；B6組：組織工程骨在－196℃ 保存6個(gè)月。２個(gè)對(duì)照組（右前肢植入材料）：C組：組織工程骨未行低溫保存；D組：?jiǎn)渭兩镅苌遣牧?。于術(shù)后2、4、6和12周行大體和組織學(xué)觀察，并于6周和12周行X線片檢查和生物力學(xué)檢測(cè)。結(jié)果 術(shù)后大體觀察，A3、A6、B3、B6和C組間無(wú)顯著差異，D組骨痂少且斷端更為明顯。各時(shí)間點(diǎn)組織學(xué)觀察，A3、A6、B3、B6和C組植入材料周圍膠原及骨痂均較D組明顯，術(shù)后12周組織學(xué)評(píng)分，D組與其它各組比較 P值＜0.05。X線片示D組植入材料皮質(zhì)骨無(wú)明顯變化，骨痂較少；余各組12周植入材料與自體骨融合，髓腔開(kāi)通，骨折線消失，塑形好。生物力學(xué)檢測(cè)D組與其它各組比較P值＜0.05。結(jié)論 以4℃和-196℃保存方法能有效保存組織工程骨，對(duì)修復(fù)骨缺損有明顯效果，這一方法適宜推廣應(yīng)用。
目的 研究組織工程骨體外構(gòu)建過(guò)程中，成骨細(xì)胞與生物衍生骨相互作用的基因表達(dá)。方法用人胚骨膜來(lái)源的成骨細(xì)胞與生物衍生骨體外復(fù)合培養(yǎng)構(gòu)建組織工程骨。培養(yǎng)2、4、6、8和10 d，分別提取總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。用熒光及TaqMan探針行實(shí)時(shí)定量PCR，分別擴(kuò)增成骨細(xì)胞特異轉(zhuǎn)錄因子（Cbfa1）、成骨細(xì)胞特異基因（Osterix）、Ⅰ型膠原、骨鈣素（osteocalcin，OC）和整合素α5和β1（Integrin α5 and β1），讀取擴(kuò)增循環(huán)數(shù)（Ct值），進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以單純培養(yǎng)的成骨細(xì)胞作為對(duì)照組。 結(jié)果 Cbfa1與Osterix變化一致，其中實(shí)驗(yàn)組Osterix在2 d和 8 d的表達(dá)均明顯高于對(duì)照組（P＜0.05)。Ⅰ型膠原與OC的表達(dá)變化一致，實(shí)驗(yàn)組除10 d時(shí)，其余各時(shí)間段Ⅰ型膠原表達(dá)均明顯低于對(duì)照組（P＜0.01)。Intgerin的表達(dá)始終處于較高水平，在培養(yǎng)最初的2 d，實(shí)驗(yàn)組Integrin β1表達(dá)明顯高于對(duì)照組（P＜0.01)。結(jié)論 成骨細(xì)胞與生物衍生材料復(fù)合后，重要基因可持續(xù)正常表達(dá)。作為支架材料，生物衍生骨在保持成骨細(xì)胞性狀、誘導(dǎo)及促進(jìn)成骨細(xì)胞分化方面有明顯優(yōu)越性；它不僅對(duì)細(xì)胞順利進(jìn)入增殖狀態(tài)無(wú)影響，而且為細(xì)胞增殖提供廣闊而有效的空間。成骨細(xì)胞最終可良好分化，充分發(fā)揮成骨功能，并有利于成骨細(xì)胞黏附，黏附行為貫穿細(xì)胞與材料相互作用的整個(gè)過(guò)程，而并非局限于開(kāi)始階段。
目的 制備脫細(xì)胞人羊膜（HAAM），檢測(cè)其細(xì)胞相容性和組織相容性，探討其作為組織工程支架材料的可行性。方法 新鮮人羊膜經(jīng)漂洗后戊二醛交聯(lián)，0.5%SDS震搖24小時(shí)，胰蛋白酶消化４小時(shí)，充分漂洗，冷凍干燥，分裝，環(huán)氧乙烷消毒備用。倒置相差顯微鏡和掃描電鏡觀察表面結(jié)構(gòu)，測(cè)量孔徑，并作HE、Mallory染色。體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞并復(fù)合于HAAM，倒置相差顯微鏡和掃描電鏡觀察細(xì)胞的黏附、生長(zhǎng)，四甲基偶氮唑鹽(MTT)法測(cè)定HAAM浸提液對(duì)培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞的細(xì)胞毒性。將HAAM植入SD大鼠背部皮下，觀察其組織相容性。結(jié)果 HAAM的一面為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，孔徑為10～80 nm，另一面為致密纖維結(jié)構(gòu)。HE、Mallory染色表明材料無(wú)細(xì)胞殘留，均為膠原組成。成纖維細(xì)胞能在HAAM上黏附、增殖。MTT示材料細(xì)胞毒性為0或1級(jí)，動(dòng)物埋置實(shí)驗(yàn)無(wú)異常反應(yīng)。結(jié)論 應(yīng)用去垢劑-酶消化法處理新鮮人羊膜，能有效去除組織中的細(xì)胞和可溶性成分，可進(jìn)一步降低其免疫原性，保留基質(zhì)及網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，有良好的細(xì)胞相容性和組織相容性，可作為組織缺損的修復(fù)材料及組織工程的膜支架材料。
目的 研究生物衍生羊膜預(yù)防SD大鼠跟腱粘連的效果，并為臨床預(yù)防術(shù)后跟腱粘連提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。方法 以28只SD大鼠后肢跟腱為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停袛嗖⒖p合跟腱，實(shí)驗(yàn)側(cè)跟腱包裹生物衍生羊膜，對(duì)側(cè)不包裹作為對(duì)照，術(shù)后1、2、4、6、8和12周分別取跟腱，大體及組織學(xué)觀察跟腱的粘連、愈合情況。結(jié)果 術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)兩側(cè)跟腱吻合處炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況、跟腱愈合進(jìn)程無(wú)明顯差別，跟腱粘連的半定量評(píng)分表明實(shí)驗(yàn)側(cè)和對(duì)照側(cè)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。結(jié)論 生物衍生羊膜能有效預(yù)防跟腱粘連，是一種較為理想的預(yù)防跟腱粘連的生物材料。
目的 探討運(yùn)用組織工程軟骨植入修復(fù)兔脛骨平臺(tái)外側(cè)髁全關(guān)節(jié)軟骨淺層缺損的可行性。方法 取 2周齡乳兔軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)傳代至第 3代后 ,與人胎盤 型膠原蛋白海綿復(fù)合后植入成年兔的脛骨體平臺(tái)外側(cè)髁淺層完全軟骨缺損區(qū) ,并設(shè)立空白對(duì)照組 ,分別于術(shù)后 4、12和 2 4周取材 ,觀察修復(fù)效果。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組術(shù)后 4周缺損表面未見(jiàn)明顯的新生軟骨形成 ;12周 ,缺損表面有少量的新生軟骨形成 ,組織學(xué)切片上可見(jiàn)軟骨細(xì)胞呈邊緣不規(guī)則的 ,小蜂窩狀結(jié)構(gòu) ,軟骨細(xì)胞周圍有軟骨陷窩形成 ;2 4周 ,缺損表面的新生軟骨較 4、12周的新生軟骨明顯 ,表面光滑 ,且與周圍組織結(jié)合緊密 ,但仍存在部分缺損尚未修復(fù)。組織學(xué)切片上可見(jiàn)軟骨陷窩形成 ,并分泌甲苯胺藍(lán)異染的軟骨基質(zhì)。而對(duì)照組則均未見(jiàn)明顯的修復(fù)。結(jié)論 制成的組織工程軟骨對(duì)兔脛骨平臺(tái)軟骨淺層完全缺損有修復(fù)作用 ,但不能完全修復(fù)缺損。
目的 探索凍干脫鈣骨基質(zhì) (FDBM)作為組織工程骨支架的可行性。方法 取兔顱骨外膜的成骨細(xì)胞 ,經(jīng)傳代培養(yǎng)后作為種子細(xì)胞與FDBM于體外聯(lián)合培養(yǎng) ,通過(guò)對(duì)復(fù)合物相差顯微鏡、光鏡及掃描電鏡等觀察 ,了解細(xì)胞在材料中的生長(zhǎng)情況。結(jié)果 經(jīng)系統(tǒng)處理后的FDBM呈現(xiàn)不規(guī)則的網(wǎng) -孔結(jié)構(gòu),其孔隙直徑為10 0～40 0 μm,孔隙率為70 %。體外復(fù)合培養(yǎng) 8小時(shí) ,成骨細(xì)胞即開(kāi)始貼附于FDBM網(wǎng)架上;復(fù)合培養(yǎng)7天,分布于支架材料上的成骨細(xì)胞迅速分化增殖,分泌細(xì)胞外基質(zhì)并形成鈣結(jié)節(jié)。結(jié)論 FDBM可作為構(gòu)建組織工程骨的一種較好支架材料。