目的 探討體外快速培養(yǎng)犬膀胱平滑肌細(xì)胞的方法及觀察膀胱 平滑肌細(xì)胞在脫細(xì)胞小腸黏膜下層（small intestinal submucosa, SIS）上的生長狀況， 為構(gòu)建組織工程膀胱平滑肌組織提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法 分別采用酶消化 法和組織塊培養(yǎng)法分離、獲取和原代培養(yǎng)犬膀胱平滑肌細(xì)胞，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的 生長情況，透射電鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，免疫組織化學(xué)染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定。將犬膀胱平滑 肌細(xì)胞接種到SIS支架材料上，于復(fù)合培養(yǎng)5、7及9d 取材，行蘇木素染色、石蠟切片HE 染色和掃描電鏡觀察膀胱平滑肌細(xì)胞在SIS上的生長狀況。以細(xì)胞SIS復(fù)合培養(yǎng)組為實(shí)驗(yàn)組 ，以膀胱平滑肌細(xì)胞為對照組，每組各設(shè)9孔，分別于接種后3、5及7d取材，酶消化后收集 細(xì)胞并計(jì)數(shù)。結(jié)果酶消化法原代培養(yǎng)獲取犬膀胱平滑肌細(xì)胞數(shù)量 多， 細(xì)胞生長速度快，形態(tài)良好，培養(yǎng)5d細(xì)胞在培養(yǎng)瓶底生長匯合。組織塊培養(yǎng)法接種3d見長 梭形的膀胱平滑肌細(xì)胞從植塊邊緣萌出，獲取的細(xì)胞數(shù)量較少。透射電鏡下見膀胱平滑肌細(xì) 胞胞質(zhì)中有特征性細(xì)肌絲和細(xì)胞膜的密斑。抗α-肌動(dòng)蛋白免疫組織化學(xué)染色胞漿呈棕黃色 陽性反應(yīng)。膀胱平滑肌細(xì)胞在SIS表面能黏附、生長和增殖。體外復(fù)合培養(yǎng)5d后，膀胱平滑 肌細(xì)胞鋪滿SIS表面，呈單層細(xì)胞結(jié)構(gòu)。7、9d細(xì)胞形態(tài)與5d相似。實(shí)驗(yàn)組3、5及7d的細(xì) 胞計(jì)數(shù)分別為（16.85±0.79）×105、（39.74±2.16）×105及（37.15±2.02）×10 5個(gè)，對照組分別為（19.43±0.54）×105、（34.50±1.85）×105及（33.07±1.31 ）×105個(gè)。兩組5d細(xì)胞計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 酶消化法原代培養(yǎng)膀胱平滑肌細(xì)胞可提供大量活性良好的種子細(xì)胞。SIS支持膀胱平滑 肌細(xì)胞黏附和生長，可為構(gòu)建組織工程膀胱平滑肌組織提供良好支架。
目的 應(yīng)用犬自體肺組織瓣直接包繞或內(nèi)襯金屬支架修補(bǔ)胸段食管壁部分缺損，探討其胸段食管重建的可行性。方法 24只雜種犬，體重10～15 kg, 雌雄不限。將其制成食管壁長約4～6 cm、寬為環(huán)1/2～2/3周徑部分缺損的動(dòng)物模型，結(jié)扎右中葉支氣管使肺萎陷，制成肺組織瓣。隨機(jī)分為2組，每組12只。實(shí)驗(yàn)組，肺組織瓣直接修補(bǔ)食管缺損；對照組，肺組織瓣內(nèi)襯金屬支架修補(bǔ)食管缺損。術(shù)后于第2、4、6、8、10和12周每組各處死1只犬，行大體觀察、組織學(xué)和鋇餐等檢查。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組術(shù)后第5、7天死于吻合口瘺各1只，膿胸1只；對照組術(shù)后第6、9、23天死于吻合口瘺各1只，潰瘍穿孔2只，膿胸2只。術(shù)后實(shí)驗(yàn)組發(fā)生吻合口瘺2只，無明顯食管狹窄，術(shù)后4周吻合口處有3～5層上皮細(xì)胞，術(shù)后8周肺組織瓣表面完全上皮化，電鏡觀察細(xì)胞間以緊密連接為主。對照組術(shù)后第6、9、23天發(fā)生吻合口瘺3只，潰瘍穿孔2只，支架周圍炎性反應(yīng)較重，上皮細(xì)胞爬行較不完全，對肺組織瓣的壓迫較重。兩組存活8周以上的犬各1只，鋇餐透視顯示替代物中央的管腔輕度狹窄，蠕動(dòng)減弱，但黏膜光滑，鋇劑通過順利，無梗阻和瘺，吻合口上端無擴(kuò)張。結(jié)論 肺組織瓣能為食管上皮細(xì)胞提供良好再生環(huán)境，用以重建犬胸段食管具有可行性，但金屬支架對組織有損傷，尚需尋找合理支架材料并對替代節(jié)段性缺損進(jìn)行研究。
目的 建立犬自體睪丸移植術(shù)的改進(jìn)方法。方法 健康成年雄性雜種犬30只，年齡1.5~2.0歲，體重14～17 kg。切取帶腹主動(dòng)脈瓣和下腔靜脈瓣的睪丸動(dòng)、靜脈，并進(jìn)行灌注及冷保存。將睪丸動(dòng)、靜脈分別與同側(cè)髂外動(dòng)、靜脈進(jìn)行端側(cè)吻合，行自體睪丸移植術(shù)30只。對睪丸灌注、帶瓣睪丸血管的切取及血管吻合等關(guān)鍵步驟進(jìn)行了改進(jìn)。觀察術(shù)后犬生存情況，對移植的睪丸進(jìn)行影像學(xué)及組織學(xué)檢查，測定犬術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)的性激素水平。結(jié)果 自體睪丸移植30只，成功27只，成功率90%。其中睪丸熱缺血4.5±0.9 min，冷缺血50.0±10.0 min，睪丸血管吻合35.5±5.5 min，總手術(shù)時(shí)間3.5±0.5 h。數(shù)字減影動(dòng)脈造影（digital subtraction arteriography, DSA）證實(shí)成活睪丸血供良好；組織學(xué)檢查顯示精曲小管的各期生精細(xì)胞形態(tài)無異常，層次及數(shù)量無減少，管腔內(nèi)有少量精子；術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)，黃體生成素較術(shù)前明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），睪酮及卵泡刺激素與術(shù)前差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 建立了改進(jìn)后穩(wěn)定而可行的犬自體睪丸移植的手術(shù)方法，為研究人睪丸移植提供了可靠的依據(jù)。