目的 探討低氧誘導(dǎo)因子 1α（hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α）基因在大鼠終板軟骨細(xì)胞中的表達(dá)情況及其與終板軟骨細(xì)胞凋亡的關(guān)系。 方法 取 8 只 10 周齡 SPF 級雄性 SD 大鼠 L1～5 腰椎終板軟骨組織，采用酶消化法分離培養(yǎng)終板軟骨細(xì)胞并傳代，取第 3 代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。首先將終板軟骨細(xì)胞分為兩組，分別于 20% O2 常氧條件下（A 組）以及 0.5% O2 低氧下條件（B 組）培養(yǎng)；培養(yǎng) 24 h，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率，實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測 HIF-1α 基因表達(dá)，Western blot 檢測凋亡蛋白 HIF-1α、Bax、Bcl-2 表達(dá)。然后，構(gòu)建 LipofectaminTM2000 載體試劑和 HIF-1α siRNA/ LipofectaminTM2000 載體混合劑分別轉(zhuǎn)染終板軟骨細(xì)胞后，于 0.5% O2 低氧條件下培養(yǎng)（分別為 C、D 組）。培養(yǎng) 24 h 后，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，行 HIF-1α 免疫熒光染色觀察，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率，實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測 HIF-1α、Ⅱ 型膠原、蛋白多糖、SOX9 基因表達(dá)，Western blot 檢測凋亡蛋白 HIF-1α、Bax、Bcl-2 表達(dá)。 結(jié)果 培養(yǎng) 24 h 后，A、B 組均見少量空泡壞死細(xì)胞；細(xì)胞凋亡率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.026，P=0.471）；B 組 HIF-1α 基因及蛋白相對表達(dá)量顯著高于 A 組（t=22.672，P=0.015；t=18.396，P=0.013）；兩組 Bax、Bcl-2 蛋白表達(dá)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.594，P=0.781；t=1.251，P=0.342）。低氧培養(yǎng) 24 h 后，D 組空泡壞死細(xì)胞較 C 組增多，且可見大量 HIF-1α 陽性終板軟骨細(xì)胞；與 C 組相比，D 組細(xì)胞凋亡率顯著增高（t=27.143，P=0.002），D 組 HIF-1α、Ⅱ型膠原、蛋白多糖、SOX9 基因表達(dá)較 C 組顯著降低（t=21.097，P=0.015；t=34.829，P=0.002；t=18.673，P=0.022；t=31.949，P=0.007），HIF-1α、Bcl-2 蛋白相對表達(dá)量較 C 組均顯著降低（t=37.648，P=0.006；t=16.729，P=0.036），而 Bax 蛋白表達(dá)較 C 組提高（t=25.583，P=0.011）。 結(jié)論 缺氧條件下，終板軟骨細(xì)胞中 HIF-1α 表達(dá)上調(diào)，以提高細(xì)胞耐氧性；HIF-1α 可抑制終板軟骨細(xì)胞在低氧環(huán)境中發(fā)生凋亡。
目的 觀察δ阿片受體激動劑D-丙2，D-亮5腦啡肽（D-Ala2，D-Leu5-enkephali，DADLE）對膿毒癥大鼠肝細(xì)胞凋亡及肝組織bcl-2和caspase-3表達(dá)的影響，探討DADLE對肝臟保護(hù)作用的可能機(jī)理。方法 采用盲腸結(jié)扎加穿孔(CLP)法制作大鼠膿毒癥模型，SD大鼠54只(雌雄不限)，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為CLP組（n=18）、DADLE組（n=18）和假手術(shù)組（n=18）。在不同時(shí)間點(diǎn)(2、4及6 h)處死大鼠，原位末端標(biāo)記法檢測肝細(xì)胞凋亡情況，免疫組化法檢測肝組織中bcl-2及caspase-3蛋白表達(dá)的動態(tài)變化并觀察肝臟的病理改變。結(jié)果 CLP組大鼠肝組織病理損害明顯較假手術(shù)組嚴(yán)重，DADLE組肝臟的病理變化明顯改善； CLP組大鼠肝組織細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯較假手術(shù)組升高（P＜0.01），以4 h最顯著（P＜0.01），DADLE 組各時(shí)相肝細(xì)胞凋亡指數(shù)均明顯降低（P＜0.01）； CLP組大鼠肝組織caspase3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度比假手術(shù)組明顯增強(qiáng)（P＜0.01），而bcl-2蛋白的表達(dá)則明顯減弱（P＜0.05）； DADLE組肝組織caspase-3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度較CLP組明顯減弱（P＜0.01），而bcl-2蛋白的表達(dá)則明顯增強(qiáng)（P＜0.05）。肝組織caspase-3的表達(dá)與肝細(xì)胞凋亡指數(shù)呈正相關(guān)（r=0.83，P＜0.01），bcl-2的表達(dá)與肝細(xì)胞凋亡指數(shù)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.65，P＜0.01)。結(jié)論 DADLE能明顯改善膿毒癥大鼠肝臟的病理變化，其作用機(jī)理可能與DADLE下調(diào)caspase-3表達(dá)、上調(diào)bcl-2表達(dá)，從而抑制肝細(xì)胞凋亡有關(guān)。