目的 探討生存素（survivin）反義核酸（anti-pcDNA3-svv）對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901的凋亡誘導(dǎo)，對(duì)泰索帝的化療增敏作用及降低多藥耐藥基因-1（MDR-1）表達(dá)的作用。方法 采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染SGC7901細(xì)胞,并篩選陽(yáng)性克隆，Western blot檢測(cè)survivin蛋白的表達(dá)，RT-PCR檢測(cè) MDR-1 mRNA的表達(dá)，透射電鏡觀察轉(zhuǎn)染后對(duì)SGC7901細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用，MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞對(duì)泰索帝的敏感性。結(jié)果 survivin蛋白的表達(dá)在重組質(zhì)粒組比空質(zhì)粒組和空白對(duì)照組明顯降低（P＜0.05），重組質(zhì)粒組MDR-1 mRNA表達(dá)也較其他2組明顯降低（P＜0.01）； 透射電鏡下可見(jiàn)重組質(zhì)粒組細(xì)胞呈凋亡晚期變化，其MDR指數(shù)為0.196±0.013，明顯低于空質(zhì)粒組的2.958±0.024和空白對(duì)照組的3.126±0.019（P＜0.01）； 重組質(zhì)粒組對(duì)泰索帝的IC50值為（16.7±1.98） ng/ml,也明顯低于空質(zhì)粒組的（49.9±1.21） ng/ml和空白對(duì)照組的(55.7±1.89) ng/ml（P＜0.01）。結(jié)論 survivin反義核酸可誘導(dǎo)SGC7901細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)泰索帝化療敏感性，可能逆轉(zhuǎn)耐藥。
目的 探討生存素（survivin）的反義寡脫氧核苷酸(ASODNs)抑制survivin基因表達(dá)對(duì)移植靜脈內(nèi)膜增生的抑制作用。方法 Wistar大鼠60只，建立自體靜脈移植模型，然后隨機(jī)均分為對(duì)照組、survivin ASODNs 50 μg和200 μg組、正義寡脫氧核苷酸組(ODNs組)及Lipofectin+pluronic組共5組，施加不同的處理因素，分別在靜脈移植術(shù)后7和14 d取材。組織形態(tài)學(xué)方法比較移植靜脈內(nèi)膜增生程度，半定量RT-PCR法檢測(cè)survivin基因mRNA的表達(dá)，Western blot檢測(cè)survivin基因的蛋白產(chǎn)物表達(dá)，免疫組化法檢測(cè)survivin及增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)，TUNEL檢測(cè)血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)凋亡的變化。結(jié)果 對(duì)照組、ODNs組和Lipofectin+pluronic組移植術(shù)后7 d、14 d移植靜脈內(nèi)膜增生明顯，但3組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pgt;0.05)，局部轉(zhuǎn)染50 μg survivin ASODNs能明顯抑制其內(nèi)膜增生(P＜0.05)，200 μg組受抑制程度更明顯(P＜0.05)。對(duì)照組survivin mRNA及蛋白產(chǎn)物表達(dá)顯著增加，而survivin ASODNs組卻顯著減少(P＜0.05)，VSMC中PCNA表達(dá)也同時(shí)減少(P＜0.05)，而VSMC凋亡明顯增加(P＜0.05)。 結(jié)論 survivin ASODNs可顯著抑制移植靜脈內(nèi)膜增生，其作用可能是通過(guò)抑制survivin的基因及蛋白產(chǎn)物表達(dá)，從而減輕VSMC增殖，促進(jìn)其凋亡而實(shí)現(xiàn)的。
為了研究生存素基因負(fù)性突變體生存素-D53A(SVV-D53A)對(duì)人肺腺癌SPC-A1移植瘤的治療作用, 并探討其作用機(jī)制, 我們?cè)隗w外實(shí)驗(yàn)中使用SVV-D53A質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人肺腺癌SPC-A1細(xì)胞, 蛋白免疫印跡檢測(cè)生存素突變體表達(dá), 同時(shí)通過(guò)流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中, 裸鼠皮下接種人肺腺癌SPC-A1細(xì)胞建立肺癌移植瘤模型, 使用陽(yáng)離子脂質(zhì)體包裹SVV-D53A質(zhì)粒進(jìn)行治療。治療結(jié)束后免疫組化檢測(cè)各組腫瘤標(biāo)本細(xì)胞增殖, 末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶脫氧尿苷三磷酸切口末端標(biāo)記(TUNEL)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡。與對(duì)照組相比, SVV-D53A質(zhì)粒在體外顯著誘導(dǎo)SPC-A1細(xì)胞凋亡, SVV-D53A組裸鼠皮下移植瘤體積減小, 細(xì)胞增殖減弱, 大量腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。研究結(jié)果表明SVV-D53A的表達(dá)在體外和體內(nèi)均能夠顯著抑制人肺腺癌SPC-A1細(xì)胞的生長(zhǎng), 其作用機(jī)制主要為誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
目的 利用小干擾 RNA（small interfering RNA，siRNA）片段沉默卵巢癌細(xì)胞人垂體瘤轉(zhuǎn)化基因 1（human pituitary tumor-transforming gene 1，hPTTG1）基因表達(dá)，探討其抑制細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。 方法 通過(guò)脂質(zhì)體將 hPTTG1 siRNA 轉(zhuǎn)染 A2780 細(xì)胞（hPTTG1 siRNA 干擾組），并設(shè)立正常組和陰性對(duì)照組，轉(zhuǎn)染 48 h 后進(jìn)行檢測(cè)。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后 hPTTG1 mRNA 表達(dá)水平的變化，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè) survivin mRNA 和蛋白表達(dá)水平，采用 DNA 梯帶電泳法和碘化丙啶單染法分析細(xì)胞凋亡，采用比色法測(cè)定胱天蛋白酶（caspase）-3 活性。 結(jié)果 hPTTG1 siRNA 可抑制 A2780 細(xì)胞內(nèi) hPTTG1 mRNA 表達(dá)；hPTTG1 siRNA 干擾組可見(jiàn)典型的細(xì)胞凋亡階梯狀電泳，流式細(xì)胞儀檢測(cè)該組細(xì)胞凋亡率為（17.53±2.17）%，明顯高于正常組和陰性對(duì)照組[（8.97±1.56）%、（9.64±1.31）%]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；hPTTG1 干擾后 survivin mRNA 和蛋白表達(dá)均下調(diào)，caspase-3 活性增強(qiáng)。 結(jié)論 hPTTG1 siRNA 可下調(diào) survivin 基因表達(dá)，活化 caspase-3，導(dǎo)致 A2780 細(xì)胞凋亡，其可成為卵巢癌基因治療的潛在靶點(diǎn)。