【摘 要】 目的 對近年TGF-β1/Smad3信號轉(zhuǎn)導通路與創(chuàng)傷后瘢痕形成的相關(guān)研究作一綜述。 方法 廣泛查閱國內(nèi)外近年有關(guān)TGF-β1/Smad3信號轉(zhuǎn)導通路及與創(chuàng)傷后瘢痕形成的文獻，并進行綜述。 結(jié)果 TGF-β1是纖維化疾病的重要影響因子，通過TGF-β1/Smad3信號通路轉(zhuǎn)導產(chǎn)生其生物學效應。該途徑受多種因子調(diào)控并在細胞及分子水平與其他信號通路串話。該途徑參與創(chuàng)傷后早期炎性反應、創(chuàng)面愈合及后期病理性瘢痕的形成。在分子水平干預轉(zhuǎn)導途徑的各個環(huán)節(jié)，可以影響纖維化及細胞外基質(zhì)沉著的進程。 結(jié)論 TGF-β1/Smad3信號轉(zhuǎn)導途徑是影響創(chuàng)傷后瘢痕形成及細胞外基質(zhì)沉著的重要途徑。對該途徑進行深入研究，可為臨床促進創(chuàng)面的愈合及病理性瘢痕的防治奠定理論基礎。
目的 通過比較瘢痕疙瘩及正常皮膚中細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）、應激活化蛋白激酶（c-Jun amino-terminal kinase，JNK）信號通路的表達，探討其在瘢痕疙瘩形成中的作用。 方法 取四川大學華西醫(yī)院燒傷整形科收治的26 例患者皮膚組織，其中行瘢痕疙瘩切除患者（實驗組）16 例，瘢痕疙瘩形成時間8 個月～ 10 年；胸部6 例，耳垂4 例，會陰部2 例，肩部3 例，腹部1 例；均經(jīng)病理檢查確診為瘢痕疙瘩。10 例整形手術(shù)患者自愿捐贈的正常皮膚作為對照組，腹部4 例，大腿3 例，肩部2 例，背部1 例。取標本采用Envision 二步法行免疫組織化學染色，觀察磷酸化及非磷酸化JNK 和ERK 表達情況，并采用Image Pro Plus 4.5 圖像分析系統(tǒng)測定積分吸光度（IA）值，觀察陽性染色強度。 結(jié)果 免疫組織化學染色觀察顯示，對照組正常皮膚成纖維細胞中未見明顯的磷酸化及非磷酸化ERK、JNK 陽性表達；而實驗組主要在成纖維細胞中表達，陽性顆粒主要位于細胞質(zhì)和細胞核內(nèi)。實驗組磷酸化ERK 及JNK 的IA 值明顯高于對照組（P lt; 0.05），非磷酸化ERK 及JNK 兩組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 磷酸化JNK、ERK 信號通路蛋白在瘢痕疙瘩中異常高表達，提示該通路可能與瘢痕疙瘩形成密切相關(guān)。
目的 探討構(gòu)建包含瘢痕疙瘩、瘢痕疙瘩周圍皮膚和正常皮膚的組織芯片方法。 方法 標本均由2009 年3 月－ 5 月收治患者自愿捐贈，其中瘢痕疙瘩組27 例，瘢痕疙瘩周圍皮膚組13 例，正常皮膚組27 例。根據(jù)瘢痕疙瘩組織和皮膚的組織學特點和實驗需要，對傳統(tǒng)組織芯片制作和切片方法進行改良。采集實驗標本后行石蠟包埋制備供體蠟塊，制作黏附平臺，用取樣針依次鉆取組織芯并固定于黏附平臺。將組織芯與黏附平臺整體移入包埋鑄模，預熱后，注入70℃溶蠟填滿鑄模，室溫冷卻為組織芯片蠟塊。切片后行HE 染色、免疫組織化學染色觀察，并與傳統(tǒng)方法制備的組織芯片進行比較。 結(jié)果 改良法構(gòu)建的組織芯片蠟塊包含67 個位點，表面平整，外觀無明顯裂紋，位點完整、分布均一、無明顯移位。HE 染色示各位點厚薄均勻、染色層次分明、對比明顯、邊緣銳利，符合原始病理診斷；免疫組織化學染色示組織芯片中各個位點染色后組織量充足，能夠滿足對染色結(jié)果進行對比的要求。而傳統(tǒng)法制作的組織芯片HE 染色示多個位點缺失，個別位點移位明顯。 結(jié)論 采用改良法能夠成功制作包含瘢痕疙瘩、瘢痕疙瘩周圍皮膚和正常皮膚的組織芯片，構(gòu)建的組織芯片將成為研究瘢痕疙瘩發(fā)病機制的有效工具。
【摘 要】 目的 探討耳部瘢痕疙瘩手術(shù)切除方式和術(shù)后放療等綜合治療的療效。 方法 2000 年1 月－ 2005 年12 月收治42 例（71 側(cè)）耳部瘢痕疙瘩患者。男8 例，女34 例；年齡16 ～ 50 歲，平均26.2 歲。病程6 個月～ 4 年。穿耳孔32 例，創(chuàng)傷7 例，耳部病變手術(shù)3 例。瘢痕疙瘩范圍0.3 cm × 0.3 cm × 0.2 cm ～ 6.0 cm × 4.0 cm × 1.0 cm，形狀呈球形、啞鈴形、結(jié)節(jié)形。根據(jù)瘢痕疙瘩不同大小和范圍，選擇不同術(shù)式，切除瘢痕并行缺損修復。術(shù)后24 h 內(nèi)，高能電子束照射10 次，每次2 Gy，總劑量20 Gy，對有復發(fā)傾向者，及時行“得寶松” 1 mg 及2％利多卡因按1 ∶ 3 混合液局部瘢痕內(nèi)注射3 次，每3 周1 次。 結(jié)果 術(shù)后患者切口均Ⅰ期愈合，皮瓣均成活。37 例（64 側(cè)）獲隨訪1 年，獲臨床治愈；5 例（7 側(cè)）于術(shù)后3 ～ 6 個月有復發(fā)傾向，及時局部注射“得寶松”后未見復發(fā)。根據(jù)劉文閣等療效標準判定治愈37 例，顯效5 例。 結(jié)論 耳部瘢痕疙瘩盡早采用個體化手術(shù)方式，結(jié)合早期放療，可取得滿意效果，是治療的選擇方案之一。
【摘 要】 目的 了解病理性瘢痕（增生性瘢痕與瘢痕疙瘩）中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物和銅鋅超氧化物歧化酶（copper，zinc-superoxide dismutase，CuZn-SOD）的變化。 方法 取2005 年5 月－ 2005 年8 月收治患者自愿捐獻的標本。瘢痕疙瘩組10 例，年齡16 ～ 35 歲，平均病程2.2 年；增生性瘢痕組10 例，年齡17 ～ 32 歲，平均病程8 個月；正常皮膚組8 例，年齡16 ～ 34 歲。應用化學比色法測定3 組標本中 CuZn-SOD 活力和丙二醛（malonaldehyde，MDA）含量，采用免疫組織化學方法觀察CuZn-SOD 蛋白在病理性瘢痕中的表達，并對其進行評分。 結(jié)果 正常皮膚組、增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組MDA 含量分別為（0.821 3 ± 0.086 4）、（1.139 0 ± 0.106 7）、（1.190 0 ± 0.074 8）nmol/mg prot；CuZn-SOD 活力分別為（20.60 ± 5.56）、（31.65 ± 2.21）、（34.36 ± 5.01）U/mg prot。增生性瘢痕組和瘢痕疙瘩組MDA 含量與CuZn-SOD 活力同正常皮膚組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。免疫組織化學染色觀察：3 組表皮角質(zhì)形成細胞和真皮成纖維細胞均有CuZn-SOD 蛋白陽性表達。正常皮膚組、增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組在表皮角質(zhì)形成細胞中免疫組織化學評分分別為（2.20 ± 0.45）、（4.14 ± 0.90）、（4.43 ± 0.79）分；在真皮成纖維細胞中評分分別為（1.60 ± 0.89）、（4.00 ± 0.82）、（4.43 ± 0.53）分。增生性瘢痕組和瘢痕疙瘩組CuZn-SOD 蛋白表達與正常皮膚組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；增生性瘢痕組及瘢痕疙瘩組間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P gt;0.05）。 結(jié)論 病理性瘢痕中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA 含量增加，CuZn-SOD 活力升高、表達增強。
目的 觀察并探討p53 基因表達及其72 位編碼子基因多態(tài)性對瘢痕疙瘩臨床表型的影響。 方 法 取35 例自愿捐獻瘢痕疙瘩組織，男19 例，女16 例；病程4 個月～ 8 年。同時收集自身外周血作基因型分析。根據(jù)觀察范圍不同，實驗共分為兩組（n=35）。中央組：各瘢痕疙瘩中央部（中央2/3 半徑范圍內(nèi)）；周邊組：各瘢痕疙瘩周邊部（周邊1/3 半徑范圍內(nèi)）。兩組再根據(jù)瘢痕疙瘩最大橫徑大小分3 個亞組：lt; 1 cm 為小體積組（n=5），1 ～ 3 cm 為中體積組（n=21），gt; 3 cm 為大體積組（n=9）。采用PCR 法擴增p53 基因外顯子4，并進行基因測序；免疫組織化學方法檢測P53蛋白表達變化；TUNEL 法檢測瘢痕疙瘩組織中成纖維細胞凋亡，并進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果 瘢痕疙瘩p53 遺傳基因型為Arg/Arg 者7 例，Pro/Arg 者21 例，Pro/Pro 者7 例，與臨床表型分布有相關(guān)性（P lt; 0.05）；中、小體積周邊組及中央組P53 蛋白染色陽性，大體積周邊組偶見細胞染色陽性。基因型為Arg/Arg、Arg/Pro 及Pro/Pro 的標本吸光度值分別為3 439.359 8 ± 538.527 5、3 273.186 2 ± 375.213 9 及1 691.372 9 ± 98.989 3，各基因型間比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05） ；TUNEL 法檢測成纖維細胞凋亡，鏡下可見凋亡細胞呈均勻分布，大、中、小體積周邊組凋亡細胞指數(shù)分別為31.000 0 ±3.266 0、42.300 0 ± 4.354 8、44.600 0 ± 5.253 6，各組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結(jié) 論 瘢痕疙瘩臨床表型與P53 蛋白表達密切相關(guān)，組織中p53 基因72 位編碼子基因多態(tài)性的變異有利于瘢痕疙瘩成纖維細胞凋亡。
目的 探討瘢痕疙瘩患者TNF 受體Ⅱ（TNF receptor Ⅱ，TNFR- Ⅱ）基因1 573 位點突變的情況。 方 法 收集22 例自愿捐獻的經(jīng)臨床及病理確診的瘢痕疙瘩標本，其中男6 例，女16 例；年齡18 ～ 53 歲。設患者自身外周靜脈血標本為正常對照。提取基因組DNA，PCR 擴增TNFR- Ⅱ基因1 573 位點片段，DNA 測序，將測序結(jié)果與GeneBank 比較。 結(jié)果 實驗提取DNA 濃度均gt; 0.5 μg/μL，純度（A260/A280）均gt; 1.5，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，與所設計DNA 片段大小相近，符合實驗要求。13 例瘢痕疙瘩標本檢測示不同程度突變，突變率為59.1%；9 例1 663 編碼子發(fā)生點突變，占總數(shù)的40.9%。與外周靜脈血比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。突變類型主要為點突變、插入、缺失，為多位點、多類型，呈多態(tài)性。 結(jié)論 TNFR- Ⅱ基因1 573 位點突變與瘢痕疙瘩的發(fā)生有關(guān)。
目的 探討wt-P53蛋白對人瘢痕疙瘩成纖維細胞（keloid fibroblasts,KFBs）端粒酶活性的影響；明確在人KFBs中wt-P53蛋白與端粒酶活性之間的相互關(guān)系。方法 將來源于人瘢痕疙瘩組織的KFBs隨機分成兩組，轉(zhuǎn)染組采用腺病毒介導法將野生型wt-p53基因轉(zhuǎn)染至人KFBs；非轉(zhuǎn)染組KFBs未進行野生型wt-p53基因轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染48 h后，采用間接免疫熒光法和Western blotting法檢測KFBs wt-P53蛋白的表達；并于轉(zhuǎn)染后1～7 d，采用TRAP-ELISA法檢測KFBs端粒酶活性。結(jié)果 兩組均有wt-P53蛋白表達，轉(zhuǎn)染組wt-P53蛋白表達明顯高于非轉(zhuǎn)染組；轉(zhuǎn)染后1～7 d, 轉(zhuǎn)染組端粒酶活性均明顯低于非轉(zhuǎn)染組（P＜0.05結(jié)論 wt-P53蛋白能夠抑制人KFBs端粒酶活性。
目的 探討瘢痕疙瘩家系標本中Fas基因 (外顯子7～9)有無突變以及Fas基因突變在瘢痕疙瘩形成中的意義。方法 實驗標本來自南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院整形外科2005年收集的A、B兩個瘢痕疙瘩家系。采用PCR及基因測序技術(shù)，分別以A家系2例男性患者的瘢痕疙瘩組織為研究對象, 以其周圍正常皮膚及外周靜脈血作為自身對照，其配偶的外周靜脈血作為正常對照，并以B家系2例患者(母親與兒子)的外周靜脈血作為不同家系之間的對照，共檢測10份標本中Fas基因外顯子7～9基因序列。結(jié)果 10份瘢痕疙瘩家系標本Fas基因的7、8外顯子均未發(fā)生突變，2例瘢痕疙瘩組織標本均在外顯子9編碼區(qū)的11 bp和53 bp兩個位點上存在單個堿基基因突變或多態(tài)性改變。結(jié)論 瘢痕疙瘩Fas基因死亡域外顯子9區(qū)段的基因結(jié)構(gòu)異常，極有可能與Fas蛋白的功能改變有關(guān)，從而導致局部瘢痕疙瘩形成。
目的 利用抑制消減雜交（suppression subtractive hybridization，SSH）技術(shù)，比較瘢痕疙瘩與正常皮膚組織之間基因表達差異，篩選瘢痕疙瘩特有的差異表達基因片段，為揭示瘢痕疙瘩的病因提供實驗依據(jù)。方法 提取瘢痕疙瘩與正常皮膚組織細胞mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。以瘢痕疙瘩cDNA為檢測子，正常皮膚組織細胞cDNA為驅(qū)動子，選擇四堿基內(nèi)切酶RsaⅠ將cDNA酶切；連接特殊設計的接頭進行消減雜交和PCR反應，得到消減混合物，與T載體連接，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細菌，建立差異消減文庫。Southern雜交篩選鑒定差異基因，進行測序和同源分析。結(jié)果 經(jīng)SSH篩選、Southern雜交鑒定得到13個瘢痕疙瘩差異表達基因，其中已知功能的基因11個，如TA結(jié)合因子1、E4基因轉(zhuǎn)錄因子1、ephrin B2型受體基因、血小板生長因子受體基因等；有與腫瘤發(fā)生有關(guān)的基因，如G抗原7基因等；未知功能基因2個。結(jié)論 篩選得到的瘢痕疙瘩差異表達基因，對了解瘢痕疙瘩發(fā)生發(fā)展的病因?qū)W基礎和指導臨床治療具有重要意義。