目的 通過(guò)研究Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1（Runt-related transcription factor 1，RUNX1）在經(jīng)卷煙煙霧提取物（cigarette smoking extract，CSE）刺激的大鼠氣道上皮細(xì)胞中的表達(dá)，探討RUNX1對(duì)上皮–間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的調(diào)控作用。方法 采用酶消化法提取大鼠的原代支氣管上皮細(xì)胞，并用不同濃度的CSE進(jìn)行刺激，采用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞的活性，探索合適的CSE處理濃度。用CSE處理細(xì)胞后，構(gòu)建RUNX1干擾和過(guò)表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，使RUNX1基因沉默或過(guò)表達(dá)，用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)RUNX1蛋白的表達(dá)，用蛋白印跡法檢測(cè)RUNX1、核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、轉(zhuǎn)錄因子Snail、上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-鈣黏蛋白（E-cadherin，E-cad）以及間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物波形蛋白（vimentin，VIM）的表達(dá)。結(jié)果 支氣管上皮細(xì)胞的活力可被CSE降低，且降低程度與CSE的濃度成正比。通過(guò)CSE的誘導(dǎo)，原代大鼠支氣管上皮細(xì)胞E-cad表達(dá)水平顯著降低（P<0.05），RUNX1、NF-κB、Snail、VIM的表達(dá)水平明顯升高（均P<0.05）。干擾RUNX1基因后，E-cad表達(dá)上調(diào)（P<0.05），NF-κB、Snail、VIM的表達(dá)下調(diào)（均P<0.05）。而過(guò)表達(dá)RUNX1后，E-cad的表達(dá)下調(diào)（P<0.05），NF-κB、Snail、VIM的表達(dá)上調(diào)（均P<0.05）。結(jié)論 CSE可促進(jìn)氣道上皮細(xì)胞RUNX1的表達(dá)，RUNX1通過(guò)NF-κB/Snail通路調(diào)控EMT的進(jìn)程。
目的 探討大鼠低氧性肺動(dòng)脈高壓( HPH) 形成過(guò)程中小泛素蛋白樣修飾蛋白1( SUMO-1) 在肺內(nèi)表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及在HPH 發(fā)病機(jī)制中的作用。方法 40 只Wistar 大鼠隨機(jī)分為常氧對(duì)照組、低氧3 d 組、低氧7 d組、低氧14 d 組及低氧21 d 組, 每組8 只。常壓間斷低氧暴露復(fù)制HPH大鼠模型。檢測(cè)各組大鼠的平均肺動(dòng)脈壓( mPAP) 、右心室肥大指數(shù)( RVHI) 、血管形態(tài)學(xué)指標(biāo)[ 管壁面積/ 管總面積( WA%) ] ; 原位雜交、RT-PCR 檢測(cè)肺內(nèi)SUMO-1 mRNA 表達(dá), 免疫組化、Western blot 檢測(cè)其蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 低氧7 d至21 d, 大鼠肺小動(dòng)脈開(kāi)始出現(xiàn)明顯血管重塑并逐漸加重, 低氧7 d 時(shí)WA% 和mPAP 顯著高于對(duì)照組; 低氧14 d 時(shí)WA% 、mPAP 較7 d 時(shí)進(jìn)一步增加, RVHI顯著高于對(duì)照組; 低氧21 d 時(shí)WA% 、RVHI 較14 d 時(shí)進(jìn)一步增加。SUMO-1 mRNA 和蛋白在對(duì)照組肺小動(dòng)脈壁呈弱陽(yáng)性表達(dá); 低氧3 d 后顯著增高; 低氧14 d 達(dá)高峰; 低氧21 d 后mRNA 表達(dá)減弱但仍然高于對(duì)照組, 蛋白表達(dá)繼續(xù)保持高水平。SUMO-1 mRNA 和蛋白表達(dá)與mPAP、WA% 、RVHI 均呈正相關(guān)( P 均lt;0. 01) 。結(jié)論 慢性低氧誘導(dǎo)肺內(nèi)SUMO-1 表達(dá)增加在HPH 的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮一定的作用。