目的 構建攜帶NGF 基因序列的5 型腺病毒（adenovirus expressing NGF，Ad-NGF），探討其在促進大鼠坐骨神經(jīng)神修復與再生中的作用。 方法 將NGF 基因序列克隆至5 型腺病毒穿梭質(zhì)粒pCA13，并在HEK-293 細胞中包裝得到重組腺病毒Ad-NGF 并測序鑒定。雄性SD 大鼠32 只，體重180 ～ 200 g，隨機分為4 組（n=8）。切斷大鼠右側(cè)坐骨神經(jīng)并縫合，建立坐骨神經(jīng)損傷模型。模型制備后，A 組及C 組分別于術側(cè)腓腸肌注射Ad-NGF 及不攜帶NGF基因序列的空腺病毒載體，1 × 108 PFU/ 次，隔天1 次，共3 次； B 組及D 組分別于術側(cè)腓腸肌注射NGF（200 U/d）及生理鹽水（100 μL/d），連續(xù)3 周。術后第31 天檢測坐骨神經(jīng)功能指數(shù)、神經(jīng)電生理檢測，取吻合處及其遠端1 cm 坐骨神經(jīng)，采用RT-PCR 及Western blot 技術定量檢測大鼠損傷坐骨神經(jīng)中NGF mRNA 及蛋白的表達水平，并行組織學及免疫組織化學、透射電鏡觀察。 結(jié)果 實驗成功構建了攜帶NGF 基因序列的5 型腺病毒Ad-NGF。A 組坐骨神經(jīng)功能指數(shù)、神經(jīng)傳導速度、誘發(fā)電位波幅及潛伏期與B、C、D 組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；B、C、D 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。RT-PCR 及Western blot 檢測顯示，A 組NGF mRNA 及蛋白表達量與B、C、D 組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；B、C、D 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。組織學及免疫組織化學觀察示A 組坐骨神經(jīng)再生情況明顯優(yōu)于其他組。透射電鏡觀察示A 組坐骨神經(jīng)橫切面軸突直徑、髓鞘厚度、神經(jīng)纖維個數(shù)與B、C、D 組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；B、C、D 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 Ad-NGF 提供了一種在周圍神經(jīng)損傷局部獲得大量NGF 的新方法，且可有效促進大鼠坐骨神經(jīng)損傷后的修復。
目的構建攜帶NGF及髓磷脂相關糖蛋白（myelin associated glycoprotein，MAG）基因序列的雙基因共表達腺病毒（adenovirus expressing NGF and MAG，Ad-NGF-MAG），探討其在大鼠坐骨神經(jīng)損傷修復中的作用。 方法將NGF和MAG共同克隆至5型腺病毒穿梭質(zhì)粒pCA13，并在HEK293細胞中包裝得到重組腺病毒Ad-NGF-MAG并測序鑒定。取雄性SD大鼠32只，體質(zhì)量180～200 g；隨機分成4組（n=8）：對照組（正常對照）、空病毒組（Ad組）、單獨表達NGF組（Ad-NGF組）和共表達NGF、MAG組（Ad-NGF-MAG組）。Ad組、AdNGF組和Ad-NGF-MAG組大鼠制備右側(cè)坐骨神經(jīng)損傷模型后，分別于術側(cè)腓腸肌注射空腺病毒、Ad-NGF及AdNGF-MAG（1×108 PFU），隔天1次，共3次。對照組僅暴露右側(cè)坐骨神經(jīng)后關閉切口，術后對應時間點注射生理鹽水10 μL。術后31 d，分別行坐骨神經(jīng)功能指數(shù)（sciatic nerve function index，SFI）、神經(jīng)電生理檢測；切取坐骨神經(jīng)標本，行RT-PCR及Western blot檢測NGF及MAG mRNA及蛋白表達水平，以及組織學觀察。 結(jié)果實驗成功構建重組腺病毒Ad-NGF和Ad-NGF-MAG。32只大鼠術后均成活，切口Ⅰ期愈合。Ad-NGF-MAG組SFI、神經(jīng)傳導速度、誘發(fā)電位波幅、潛伏期均明顯優(yōu)于Ad-NGF組和Ad組，但未達對照組水平，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。Ad-NGF-MAG組內(nèi)MAG mRNA和蛋白表達最高，NGF mRNA和蛋白表達高于對照組和Ad組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。組織學觀察顯示，對照組神經(jīng)連續(xù)性好，Ad組神經(jīng)纖維層次混亂，Ad-NGF組神經(jīng)纖維層次結(jié)構清晰，局部斷端再生良好，但神經(jīng)纖維結(jié)構紊亂；Ad-NGF-MAG組神經(jīng)纖維生長有序，神經(jīng)直徑較Ad-NGF組粗，神經(jīng)纖維結(jié)構良好。 結(jié)論坐骨神經(jīng)損傷后修復過程中，腺病毒介導NGF與MAG共表達，既可促進神經(jīng)纖維生長，又可抑制神經(jīng)異常分支形成，促進神經(jīng)結(jié)構與功能的恢復。