目的 構(gòu)建攜帶反義二型基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP2）基因的重組腺病毒。方法 從新鮮肝癌組織中提取總RNA,用RT-PCR法合成MMP2 cDNA序列中5′端轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)附近長約500 bp的基因片段，將此片段反義克隆到腺病毒載體(AdEasy)系統(tǒng)的多克隆位點(diǎn)，經(jīng)轉(zhuǎn)染293細(xì)胞生成攜帶反義MMP2基因的重組腺病毒AdMMP2AS。結(jié)果 成功構(gòu)建并包裝攜帶反義MMP2基因片段的重組腺病毒Ad-MMP2AS，病毒滴度達(dá)1×108/ml。結(jié)論 構(gòu)建的重組腺病毒Ad-MMP2AS可望能有效地將反義MMP2基因片段導(dǎo)入人肝癌細(xì)胞株，為進(jìn)一步研究肝癌浸潤和轉(zhuǎn)移機(jī)理以及探討抑制肝癌浸潤和轉(zhuǎn)移的方法提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
目的探討β-氨基丙腈（β-aminopropionitrile，BAPN）聯(lián)合血管緊張素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ，Ang-Ⅱ）誘導(dǎo)建立SD大鼠主動脈夾層（aortic dissection，AD）模型的最佳給藥組合及其并發(fā)癥。 方法選取3周齡雄性SD大鼠42只，使用完全隨機(jī)法將其分為7組，即A組（0.25% BAPN組）、B組（0.40% BAPN組）、C組（0.80% BAPN組）、D組［1 g/（kg·d）BAPN組］、E組［1 g/（kg·d）BAPN+1 μg/（kg·min）生理鹽水組］、F組［1 g/（kg·d）BAPN+1 μg/（kg·min）Ang-Ⅱ組］、G組（對照組），每組6只。干預(yù)周期為4周（E、F組為4周+5 d），實(shí)驗(yàn)過程中如有大鼠死亡則立即解剖，干預(yù)結(jié)束后，存活大鼠通過給予戊巴比妥鈉處死，分離、留取全程主動脈。通過蘇木精-伊紅染色從病理形態(tài)學(xué)特征上觀察主動脈變化。 結(jié)果BAPN干預(yù)4周后各干預(yù)組生存率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；植入微滲泵5 d后，E組大鼠生存率高于F組（P=0.008），AD發(fā)生率低于F組（P=0.001）；BAPN可影響大鼠的飲食量和飲水量；BAPN干預(yù)4周后G組大鼠體重大于各干預(yù)組（P＜0.05）；BAPN聯(lián)合Ang-Ⅱ可使大鼠主動脈中膜增厚、彈性纖維斷裂、排列紊亂，伴炎癥細(xì)胞浸潤，符合AD病理形態(tài)學(xué)改變；BAPN還可對精神狀態(tài)和胃腸道造成影響。 結(jié)論通過1g/（kg·d）BAPN聯(lián)合1 μg/（kg·min）Ang-Ⅱ的給藥組合可穩(wěn)定地建立大鼠AD模型，這將對深入研究AD發(fā)病機(jī)制和治療靶點(diǎn)提供一種穩(wěn)定的載體，但該過程中出現(xiàn)的并發(fā)癥是一種不穩(wěn)定因素，如何平衡AD模型建立過程中BAPN對其他組織器官的影響還有待進(jìn)一步研究。
目的構(gòu)建攜帶反義多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)的重組腺病毒并轉(zhuǎn)染人肝癌耐藥細(xì)胞株，為肝癌耐藥的基因治療提供實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。 方法將MRP基因片段反向克隆到腺病毒載體質(zhì)粒pAdTrackCMV上，與骨架質(zhì)粒在細(xì)菌體內(nèi)進(jìn)行同源重組，經(jīng)293細(xì)胞包裝、擴(kuò)增后得到攜帶反義MRP的重組腺病毒AdEasyGFPASmrp，再用其轉(zhuǎn)染人肝癌耐藥細(xì)胞株SMMC7721/ADM。結(jié)果成功地構(gòu)建了攜帶反義MRP的重組腺病毒，病毒滴度為2.5×109 efu/ml，多重感染復(fù)數(shù)為100時對SMMC7721/ADM細(xì)胞株轉(zhuǎn)導(dǎo)效率可達(dá)90%以上。結(jié)論構(gòu)建的重組腺病毒AdEasyGFPASmrp可望有效地將反義MRP導(dǎo)入人肝癌耐藥細(xì)胞株，為肝癌耐藥機(jī)理及其逆轉(zhuǎn)方式的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
目的 探討鋅指蛋白A20對同種異體大鼠30%小體積移植肝再生與排斥及受體存活時間的影響。方法 采用急性排斥組合DA (RT1a)大鼠→Lewis (RT1l)大鼠建立同種異體大鼠30%小體積肝移植模型。 75只大鼠均分為A20腺病毒組（A20組）、對照空腺病毒組（rAdEasy組）及對照生理鹽水組（PS組）3組。 供肝切取后采用離體門靜脈灌注法轉(zhuǎn)基因干預(yù)，肝臟灌洗后移植。 觀察受體存活時間及排斥反應(yīng)，檢測移植肝A20表達(dá)、肝細(xì)胞再生與凋亡、肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞(LSECs)中NF-κB活性與ICAM-1 mRNA表達(dá)、移植肝浸潤單核細(xì)胞（LIMCs）總數(shù)及自然殺傷(NK)細(xì)胞和自然殺傷T（NKT）細(xì)胞數(shù)以及血清IFN-γ 水平。 結(jié)果 A20組受體大鼠存活時間長于PS組大鼠和rAdEasy組大鼠(P=0.001 8)，而PS組大鼠存活時間又長于rAdEasy組大鼠(P=0.001 8)。 A20促進(jìn)小體積移植肝再生，肝移植后4 d A20組大鼠肝細(xì)胞BrdU標(biāo)記指數(shù)高于PS組大鼠和rAdEasy組大鼠(P＜0.01)； A20組大鼠肝細(xì)胞凋亡指數(shù)低于PS組大鼠和rAdEasy組大鼠(P＜0.01)。 肝移植術(shù)后4 d，組織學(xué)檢測結(jié)果顯示A20組大鼠移植肝有少量細(xì)胞浸潤，呈輕度排斥； 而PS 組和rAdEasy組大鼠移植肝有大量細(xì)胞浸潤，呈重度排斥。 A20能抑制移植后早期(1 d) LSECs 中NF-κB活性和 ICAM-1 mRNA 表達(dá)。 流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示A20能下調(diào)移植肝LIMCs數(shù)，包括下調(diào)NK和NKT 亞群細(xì)胞數(shù)，并下調(diào)血清IFN-γ 水平(P＜0.05)。 結(jié)論 A20能有效促進(jìn)同種異體大鼠30%小體積移植肝再生，抑制排斥并延長受體存活時間，其功效可能與抑制LSECs中NF-κB活性、抑制LIMCs浸潤及減少NK 細(xì)胞和NKT 細(xì)胞浸潤入肝以及抑制肝細(xì)胞凋亡有關(guān)。