目的〓〖HTSS〗構建重組人骨形成蛋白4（human bone morphogenetic protein 4, hBMP-4）基因腺相關病毒載體。方法根據hBMP-4的基因序列設計引物，上游引入EcoRⅠ位點，下游引入Sal Ⅰ位點，以EX-A0242-M01-hBMP-4為模板擴增目的基因。將hBMP4基因克隆入pUC18載體中，獲得重組質粒pUC18-hBMP-4。然后用EcoRⅠ與SalⅠ酶切pUC18-hBMP-4及質粒pSNAV，回收酶切片段，T4 DNA連接酶16℃過夜，轉化大腸桿菌DH5α感受肽細胞，篩選陽性克隆獲得pSNAV-hBMP-4，EcoRⅠ／SalⅡ雙酶切鑒定，并行全基因測序。轉染BHK21細胞，G418篩選培養(yǎng)，獲得抗藥克隆細胞株。HSV1rc/△UL2感染，包裝此細胞株并收獲病毒載體AAV-hBMP-4。行DNA點雜交法測定病毒滴度，SDS-PAGE分析判斷病毒純度。結果 PCR電泳及酶切鑒定表明，pSNAV-hBMP-4重組成功，基因測序顯示裝入pSNAV質粒中的hBMP-4基因正確；AAV-hBMP-4病毒的大致滴度為1.5×10 12 μg/ml，分泌蛋白濃度為0.124 mg/ml，病毒載體純度在95%以上。結論 實驗獲得的病毒載體滴度高、感染性好，可以滿足骨組織工程的需要。