目的：采用常壓間歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)大鼠的動(dòng)物模型，觀察間歇性常壓低氧預(yù)處理的促血管生成作用。方法:成年雄性Wistar大鼠25只，體重210～215 g，隨機(jī)分為2大組:對(duì)照組(C組，n=5)和間歇性低氧預(yù)處理組(IH組，n=20)。IH組動(dòng)物進(jìn)行間歇性低氧預(yù)處理(4 h/d，間歇缺氧1 d者為IH1組，7 d者為IH2組，14 d者為IH3組，28 d者為IH4組)，按計(jì)劃完成實(shí)驗(yàn)后測(cè)定心肌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF) 蛋白表達(dá)及毛細(xì)血管密度。結(jié)果：間歇性低氧預(yù)處理大鼠心肌VEGF蛋白表達(dá)增加，心肌毛細(xì)血管密度增高。結(jié)論：間歇性低氧預(yù)處理能促進(jìn)大鼠心肌內(nèi)的血管生成，其機(jī)制可能與心肌VEGF表達(dá)增高有關(guān)。
目的 觀察“一站式”復(fù)合技術(shù)治療冠狀動(dòng)脈多支病變患者的早中期隨訪(fǎng)結(jié)果。方法 2007年 6月 至 2009年 12月共 104例冠狀動(dòng)脈多支病變患者在阜外心血管病醫(yī)院接受“一站式”復(fù)合技術(shù)再血管化治療，其中男 93例 ,女 11例；年齡 35～81（61.8±10.2）歲。所有患者均為包括左前降支（ left anterior descending，LAD）病變?cè)趦?nèi)的多支病變?！耙徽臼健睆?fù)合技術(shù)要點(diǎn)為：胸骨下段小切口左側(cè)第 2肋間橫斷胸骨，心臟不停跳完成左乳內(nèi)動(dòng)脈（left internal mammary artery，LIMA）至 LAD吻合，關(guān)胸后立即造影確定 LAD血運(yùn)重建滿(mǎn)意后即經(jīng)胃管給予波立維300 mg,靜脈肝素化［全血激活凝血時(shí)間（ ACT）＞250 s］，行經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入（percutaneous coronary intervention，PCI）治療其他非前降支狹窄病變。結(jié)果 本組患者均順利施行“一站式”復(fù)合技術(shù)再血管化治療，全部行 LIMA至 LAD血管移植，植入藥物支架 191枚，裸金屬支架 3枚；全組無(wú)手術(shù)及院內(nèi)死亡。所有患者均獲得隨訪(fǎng)，平均隨訪(fǎng) 1.5年，其中 1例出現(xiàn)支架狹窄，再次接受介入治療；全組無(wú)心肌梗死發(fā)生，無(wú)腦血管事件及死亡患者。結(jié)論 “一站式”復(fù)合技術(shù)再血管化是治療多支冠狀動(dòng)脈粥樣硬化心臟病的一種安全有效的選擇。
目的 探討冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)（CABG）中移植血管血流量與圍手術(shù)期心肌梗死(MI)發(fā)生率之間的關(guān)系，為臨床提供借鑒。 方法 采集2010年1~6月在北京大學(xué)第一醫(yī)院連續(xù)58例因冠心病接受單純擇期非體外循環(huán)冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)（OPCAB）患者的臨床資料。術(shù)中均采用左乳內(nèi)動(dòng)脈（LIMA）吻合于左前降支（LAD），其他靶血管則以大隱靜脈（SV）作為旁路移植血管，在關(guān)胸前循環(huán)狀態(tài)穩(wěn)定條件下，應(yīng)用瞬時(shí)流量測(cè)定技術(shù)測(cè)量各移植血管的血流量，并計(jì)算移植血管總血流量。根據(jù)術(shù)后是否發(fā)生圍手術(shù)期MI，將患者分成兩組：MI組11例，其中男7例，女4例；年齡67.4±10.3歲；非MI組，47例，其中男38例，女9例；年齡63.3±9.9歲。分析兩組患者術(shù)前及術(shù)中的相關(guān)危險(xiǎn)因素。 結(jié)果 MI組與非MI組的手術(shù)時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（205.4±59.6 min vs. 183.4±32.4 min，t1.691, P=0.096）。MI組與非MI組移植血管數(shù)量（3.00±1.00 支 vs. 2.96±0.78 支，t=0.154, P=0.878）、LIMALAD移植血管血流量（15.40±11.37ml/minvs.16.50±10.83ml/min，t=0.301，P=0.764）差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MI組與非MI組移植血管總血流量（41.03±19.50 ml/min vs. 64.09±32.44 ml/min，t=2.254，P=0.028）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。移植血管總血流量lt;48.5 ml/min為發(fā)生MI的危險(xiǎn)因素［OR=4.706, 95%CI1.099,20.147）］。 結(jié)論 移植血管總血流量可在一定程度上預(yù)測(cè)CABG后急性心肌缺血事件的發(fā)生，總血流量lt;48.5 ml/min的患者術(shù)后發(fā)生圍手術(shù)期MI的概率將明顯增加。
氣管移植目前仍處于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段,影響氣管移植應(yīng)用于臨床的主要因素在于移植氣管的再血管化、有效的免疫抑制及供者氣管的保存.帶蒂大網(wǎng)膜包裹移植氣管是移植體再血管化的有效方法.先期將氣管移植體置于大網(wǎng)膜內(nèi),再將帶蒂大網(wǎng)膜氣管移植能明顯提高移植體的再血管化,并降低移植體的感染率.氣管的再血管化仍受到氣管移植長(zhǎng)度的限制,為解決這一問(wèn)題,近年利用分段氣管移植能有效延長(zhǎng)氣管移植長(zhǎng)度.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,氣管移植同樣存在移植排斥反應(yīng).免疫抑制劑的應(yīng)用能降低排斥反應(yīng),但同時(shí)增加了移植體的感染率.早期大劑量應(yīng)用免疫抑制劑既能有效地抑制氣管移植術(shù)后的排斥反應(yīng),又能降低移植體的感染率.氣管是一個(gè)結(jié)構(gòu)較為簡(jiǎn)單的器官,因此,對(duì)供者氣管進(jìn)行長(zhǎng)期保存是可行的.將氣管置入保護(hù)液進(jìn)行長(zhǎng)期低溫冷凍保存取得成功.這一簡(jiǎn)單方法既解決了供者氣管缺乏問(wèn)題,又能解決免疫抑制問(wèn)題.
目的 比較同一供者及不同供者的人胎盤(pán)MSCs（human placenta-derived MSCs，HPMSCs）與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）三維復(fù)合培養(yǎng)效果，為體外構(gòu)建三維血管化組織工程骨提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 取健康足月產(chǎn)婦自愿捐贈(zèng)的胎盤(pán)及臍帶組織， 采用Ⅳ型膠原酶消化和人淋巴細(xì)胞分層液密度梯度離心法分離培養(yǎng)HPMSCs，通過(guò)流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞表型，取第2代細(xì)胞向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)鑒定；以Ⅰ型膠原酶消化分離培養(yǎng)HUVECs，通過(guò)Ⅷ因子相關(guān)抗原因子免疫組織化學(xué)染色進(jìn)行鑒定。實(shí)驗(yàn)分為兩組，A組取不同供者的第3代HUVECs和成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)3周的第3代HPMSCs以1∶1比例復(fù)合種植于膠原水凝膠，制備細(xì)胞-膠原水凝膠復(fù)合物；B組將同一供者的以上兩種細(xì)胞同法復(fù)合制備復(fù)合物。復(fù)合培養(yǎng)第1、3、5、7天取材，行CD31免疫熒光染色，于激光共聚焦顯微鏡下觀察其成血管傾向，測(cè)量復(fù)合物中的索道長(zhǎng)度和節(jié)點(diǎn)數(shù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果 經(jīng)鑒定，成功分離培養(yǎng)HPMSCs及HUVECs。CD31免疫熒光染色示，與A組相比，B組細(xì)胞-膠原水凝膠復(fù)合物中的HUVECs可在三維空間上較早、較好地伸展，在水凝膠內(nèi)部相互交織能力較強(qiáng)，形成的索道更長(zhǎng)，節(jié)點(diǎn)更多，網(wǎng)絡(luò)更密集。第7天時(shí)B組索道長(zhǎng)度和節(jié)點(diǎn)數(shù)分別為（8.11 ± 0.62）mm/mm2及（21.30 ± 1.41）個(gè)/mm2，顯著優(yōu)于A組的（6.68 ± 0.35） mm/mm2及（17.10 ± 1.10） 個(gè)/mm2，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.894，P=0.000；t=0.732，P=0.000）。 結(jié)論 將同一供者的HPMSCs與HUVECs體外復(fù)合種植于膠原水凝膠支架上，比不同供者來(lái)源的細(xì)胞形成的網(wǎng)絡(luò)成血管傾向更明顯，交織連續(xù)性好，層次豐富。
目的 探討脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）及血管束植入法聯(lián)合應(yīng)用對(duì)組織工程支架體內(nèi)血管化的影響，為臨床應(yīng)用組織工程支架復(fù)合物治療股骨頭缺血性壞死提供理論依據(jù)。 方法 取4 月齡SD 大鼠，分離培養(yǎng)ADSCs，并行成骨誘導(dǎo)鑒定。取第3 代ADSCs 接種于納米羥基磷灰石/ 聚酰胺66（nano-hydroxyapatide/polyamide-66，nHA/PA66）支架上制備復(fù)合支架，掃描電鏡觀察細(xì)胞與支架復(fù)合情況。取4 月齡SD 大鼠24 只，體重350 ～ 400 g，隨機(jī)分為3 組，每組8 只。A、B 組分離大鼠雙側(cè)腹壁下動(dòng)、靜脈，分別將血管束植入培養(yǎng)10 d 的復(fù)合支架及單純nHA/PA66 支架；C 組將培養(yǎng)10 d 的復(fù)合支架包埋入雙側(cè)股四頭肌中。術(shù)后2、4 周每組取4 只大鼠支架標(biāo)本行HE染色及CD34 免疫組織化學(xué)染色觀察，檢測(cè)其血管生成情況。 結(jié)果 所分離細(xì)胞經(jīng)鑒定為ADSCs。掃描電鏡觀察示復(fù)合培養(yǎng)10 d，細(xì)胞數(shù)目增多，形態(tài)完全伸展，呈長(zhǎng)梭形。術(shù)后2、4 周，HE 染色及免疫組織化學(xué)染色均顯示A 組支架植入動(dòng)、靜脈周?chē)写罅垦苌?，血管?shù)量及管壁成熟度均優(yōu)于同一時(shí)間點(diǎn)的B、C 組。術(shù)后2、4 周，A 組血管密度和血管直徑均顯著大于B、C 組，B 組大于C 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 ADSCs 和血管束植入法聯(lián)合應(yīng)用可以促進(jìn)組織工程支架體內(nèi)血管化程度。
【摘 要】 目的 探討毛乳頭細(xì)胞對(duì)表皮干細(xì)胞與同種異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)構(gòu)建的組織工程皮膚血管化的影響。 方法 取門(mén)診包皮環(huán)切術(shù)患者皮膚，用于表皮細(xì)胞培養(yǎng)；取孕19、20 周引產(chǎn)胎兒頭部皮膚，用于毛乳頭細(xì)胞培養(yǎng)；患者及家屬均知情同意。以中性蛋白酶聯(lián)合胰蛋白酶消化、分離表皮細(xì)胞，Ⅳ型膠原黏附法分選表皮干細(xì)胞；以Ⅰ型膠原酶消化法分離毛乳頭，常規(guī)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)。以同種異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)為支架，在真皮基質(zhì)的真皮乳頭側(cè)種植毛乳頭細(xì)胞，基底膜側(cè)種植表皮干細(xì)胞構(gòu)建實(shí)驗(yàn)組組織工程皮膚替代物；對(duì)照組組織工程皮膚替代物不種植毛乳頭細(xì)胞。取6 ～ 8 周齡BALB/C-nu 裸鼠60 只，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組（n=30）；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背部制造1 cm × 1 cm 大小全層皮膚缺損模型，將兩組組織工程皮膚替代物移植修復(fù)創(chuàng)面，2 周后觀察移植皮膚成活率。術(shù)后2、4 周，取移植皮膚替代物標(biāo)本，行HE 及免疫組織化學(xué)染色，觀察移植皮膚替代物CD31 表達(dá)水平，并計(jì)算兩組標(biāo)本血管密度。 結(jié)果 Ⅳ型膠原分選后表皮細(xì)胞同時(shí)表達(dá)角蛋白19、β1 整合素，提示為表皮干細(xì)胞。由毛乳頭培養(yǎng)出的細(xì)胞表達(dá)α 平滑肌肌動(dòng)蛋白，提示為毛乳頭細(xì)胞。動(dòng)物移植術(shù)后2 周，實(shí)驗(yàn)組移植皮膚成活率為93.3%（28/30），對(duì)照組為80.0%（24/30），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.31，P=0.00）。HE 染色觀察示實(shí)驗(yàn)組表皮層達(dá)12 層，表皮細(xì)胞體積較大；對(duì)照組表皮層達(dá)4 ～ 6 層，表皮細(xì)胞體積較小。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后2、4 周，血管密度分別為（38.56 ± 2.49）個(gè)/mm2 和（49.12 ± 2.39）個(gè)/mm2，對(duì)照組分別為（25.16 ± 3.73） 個(gè) / mm2 和（36.26 ± 3.24） 個(gè) / mm2，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。 結(jié)論 毛乳頭細(xì)胞可促進(jìn)移植皮膚替代物血管形成，利于表皮層重建，提高組織工程皮膚移植成活率。
目的 探討大鼠BMSCs 來(lái)源的成骨細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)合殼聚糖- 羥基磷灰石多孔支架植入大鼠橈骨缺損處的成骨作用和成血管作用。 方法 取分離培養(yǎng)至第3 代的SD 大鼠BMSCs 行成骨和成內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)并鑒定。分別將內(nèi)皮細(xì)胞（A 組）、成骨細(xì)胞（B 組）、混合細(xì)胞（成骨細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞比例為1 ∶ 1，C 組）均勻滴加于殼聚糖- 羥基磷灰石多孔支架上制備3 組細(xì)胞- 支架復(fù)合物，MTT 檢測(cè)支架內(nèi)細(xì)胞增殖活性。取2 月齡雄性SD 大鼠30 只，制作大鼠橈骨5 mm 長(zhǎng)缺損模型并分別植入3 組細(xì)胞- 支架復(fù)合物（n=10）。術(shù)后4、8、12 周分別取移植物行HE 染色觀察，CD34免疫組織化學(xué)染色計(jì)數(shù)微血管密度，RT-PCR 法檢測(cè)骨橋蛋白（osteopontin，OPN）和骨保護(hù)素（osteoprotegrin，OPG）mRNA 表達(dá)。 結(jié)果 BMSCs 成骨誘導(dǎo)7 d 后ALP 染色可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)染顆粒，細(xì)胞核呈紅染；內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)14 d 后，CD34 免疫細(xì)胞化學(xué)染色可見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)棕色顆粒。MTT 檢測(cè)示3 組細(xì)胞活性隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高。HE 染色示，術(shù)后12 周A 組未見(jiàn)明顯類(lèi)骨質(zhì)形成，而有較密集的微血管結(jié)構(gòu)及較多纖維組織形成；B、C 組可見(jiàn)均質(zhì)的類(lèi)骨質(zhì)，呈條索狀和島狀分布，可見(jiàn)大量成骨樣細(xì)胞存在。術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)A、C 組微血管密度均顯著高于B 組（P lt; 0.05）；A 組術(shù)后12 周微血管密度高于C 組（P lt; 0.05），其余2 個(gè)時(shí)間點(diǎn)A、C 組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。A 組3 個(gè)時(shí)間點(diǎn)OPN 和OPG mRNA 表達(dá)水平均較低，與B、C 組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；B、C 組分別于術(shù)后8、12 周OPN mRNA 表達(dá)達(dá)峰值，4 周時(shí)OPG mRNA 表達(dá)達(dá)峰值。 結(jié)論 BMSCs 來(lái)源的成骨細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞按1 ∶ 1 比例共培養(yǎng)于殼聚糖- 羥基磷灰石多孔支架作為組織工程骨移植物，可以促進(jìn)大鼠橈骨缺損部位骨的形成和血管化，促進(jìn)骨缺損愈合。
目的 介紹一種利用在體血管轉(zhuǎn)移入組織工程室（血管化組織工程室）進(jìn)行體內(nèi)組織工程研究的新方法，總結(jié)目前血管化組織工程室內(nèi)進(jìn)行組織工程研究的進(jìn)展。 方法 查閱國(guó)內(nèi)外近年來(lái)在血管化組織工程室內(nèi)進(jìn)行組織工程研究的文獻(xiàn)，并進(jìn)行綜合分析。 結(jié)果 血管化組織工程室內(nèi)能構(gòu)建出具有血管網(wǎng)絡(luò)的脂肪組織、心肌組織等，常用的血管化組織工程室模型有動(dòng)靜脈分流環(huán)路模型和腹壁下淺動(dòng)脈模型。 結(jié)論 體內(nèi)利用血管化組織工程室進(jìn)行組織工程研究的方法有望應(yīng)用于臨床。
目的 骨組織工程所使用的支架材料能否快速、有效地血管化是骨修復(fù)的關(guān)鍵。研究增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料對(duì)血管化的協(xié)同和促進(jìn)作用，為構(gòu)建血管化組織工程骨修復(fù)骨缺損尋找適宜的支架材料。 方法 體外分離獲取人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs），并通過(guò)血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）與CD34 抗原鑒定，取第1 代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞接種于增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料上，掃描電鏡觀察細(xì)胞黏附情況。取細(xì)胞接種于增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料作為實(shí)驗(yàn)組，等量細(xì)胞直接接種于培養(yǎng)板常規(guī)培養(yǎng)作為對(duì)照組，采用alarmarBlue 法動(dòng)態(tài)檢測(cè)細(xì)胞增殖率，實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)基因VEGF、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1（fms-related tyrosine kinase 1，F(xiàn)lt-1）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2（kinase insert domain receptor，Kdr）的mRNA 表達(dá)。取SD 大鼠6 只，將支架材料包埋于大鼠股內(nèi)側(cè)皮下，實(shí)驗(yàn)組采用增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料、中央軸向植入血管束，對(duì)照組采用非增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料，分別于植入5、10 d 取出，行冰凍切片并HE 染色動(dòng)態(tài)觀察支架材料內(nèi)部的血管化狀態(tài)。 結(jié)果 分離的細(xì)胞通過(guò)形態(tài)學(xué)及vWF、CD34 免疫熒光鑒定為HU VECs。掃描電鏡示HUVECs 在支架材料上黏附較好。HUVECs 在實(shí)驗(yàn)組支架材料上增殖明顯，在第3 天后細(xì)胞增殖率開(kāi)始高于對(duì)照組，11 d 達(dá)到增殖平臺(tái)期時(shí)細(xì)胞數(shù)仍多于對(duì)照組（P lt; 0.05）。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)示，培養(yǎng)3 d 實(shí)驗(yàn)組VEGF、Flt-1、Kdr 的mRNA 表達(dá)均顯著高于對(duì)照組（P lt; 0.05）。包埋大鼠皮下實(shí)驗(yàn)可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)組5、10 d 時(shí)植入的血管仍通暢，其周?chē)律茈S時(shí)間延長(zhǎng)而增多，材料周緣可見(jiàn)宿主血管浸潤(rùn)生長(zhǎng)，但新生血管稀疏；對(duì)照組僅有纖維組織生長(zhǎng)，10 d 時(shí)材料已大部分降解，組織難以長(zhǎng)入。 結(jié)論 增強(qiáng)型生物活性玻璃/ 膠原復(fù)合材料在大鼠體內(nèi)外可促進(jìn)血管化，可能適于作為構(gòu)建血管化組織工程骨的支架材料。