研究肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）對培養(yǎng)的人外泌汗腺上皮細胞（human eccrine sweat gland epithelial cells，hESGc）的促增殖作用，以及細胞內(nèi)磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2，p-ERK1/2）蛋白的表達。 方法 在無血清角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)基（keratinocyte serum free medium，KSFM）中培養(yǎng)hESGc，取第1 代細胞進行實驗。免疫組織化學(xué)染色檢測C-met 表達。MTT 法檢測HGF 對hESGc 的促增殖作用，實驗分為3 組：空白組、對照組和實驗組?？瞻捉M僅含200 μL KSFM；對照組于96 孔板以2 × 103 個/ 孔接種hESGc，并加入200 μL KSFM；實驗組于96 孔板以2 × 103 個/ 孔接種hESGc 并加入200 μLKSFM 后，再分別加入不同濃度（2、20、40、80 ng/mL）HGF。實驗組于加入各濃度HGF 前以及加入后2、4 d，觀察細胞增殖情況。實驗組于加入40 ng/mL HGF 后即刻，5、30、90 和120 min，采用Western blot 方法檢測細胞內(nèi)p-ERK1/2表達規(guī)律。 結(jié) 果 hESGc 抗-C-met 免疫組織化學(xué)染色胞漿可見陽性染色，細胞核染色為藍色。MTT 法檢測示40、80 ng/ mLHGF 對hESGc 具有顯著促增殖作用（P lt; 0.05）。在含40 ng/mL HGF 的KSFM中培養(yǎng)2 d，吸光度（A）值為0.239 3 ±0.070 9，增殖率為74.2%，對照組A 值為0.137 4 ± 0.029 0；培養(yǎng)4 d，40 ng/mL HGF 實驗組A 值為0.287 8 ± 0.074 3，增殖率為74.8%，對照組A 值為0.164 6 ± 0.035 0，兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。在含80 ng/mL HGF 的KSFM中培養(yǎng)2 d，A 值為0.212 3 ± 0.059 2，增殖率為54.5%；培養(yǎng)4 d，80 ng/mL HGF 實驗組A 值為0.231 0 ± 0.056 7，增殖率為40.3%；與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。p-ERK1/2 在40 ng/mL HGF 刺激5 min 后表達達高峰，相對積分吸光度值（relative integral absorbance，RIA）為0.593 2 ± 0.192 2，較刺激后即刻增加8.1 倍（P lt; 0.01）；刺激30、90 及120 min 后RIA 與刺激后即刻比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt; 0.05） 結(jié)論 HGF 可促進hESGc 增殖，并能引起ERK1/2蛋白磷酸化。
目的 探索體外構(gòu)建人外泌汗腺樣結(jié)構(gòu)的方法。 方法 取自愿捐獻的正常腋部全層皮膚，分離培養(yǎng)汗腺腺上皮細胞，倒置相差顯微鏡下觀察。將汗腺腺上皮細胞以2 × 105 個/cm2 密度接種至Matrigel 凝膠下（A 組）、凝膠上（B 組）、凝膠中（C 組），進行三維立體培養(yǎng)，激光掃描共聚焦顯微鏡、HE 染色及免疫組織化學(xué)染色觀察有無汗腺樣結(jié)構(gòu)形成。 結(jié)果 原代汗腺分泌部上皮細胞接種后24 h 可見細胞貼壁，貼壁細胞呈梭形，2 ～ 3 d 后細胞呈多克隆麥粒樣生長，14 d 后細胞融合呈鋪路石樣生長，融合后的汗腺腺上皮細胞呈扁平多角形，中間有較大圓形核；第1 代細胞形態(tài)與原代極為相似；第2 代細胞形態(tài)不規(guī)則，多數(shù)伸出長偽足；第3 代細胞多呈星形狀，細胞體積大，與鄰近細胞相互融合。A 組汗腺腺上皮細胞三維立體培養(yǎng)11 d 形成管腔結(jié)構(gòu)；B 組汗腺腺上皮細胞立體培養(yǎng)8 h，細胞胞漿伸長呈絲狀，與鄰近細胞相連呈管腔或半管腔形，但細胞增殖不明顯；C 組汗腺腺上皮細胞三維立體培養(yǎng)2 ～ 3 d，細胞分裂增生，增生細胞彼此緊密排列成管腔結(jié)構(gòu)，中間可見明顯腔隙，隨新生細胞增多，管腔結(jié)構(gòu)逐漸演變?yōu)椴灰?guī)則球形結(jié)構(gòu)。激光掃描共聚焦顯微鏡觀察示C 組形成球形結(jié)構(gòu)，細胞團中央有管腔結(jié)構(gòu)；球形結(jié)構(gòu)HE 染色示為管腔結(jié)構(gòu)，免疫組織化學(xué)染色示角蛋白18、癌胚抗原表達陽性，與汗腺分泌部管狀結(jié)構(gòu)極為相似。 結(jié)論 汗腺腺上皮細胞在Matrigel 凝膠中三維立體培養(yǎng)可形成汗腺樣結(jié)構(gòu)。