目的 建立分離、培養(yǎng)成人外周血來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）的方法，觀察成人血源性MSCs體外成骨潛能。方法 抽取成年志愿者外周靜脈血30份，每份15 ml。用淋巴細(xì)胞分離液（密度為1.077 g/ml）梯度離心，取單個(gè)核細(xì)胞在含有20%胎牛血清的αMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)擴(kuò)增MSCs，流式細(xì)胞儀分析MSCs表型。第2次傳代培養(yǎng)時(shí)在培養(yǎng)液中添加成骨誘導(dǎo)因子（地塞米松、β-磷酸甘油、維生素C和1，25二羥維生素D3）。第5代傳代細(xì)胞檢測(cè)堿性磷酸酶、Ⅰ型膠原(collagen type Ⅰ, Col Ⅰ)、骨鈣素(osteocalcin, OC)和骨粘連蛋白(osteonectin, ON)表達(dá)，連續(xù)培養(yǎng)1個(gè)月后檢測(cè)鈣結(jié)節(jié)形成情況。結(jié)果 成人外周血中存在MSCs，集落形成率為0.27±0.22/106單個(gè)核細(xì)胞，表達(dá)CD44、CD54、CD105和CD166，而不表達(dá)與造血系相關(guān)的CD14、CD34、CD45及內(nèi)皮細(xì)胞特異的CD31。地塞米松、β-磷酸甘油、維生素C和1，25二羥維生素D3可作用于傳代培養(yǎng)的血源性MSCs，表現(xiàn)為堿性磷酸酶染色陽(yáng)性細(xì)胞增多，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcriptionpolymerase chain reaction, RT-PCR）產(chǎn)物電泳條帶顯示Col I、OC和ON表達(dá)，鹽酸四環(huán)素?zé)晒鈽?biāo)記證實(shí)有鈣結(jié)節(jié)形成。結(jié)論 建立的成人MSCs分離、培養(yǎng)條件可分選出外周血貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞中一組獨(dú)特的細(xì)胞群。成人血源性MSCs具有較強(qiáng)的體外成骨潛能，可望成為一種新的骨組織工程種子細(xì)胞。
目的 評(píng)價(jià)腺病毒介導(dǎo)的人骨形成蛋白 - 2基因 (Adv- h BMP- 2 )轉(zhuǎn)染人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 (MSCs)的誘導(dǎo)成骨能力。方法 從人骨髓中分離培養(yǎng)獲取 MSCs,分為三組 :1Adv- h BMP- 2轉(zhuǎn)染細(xì)胞組 ;2 Adv- βgal轉(zhuǎn)染細(xì)胞組 ;3未轉(zhuǎn)染細(xì)胞組。分別于體外行 Western immunoblot試驗(yàn)、堿性磷酸酶 (AL P)和 Von Kossa染色、AL P定量測(cè)定 ,以及裸鼠肌內(nèi)誘導(dǎo)成骨試驗(yàn)。共 9只裸鼠 ,雙側(cè)股后肌群內(nèi)注射 ,每組 6側(cè)。結(jié)果 Adv- h BMP- 2組 MSCs可分泌 BMP- 2蛋白 ;轉(zhuǎn)染后第 9天 AL P染色多數(shù)細(xì)胞為陽(yáng)性 ,其它兩組 AL P染色陽(yáng)性細(xì)胞少見(jiàn) ;AL P活性第 3天開(kāi)始升高 ,12天達(dá)高峰為 14 .76單位 ,與其它兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (Plt;0 .0 5 ) ;于第 2 1天后出現(xiàn)鈣結(jié)節(jié) ,而其它兩組未見(jiàn)。裸鼠肌內(nèi)注射后 4周 Adv- h BMP- 2組 X線片均有異位成骨 ,Adv- βgal轉(zhuǎn)染細(xì)胞組未見(jiàn)明顯成骨 ,未轉(zhuǎn)染細(xì)胞組僅有少量骨形成。組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn) :Adv- h BMP- 2組也可見(jiàn)典型的板層骨和骨髓腔腔形成，Adv-βga組主要為纖維組織，未轉(zhuǎn)染組也可見(jiàn)散在骨小梁形成功之路。 結(jié)論 Adv-hMBP-2基因轉(zhuǎn)染可誘導(dǎo)人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞成骨。