目的探討B(tài)MSCs來源細胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）支架結(jié)合微骨折骨髓刺激術(shù)后血凝塊在體外軟骨化分化的可行性及有效性。 方法選用5～6月齡新西蘭大白兔40只，隨機取20只兔骨髓分離、培養(yǎng)BMSCs并行多向分化鑒定；利用凍干技術(shù)制備BMSCs來源的ECM支架，通過掃描電鏡觀察其微結(jié)構(gòu)。于兔股骨滑車處作直徑6 mm軟骨缺損，垂直缺損面作5個直徑1 mm、深3 mm的微骨折孔洞。將未穿刺的20只動物隨機分為2組（n=10）：A組取微骨折術(shù)后滲出的血凝塊直接體外培養(yǎng)；B組在A組基礎上用TGF-β3誘導其成軟骨分化。將抽取骨髓的20只動物隨機分為2組（n=10）：C組用制備的ECM支架植入軟骨缺損處，待ECM支架與滲出的骨髓血充分融合后取出體外直接培養(yǎng)；D組在C組基礎上給于TGF-β3誘導其成軟骨分化。體外培養(yǎng)1、2、4、8周時分別行大體、組織學、免疫組織化學及生化成分分析觀察，檢測其分化效果。 結(jié)果分離、培養(yǎng)的細胞經(jīng)多向分化鑒定，呈成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞的表型特征。掃描電鏡觀察示ECM支架呈三維多孔狀結(jié)構(gòu)。在培養(yǎng)過程中，A組組織塊逐漸降解消失；C組組織塊逐漸形成質(zhì)地柔軟的疏松樣結(jié)構(gòu)；B、D組組織塊逐漸形成表面平滑的新生軟骨樣組織。體外培養(yǎng)4、8周，C、D組組織塊面積均大于B組，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；D組大于C組，差異亦有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。A、C組HE、番紅O及免疫組織化學染色示組織內(nèi)僅有少量細胞分布，未見糖胺多糖（glycosaminoglycan，GAG）及Ⅱ型膠原的積累；B、D組可見組織內(nèi)出現(xiàn)許多軟骨陷窩樣結(jié)構(gòu)，且GAG及Ⅱ型膠原分布逐漸增多。生化成分分析示，培養(yǎng)過程中，B、D組GAG及總膠原含量逐漸增加，其中D組增加更明顯，培養(yǎng)至4、8周，D組與B組比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論BMSCs來源的ECM支架結(jié)合微骨折骨髓刺激術(shù)后血凝塊在體外給予TGF-β3誘導培養(yǎng)時具有良好的軟骨化分化潛能。
目的 觀察大鼠骨髓刺激后骨髓源內(nèi)皮祖細胞（endothelial progenitor cells，EPCs）數(shù)量和功能的改變，探討采用骨髓刺激后骨髓干細胞移植提高下肢缺血性疾病療效的可能機制。 方法 取12 只SPF 級雄性Lewis 大鼠，體重200 ～ 250 g，按是否皮下注射重組人粒細胞集落刺激因子注射液分為刺激組和對照組（n=6）。取骨髓單個核細胞用EBM-2 培養(yǎng)液進行誘導分化，培養(yǎng)7 d 后對貼壁細胞采用異硫氰酸熒光素- 荊豆凝血素1 和DiI 標記的乙酰化低密度脂蛋白染色進行EPCs 鑒定及計數(shù)；同時采用黏附能力測定實驗觀察EPCs 的黏附能力。另取12 只SPF 級雄性Lewis 大鼠制備單側(cè)后肢缺血模型，在模型制備后3 d 將8 × 106 個EPCs 移植至缺血側(cè)后肢的肌肉內(nèi)，按照移植EPCs來源不同將后肢缺血大鼠分為刺激組和對照組（n=6）。EPCs 移植3 周后行后肢血管造影，計算缺血側(cè)后肢側(cè)支血管數(shù)目。 結(jié) 果 大鼠骨髓單個核細胞培養(yǎng)7 d 后刺激組EPCs 數(shù)量為（145.2 ± 37.0）個/HP，大于對照組（95.2 ± 39.4）個 /HP（P lt; 0.05）；刺激組黏附EPCs 數(shù)量為（21.8 ± 4.3）個/HP，大于對照組（15.0 ± 5.2）個/HP（P lt; 0.05）。大鼠骨髓源EPCs移植至缺血肢體后3 周，刺激組EPCs 移植后缺血側(cè)后肢側(cè)支血管數(shù)目為（4.2 ± 1.2）個，大于對照組的（2.7 ± 0.8）個（P lt;0.05）。 結(jié) 論 骨髓刺激使骨髓源EPCs 數(shù)量增加、功能改善，可能是骨髓刺激后骨髓干細胞移植提高下肢缺血性疾病療效的機制之一。