目的探討B(tài)MSCs來(lái)源細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）支架結(jié)合微骨折骨髓刺激術(shù)后血凝塊在體外軟骨化分化的可行性及有效性。 方法選用5～6月齡新西蘭大白兔40只，隨機(jī)取20只兔骨髓分離、培養(yǎng)BMSCs并行多向分化鑒定；利用凍干技術(shù)制備BMSCs來(lái)源的ECM支架，通過(guò)掃描電鏡觀察其微結(jié)構(gòu)。于兔股骨滑車(chē)處作直徑6 mm軟骨缺損，垂直缺損面作5個(gè)直徑1 mm、深3 mm的微骨折孔洞。將未穿刺的20只動(dòng)物隨機(jī)分為2組（n=10）：A組取微骨折術(shù)后滲出的血凝塊直接體外培養(yǎng)；B組在A組基礎(chǔ)上用TGF-β3誘導(dǎo)其成軟骨分化。將抽取骨髓的20只動(dòng)物隨機(jī)分為2組（n=10）：C組用制備的ECM支架植入軟骨缺損處，待ECM支架與滲出的骨髓血充分融合后取出體外直接培養(yǎng)；D組在C組基礎(chǔ)上給于TGF-β3誘導(dǎo)其成軟骨分化。體外培養(yǎng)1、2、4、8周時(shí)分別行大體、組織學(xué)、免疫組織化學(xué)及生化成分分析觀察，檢測(cè)其分化效果。 結(jié)果分離、培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)多向分化鑒定，呈成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞的表型特征。掃描電鏡觀察示ECM支架呈三維多孔狀結(jié)構(gòu)。在培養(yǎng)過(guò)程中，A組組織塊逐漸降解消失；C組組織塊逐漸形成質(zhì)地柔軟的疏松樣結(jié)構(gòu)；B、D組組織塊逐漸形成表面平滑的新生軟骨樣組織。體外培養(yǎng)4、8周，C、D組組織塊面積均大于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；D組大于C組，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。A、C組HE、番紅O及免疫組織化學(xué)染色示組織內(nèi)僅有少量細(xì)胞分布，未見(jiàn)糖胺多糖（glycosaminoglycan，GAG）及Ⅱ型膠原的積累；B、D組可見(jiàn)組織內(nèi)出現(xiàn)許多軟骨陷窩樣結(jié)構(gòu)，且GAG及Ⅱ型膠原分布逐漸增多。生化成分分析示，培養(yǎng)過(guò)程中，B、D組GAG及總膠原含量逐漸增加，其中D組增加更明顯，培養(yǎng)至4、8周，D組與B組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論BMSCs來(lái)源的ECM支架結(jié)合微骨折骨髓刺激術(shù)后血凝塊在體外給予TGF-β3誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)具有良好的軟骨化分化潛能。
目的 觀察大鼠骨髓刺激后骨髓源內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells，EPCs）數(shù)量和功能的改變，探討采用骨髓刺激后骨髓干細(xì)胞移植提高下肢缺血性疾病療效的可能機(jī)制。 方法 取12 只SPF 級(jí)雄性Lewis 大鼠，體重200 ～ 250 g，按是否皮下注射重組人粒細(xì)胞集落刺激因子注射液分為刺激組和對(duì)照組（n=6）。取骨髓單個(gè)核細(xì)胞用EBM-2 培養(yǎng)液進(jìn)行誘導(dǎo)分化，培養(yǎng)7 d 后對(duì)貼壁細(xì)胞采用異硫氰酸熒光素- 荊豆凝血素1 和DiI 標(biāo)記的乙?；兔芏戎鞍兹旧M(jìn)行EPCs 鑒定及計(jì)數(shù)；同時(shí)采用黏附能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)觀察EPCs 的黏附能力。另取12 只SPF 級(jí)雄性Lewis 大鼠制備單側(cè)后肢缺血模型，在模型制備后3 d 將8 × 106 個(gè)EPCs 移植至缺血側(cè)后肢的肌肉內(nèi)，按照移植EPCs來(lái)源不同將后肢缺血大鼠分為刺激組和對(duì)照組（n=6）。EPCs 移植3 周后行后肢血管造影，計(jì)算缺血側(cè)后肢側(cè)支血管數(shù)目。 結(jié) 果 大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)7 d 后刺激組EPCs 數(shù)量為（145.2 ± 37.0）個(gè)/HP，大于對(duì)照組（95.2 ± 39.4）個(gè) /HP（P lt; 0.05）；刺激組黏附EPCs 數(shù)量為（21.8 ± 4.3）個(gè)/HP，大于對(duì)照組（15.0 ± 5.2）個(gè)/HP（P lt; 0.05）。大鼠骨髓源EPCs移植至缺血肢體后3 周，刺激組EPCs 移植后缺血側(cè)后肢側(cè)支血管數(shù)目為（4.2 ± 1.2）個(gè)，大于對(duì)照組的（2.7 ± 0.8）個(gè)（P lt;0.05）。 結(jié) 論 骨髓刺激使骨髓源EPCs 數(shù)量增加、功能改善，可能是骨髓刺激后骨髓干細(xì)胞移植提高下肢缺血性疾病療效的機(jī)制之一。