目的 觀察15-脂氧合酶-1（15-LOX-1）基因轉(zhuǎn)移對氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用。 方法 7日齡C57BL/6J小鼠96只，隨機分為正常對照組、氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變（OIR）模型組、基因治療組和空白載體組。將小鼠與哺乳母鼠共同置于氧濃度為（75plusmn;2）%的氧箱內(nèi)飼養(yǎng)5 d后轉(zhuǎn)移至正常環(huán)境中飼養(yǎng)5 d，建立OIR模型。小鼠出生后第12天基因治療組玻璃體腔注射攜帶增強型綠色熒光蛋白(EGFP)和小鼠15-LOX-1基因的重組腺病毒（Ad-15-LOX-1-EGFP）載體 1 mu;l；空白載體組注射等量攜帶EGFP的重組腺病毒（Ad-EGFP）載體。注射后第2天行視網(wǎng)膜鋪片熒光顯微鏡觀察EGFP的表達。注射后第5天行免疫熒光染色法、實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)和蛋白免疫印跡法檢測15-LOX-1-基因轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜的表達；視網(wǎng)膜鋪片觀察視網(wǎng)膜血管變化，測量視網(wǎng)膜無灌注區(qū)和新生血管的相對面積；石蠟切片蘇木精伊紅染色并計數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核。結(jié)果 Ad-15-LOX-1-EGFP注射第2天，視網(wǎng)膜鋪片上觀察到EGFP的表達。免疫熒光染色結(jié)果顯示,15-LOX-1基因轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜主要表達在外叢狀層、內(nèi)核層和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層?；蛑委熃M15-LOX-1蛋白和mRNA表達水平明顯高于OIR模型組和空白載體組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t蛋白表達水平=22.74、24.13，tmRNA表達水平=12.51、13.40；P＜0.01)；基因治療組視網(wǎng)膜無灌注區(qū)和新生血管面積較OIR模型組和空白載體組顯著減小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t無血管區(qū)面積=16.22、14.31，t新生血管面積=9.97、9.07；P＜0.01)；基因治療組中突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核與OIR模型組和空白載體組比較明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=14.25、11.62，P＜0.01)。結(jié)論 15-LOX-1基因轉(zhuǎn)移不僅可以減少氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜無灌注區(qū)面積,并且對視網(wǎng)膜新生血管有顯著的抑制作用。
目的觀察抑制光損傷人視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子A（VEGF-A）的表達對趨化因子受體3（CCR3）配體嗜酸細(xì)胞活化趨化因子（eotaxin）表達的影響。 方法體外培養(yǎng)人RPE細(xì)胞，取第8~12代生長良好的傳代細(xì)胞用于實驗。將同代細(xì)胞隨機分為正常對照組、光照損傷組和光照干預(yù)組。采用波長400 nm的藍色節(jié)能燈以（600±100）Lux持續(xù)光照RPE細(xì)胞12 h建立光損傷模型，光照干預(yù)組采用0.125 mg/ml的VEGF-A受體拮抗劑雷珠單抗處理光損傷的RPE細(xì)胞；正常對照組以錫箔紙包裹細(xì)胞培養(yǎng)皿避光培養(yǎng)。結(jié)束光照24 h時，應(yīng)用實時聚合酶鏈反應(yīng)、酶聯(lián)免疫吸附測定、蛋白免疫印跡法及免疫組織化學(xué)染色法檢測3組細(xì)胞中VEGF-A、eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3及核因子（NF）-κB的mRNA和蛋白表達情況。 結(jié)果光照損傷組VEGF-A、eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3、NF-κB的mRNA和蛋白表達較正常對照組明顯增加，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。光照干預(yù)組VEGF-A、eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3、NF-κB的mRNA和蛋白表達較光照損傷組明顯降低，差異也有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論抑制光損傷后人RPE細(xì)胞VEGF-A的表達可以下調(diào)CCR3配體eotaxin的表達，其機制可能與阻斷轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的激活有關(guān)。