目的 研究體外擴增過程中，CD34+細胞內(nèi)B細胞特異單克隆鼠白血病毒整合位點基因1（B-cell-specific monoclonal leukemia virus insert site 1，Bmi1）和人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）基因的表達水平與其擴增特性的相關(guān)性。 方法采用含F(xiàn)BS、干細胞生長因子、Flt-3配體和促血小板生成素的IMDM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)臍血CD34+細胞，在28 d培養(yǎng)過程中檢測CD34+細胞擴增倍數(shù)、CD34+細胞比生長速率以及集落形成率的變化趨勢，并采用熒光定量PCR檢測體外擴增過程中CD34+細胞內(nèi)Bmi1和hTERT基因表達水平變化，分析以上基因表達水平與CD34+細胞擴增特性之間的關(guān)系。 結(jié)果經(jīng)過28 d的體外培養(yǎng)，CD34+細胞共擴增了（20.1 ± 3.5）倍，其占擴增后總細胞的比例由培養(yǎng)前的95.5% ± 2.6%下降至2.1% ± 0.4%；CD34+細胞的比生長速率和集落形成率均在培養(yǎng)7 d后出現(xiàn)明顯下降，而細胞內(nèi)Bmi1和hTERT mRNA的表達水平在培養(yǎng)7 d時達最高，此后逐漸下降至培養(yǎng)前水平。 結(jié)論Bmi1和hTERT基因表達與CD34+細胞體外增殖能力可能存在一定相關(guān)性。
目的 研究CD34+ 細胞體外誘導(dǎo)的肝樣細胞在小鼠體內(nèi)修復(fù)受損肝組織的作用。 方法 采用密度梯度離心法分離臍血中的單個核細胞并獲得富集CD34+ 細胞，調(diào)整細胞密度為1 × 105 個/mL，使用含干細胞生長因子（stem cell factor，SCF）、肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）、EGF、抑瘤素M（oncostatin M，OSM）和bFGF的無血清培養(yǎng)基（5 種細胞因子濃度分別為50、20、20、10、10 ng/mL）體外誘導(dǎo)10 d。取6 周齡雌性ICR 小鼠48 只，以二乙酰氟氨和CCl4 注射制備肝損傷模型。將小鼠隨機分為實驗組和對照組（n=24），實驗組將誘導(dǎo)后細胞（1.6 × 105 個 / 只，含CD34+ 細胞1 × 104 個）通過尾靜脈注射入肝損傷小鼠體內(nèi)，對照組注射等量無血清培養(yǎng)基，術(shù)后7、14、21、28 d 兩組分別處死6 只小鼠，行HE 染色、PCR 凝膠電泳、免疫組織化學染色及肝功能檢測。 結(jié)果 HE 染色顯示，對照組術(shù)后28 d時肝組織形態(tài)恢復(fù)正常，實驗組術(shù)后14 d 時即已恢復(fù)正常。PCR 凝膠電泳和免疫組織化學染色結(jié)果顯示，實驗組術(shù)后各個時間點在肝組織中均可檢測到表達人血清白蛋白的細胞，而對照組術(shù)后28 d 內(nèi)均未檢測到。肝功能檢測結(jié)果顯示，對照組術(shù)后14 d 時谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性恢復(fù)正常，實驗組小鼠術(shù)后7 d 時即已恢復(fù)正常；但兩組谷草轉(zhuǎn)氨酶活性在28 d 內(nèi)均未恢復(fù)。 結(jié)論 CD34+ 細胞經(jīng)體外向肝細胞方向誘導(dǎo)分化后，能在肝損傷的小鼠體內(nèi)促進受損肝組織形態(tài)和功能的恢復(fù)，并能在小鼠受損肝臟中轉(zhuǎn)化為人源肝細胞。
【摘 要】 目的 探討通過細胞因子及其組合體外誘導(dǎo)臍血CD34+ 細胞轉(zhuǎn)分化成肝樣細胞的效果。 方法 采用密度梯度離心法分離臍血單個核細胞（mononuclear cell，MNC），從MNC 中獲得富集CD34+ 細胞。選用人白血病抑制因子、制瘤素M、bFGF、aFGF、肝細胞生長因子、EGF 及干細胞生長因子7 種細胞因子，濃度分別為10、10、10、10、20、20和50 ng/mL，設(shè)計了 49 種細胞因子組合，分別采用這些細胞因子組合體外培養(yǎng)臍血CD34+ 細胞，培養(yǎng)周期為28 d。以新鮮臍血CD34+ 細胞作為對照。每7 天檢測誘導(dǎo)后細胞中細胞角蛋白19（cytokeratin19，CK-19）、CK-18、谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase，GS）、人血清白蛋白（albumin，ALB）以及甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）的mRNA 轉(zhuǎn)錄情況，并應(yīng)用免疫熒光法、過碘酸- 雪夫（periodic acid-schiff，PAS）染色與吲哚菁綠（indocyanine green，ICG）染色法檢測細胞分泌ALB、合成糖原以及解毒能力，以此判斷是否存在臍血CD34+ 細胞體外向肝樣細胞的轉(zhuǎn)分化。 結(jié)果 在經(jīng)細胞因子誘導(dǎo)后的CD34+ 細胞中均可檢測到人肝細胞所能表達的CK-19 、CK-18 和GS 的mRNA 條帶，未能檢測出肝細胞特征性的ALB 與AFP 的mRNA 條帶；而新鮮臍血CD34+ 細胞中以上5 種蛋白的mRNA 均未能檢出。免疫熒光染色觀察示誘導(dǎo)前后的細胞中均未能檢測到ALB 的表達，且均不能有效吞噬ICG 染料。PAS 反應(yīng)檢測結(jié)果顯示，經(jīng)細胞因子誘導(dǎo)后的細胞紫紅色糖原沉積區(qū)域較新鮮臍血CD34+ 細胞增大，出現(xiàn)紫紅色區(qū)域的細胞增多。 結(jié)論 臍血CD34+ 細胞體外經(jīng)細胞因子組合誘導(dǎo)后，雖有肝細胞相關(guān)蛋白mRNA 表達，但未能轉(zhuǎn)分化為肝樣細胞。
目的 通過檢測血管內(nèi)皮生長因子-C(VEGF-C)及其受體Flt-4在肝癌組織中的表達，分析它們與肝癌脈管形成及臨床病理特征之間的關(guān)系，以了解VEGF-C在肝癌進程中的作用。方法 采用免疫組化染色法檢測62例肝細胞肝癌(HCC)組織及15例正常肝組織中VEGF-C和Flt-4的表達，并計算以CD34為標記的微血管密度(MVD)和以Flt-4為標記的淋巴管密度(LVD)，分析它們相互之間及各自與HCC臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果 HCC組織中VEGF-C及Flt-4的陽性表達率均明顯高于正常肝組織(Plt;0.05,Plt;0.01)。HCC組織中VEGF-C的表達與有無門靜脈癌栓、腫瘤組織學分化程度、術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移有關(guān)(Plt;0.05,Plt;0.01)； Flt-4的表達與腫瘤組織學分化程度及術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)(Plt;0.05,Plt;0.01)； MVD與腫瘤大小、TNM臨床分期、腫瘤組織學分化程度、有無門靜脈癌栓、術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移有關(guān)(Plt;0.05,Plt;0.01)； LVD與腫瘤組織學分化程度、術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移有關(guān)(Plt;0.05,Plt;0.01)。HCC組織中VEGF-C和Flt-4的表達及MVD和LVD這四者之間均兩兩呈正相關(guān)(Plt;0.01)。結(jié)論 VEGF-C和Flt-4在肝癌組織中高表達并與術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)，且與MVD及LVD呈正相關(guān)，提示VEGF-C/Flt-4通路可能通過促進肝癌血管和淋巴管的生成從而影響肝癌的進展及預(yù)后。
目的 探討內(nèi)皮抑素及堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）在膽囊癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為膽囊癌的生物學治療探索理論依據(jù)。方法 運用免疫組化SP法檢測內(nèi)皮抑素、bFGF及CD34在61例膽囊癌組織和10例正常膽囊組織中的表達，并通過CD34的表達計算微血管密度（MVD），分析它們與膽囊癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 內(nèi)皮抑素在正常膽囊組織及膽囊癌組織中的表達陽性率分別為40.00%(4/10)及77.05%(47/61)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)； 膽囊癌組織中，內(nèi)皮抑素的表達強度與其臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，與患者性別及年齡﹑腫瘤部位和大小及組織學分級無關(guān)（P＞0.05）。bFGF在正常膽囊組織和膽囊癌組織中的表達陽性率分別為20.00%（2/10）及67.21%（41/61），差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)； 膽囊癌組織中，bFGF的表達強度與其臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與患者性別及年齡﹑腫瘤部位和大小及組織學分級無關(guān)（P＞0.05）。膽囊癌組織中MVD為（76.66±20.15）個/HP，明顯高于正常膽囊組織的（29.53±5.03）個/HP（P＜0.01）。膽囊癌組織中，臨床分期Ⅲ~Ⅴ期的MVD為（80.53±17.98）個/HP，明顯高于Ⅰ＋Ⅱ期的（46.79±5.38）個/HP（P＜0.01）； 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的MVD為（94.60±7.28）個/HP，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的（58.12±9.24）個/HP (P＜0.01)； MVD在組織學分級G1〔（60.59±14.71）個/HP〕、G2〔（83.08±15.30）個/HP〕及G3〔（96.53±6.92）個/HP〕者間的差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）； MVD與患者性別及年齡﹑腫瘤部位及大小無關(guān)（P＞0.05）。膽囊癌組織中內(nèi)皮抑素的表達與MVD有關(guān)（P＜0.01），bFGF的表達亦與MVD有關(guān)（P＜0.01）。結(jié)論 內(nèi)皮抑素、bFGF及CD34在膽囊癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起不同程度的作用，它們的檢測可給膽囊癌的早期診斷、惡性程度的判定和進一步治療提供有效的依據(jù)。
目的 觀察直腸癌組織及其遠端黏膜組織中P53蛋白表達及微血管分布，并從分子病理學水平探討直腸癌的安全遠側(cè)切緣。方法 對45例中低位直腸癌下緣進行標記，PET/CT檢查并結(jié)合半定量免疫組織化學方法檢測直腸癌及其遠端黏膜組織中P53和CD34蛋白的表達。結(jié)果 直腸癌及其遠端黏膜組織中均可見P53蛋白表達及微血管分布，直腸癌組織中P53蛋白表達及微血管密度(MVD)明顯高于直腸癌遠端黏膜組織(P＜0.01)。直腸癌遠端黏膜組織中P53蛋白表達及MVD隨著距離增大而減少，但有統(tǒng)計學意義的改變只在直腸癌遠端1.5 cm內(nèi)。正常直腸組織中仍有P53蛋白表達和微血管分布。除直腸癌組織及其遠端0.5 cm段黏膜組織中MVD與腫瘤直徑有關(guān)(P＜0.05)外，直腸癌及其遠端黏膜組織中P53蛋白表達及MVD分布與腫瘤直徑、分期以及分化程度均無關(guān)。結(jié)論 從分子病理學角度說明2 cm的直腸癌遠端長度是安全的遠側(cè)切緣。
目的 觀察自體外周血 CD34+ 造血干細胞移植治療不同 Child-Pugh 分級的終末期肝?。╡nd-stage liver disease，ESLD）患者移植前及移植后 3、6、12、36 和 60 個月的吲哚氰綠 15 min 滯留率（indocyanine green retention rate at 15 min，ICGR15）變化情況。 方法 對內(nèi)科嚴格保守治療無效且已達到肝移植適應(yīng)證的不同 Child-Pugh 分級的 60 例晚期肝硬化患者，采用自體外周血 CD34+ 造血干細胞移植，分別在移植前及移植后 3、6、12、36 和 60 個月進行 ICGR15 測定，并對各 Child-Pugh 分級組內(nèi)的各時間點結(jié)果進行比較，以及比較各 Child-Pugh 分級級組之間的 ICGR15 值變化率。 結(jié)果 各 Child-Pugh 分級組 ICGR15 值隨時間延長均呈下降趨勢，其中 Child-Pugh A 級組內(nèi)：移植后 6 個月、12 個月、36 個月及 60 個月組與術(shù)前及移植后 3 個月組比較差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），但移植后 3 個月組與術(shù)前比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），而移植后 12 個月組與移植后 60 個月組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Child-Pugh B 級組內(nèi)：移植后 6 個月、12 個月、36 個月及 60 個月組與術(shù)前及移植后 3 個月組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），移植后 3 個月組與術(shù)前比較差異也有統(tǒng)計學意義（P<0.05），移植后 6 個月組與 12 個月、36 個月及 60 個月組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Child-Pugh C 級組內(nèi)：移植后 6 個月、12 個月、36 個月及 60 個月組與術(shù)前及移植后 3 個月組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），但移植后 3 個月組與術(shù)前比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），而移植后 6 個月組與 12 個月、36 個月及 60 個月組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。各 Child-Pugh 分級組之間 ICGR15 變化率比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。 結(jié)論 自體外周血 CD34+ 造血干細胞移植能長期有效地改善 ESLD 患者的肝功能儲備能力，提高手術(shù)安全性。
目的 檢測甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）陰性與 AFP 陽性穿刺活檢人肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中 CD34 及多克隆癌胚抗原（polyclone carcinoembryonic antigen，pCEA）的表達情況，探討其病理診斷意義。 方法 收集 2013 年—2015 年恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院穿刺活檢病理確診為 HCC 標本 54 例，依據(jù)血清學及免疫組織化學法（免疫組化）檢測 AFP 結(jié)果，將患者分為 AFP 陽性組（n=33）及 AFP 陰性組（n=21）。應(yīng)用免疫組化技術(shù)，檢測 54 例 HCC 組織中 CD34、pCEA 的表達情況。 結(jié)果 AFP 陽性組 pCEA 的陽性表達率（69.7%）高于 AFP 陰性組（38.1%），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；而 CD34 在 AFP 陽性組（90.91%）與 AFP 陰性組（85.71%）中的陽性表達率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。 結(jié)論 AFP 與 CD34、pCEA 聯(lián)合檢測有利于肝穿刺活檢中 HCC 的診斷及其鑒別診斷。
采用共價接枝將 CD34 抗體接枝到聚乙二醇修飾的四氧化三鐵磁性納米粒子上，構(gòu)建具有 CD34 抗體與 PEG 共同修飾的功能型磁性納米粒子。通過紅外檢測（FT-IR）、納米粒子粒徑分析（動態(tài)光散射和透射電子顯微鏡）等方法對修飾后的磁性納米粒子進行檢測，并將其與內(nèi)皮祖細胞（EPCs）共混培養(yǎng)，評價納米粒子的細胞相容性以及對 EPCs 短時間的結(jié)合效果，然后在動態(tài)外加磁場的作用下評價修飾后磁性納米粒子對 EPCs 的定向引導(dǎo)效果。結(jié)果表明，CD34 抗體成功修飾到磁性納米粒子表面，修飾后的納米粒子在一定的濃度范圍內(nèi)有較好的細胞相容性，短時間對 EPCs 具有較好的識別結(jié)合作用，并且能在外加磁場作用下初步實現(xiàn)在動態(tài)環(huán)境下對 EPCs 的定向引導(dǎo)。
目的 檢測血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、白細胞分化抗原34（CD34）及CXC趨化因子受體4（CXCR4）在轉(zhuǎn)移性鼻咽癌患者鼻咽部腫瘤組織中的表達，探討它們與鼻咽癌各種臨床病理因素的關(guān)系以及它們之間的相互聯(lián)系。 方法 采用免疫組織化學鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法檢測2003年3月－2009年5月35例轉(zhuǎn)移性鼻咽癌患者VEGF、CD34及CXCR4在鼻咽部腫瘤組織中的表達情況，結(jié)合患者臨床病理特征進行分析。 結(jié)果 轉(zhuǎn)移性鼻咽癌患者鼻咽部腫瘤組織中的VEGF及CXCR4陽性表達率分別為62.9%（22∕35）和42.9%（15∕35），CD34計數(shù)為11～92，平均43.2 ± 20.5。無肺轉(zhuǎn)移較有肺轉(zhuǎn)移的患者VEGF的陽性表達率高（78.9%、43.8%，P=0.043），多器官轉(zhuǎn)移較單器官轉(zhuǎn)移的患者CXCR4的表達強度高（62.5%、26.3%，P=0.044）。 結(jié)論 VEGF表達陽性的患者易發(fā)生肺轉(zhuǎn)移；CXCR4強表達的患者易發(fā)生多器官轉(zhuǎn)移。