觀察TGF-β1 中和抗體對TGF-β 誘導(dǎo)的肌腱細(xì)胞膠原產(chǎn)生及術(shù)后粘連形成的影響，探討生物學(xué)調(diào)節(jié)在肌腱粘連防治中的作用。 方法 取6 只成年新西蘭大白兔12 條屈趾肌腱分離肌腱成纖維細(xì)胞、腱外膜細(xì)胞和腱內(nèi)膜細(xì)胞，將細(xì)胞隨機(jī)分成2 組，實(shí)驗組加入1 ng/mL TGF-β 后，再加入不同濃度TGF-β1 中和抗體，對照組不添加任何試劑，培養(yǎng)3 d 后ELISA 測定Col Ⅰ的產(chǎn)生。取84 只兔行中趾屈趾肌腱切斷吻合術(shù)，隨機(jī)分成3 組，腱鞘內(nèi)分別注入生理鹽水（NS 組,n=36）、1.0 μg/mL TGF-β1 中和抗體（1.0 μg/mL TGF-β1 組，n=36）和2.0 μg/mL TGF-β1 中和抗體（2.0 μg/mLTGF-β1 組，n=12）。術(shù)后4、8 周取出肌腱行肌腱粘連檢測、生物力學(xué)測定、組織學(xué)觀察和掃描電鏡觀察。1、2、4、8 周后取出NS 組及1.0 μg/mL TGF-β1 組肌腱，原位雜交方法測定TGF-β1 和Col Ⅰ mRNA 的表達(dá)。 結(jié)果 ELISA 檢測顯示，TGF-β1 能明顯提高肌腱細(xì)胞Col Ⅰ的產(chǎn)生；TGF-β1 抗體能降低肌腱成纖維細(xì)胞、腱外膜細(xì)胞和腱內(nèi)膜細(xì)胞Col Ⅰ的產(chǎn)生，且呈劑量依賴關(guān)系。術(shù)后4、8 周，NS 組屈趾肌腱滑動距離較短，模擬主動屈曲度明顯受限，與1.0 μg/mL TGF-β1 組和2.0 μg/ mL TGF-β1 組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；最大抗斷裂載荷各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。掃描電鏡和組織學(xué)觀察結(jié)果顯示，術(shù)后4、8 周NS 組膠原纖維排列紊亂，1.0 μg/mL TGF-β1 組和2.0 μg/mL TGF-β1 組膠原纖維排列整齊。原位雜交結(jié)果顯示，術(shù)后各時間點(diǎn)1.0 μg/mL TGF-β1 組TGF-β1 mRNA和Col ⅠmRNA表達(dá)水平均低于NS組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 TGF-β1 中和抗體能有效抑制TGF-β1 在肌腱損傷修復(fù)中的作用，減少粘連形成。
目的 對乳豬竇房結(jié)所在部位進(jìn)行準(zhǔn)確定位，建立一套可靠的竇房結(jié)細(xì)胞取材、分離、純化培養(yǎng)技術(shù)；觀察竇房結(jié)細(xì)胞與Col Ⅰ纖維支架的相容性。 方 法 24 h 內(nèi)新生純種長白山乳豬5 只，雌雄不拘，體重0.45 ～ 0.55 kg。實(shí)驗動物采用多導(dǎo)電生理記錄儀標(biāo)記房波最早出現(xiàn)的部位，在該位置取材行原代竇房結(jié)細(xì)胞培養(yǎng)，分別采用常規(guī)方法培養(yǎng)和差速貼壁分離技術(shù)、5-BrdU 處理純化培養(yǎng)；于左心房部位取材行心房肌細(xì)胞純化培養(yǎng)作為對照。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞貼壁時間、單細(xì)胞出現(xiàn)搏動時間、搏動頻率等。將純化培養(yǎng)的竇房結(jié)細(xì)胞以5 × 105 個/mL 密度接種至經(jīng)預(yù)濕處理的Col Ⅰ纖維支架復(fù)合培養(yǎng)5 d，行HE 染色觀察及掃描電鏡觀察。 結(jié)果 房波最早出現(xiàn)的位置即為竇房結(jié)所在部位。純化培養(yǎng)的竇房結(jié)細(xì)胞有3 種形態(tài)，即梭形、三角形與不規(guī)則形，其中梭形細(xì)胞最多；心房肌細(xì)胞主要為三角形及不規(guī)則形，而無梭形細(xì)胞。竇房結(jié)細(xì)胞純化培養(yǎng)與常規(guī)培養(yǎng)比較，梭形細(xì)胞所占比例分別為73.0% ± 2.9%、44.7% ± 2.3%，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）；不規(guī)則形細(xì)胞分別為7.0% ± 1.7%、36.1% ± 2.6%，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）；三角形細(xì)胞分別為20.0% ± 2.1%、19.2% ± 2.5%，二者差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。竇房結(jié)細(xì)胞復(fù)合Col Ⅰ纖維支架培養(yǎng)5 d，HE 染色觀察示Col Ⅰ纖維支架材料中有大量細(xì)胞；掃描電鏡見細(xì)胞成團(tuán)吸附于支架表面及孔隙側(cè)壁，并可見細(xì)胞間通過突起相互連接，或伸出偽足貼附于支架孔隙壁上。 結(jié)論 通過準(zhǔn)確竇房結(jié)定位，采用差速貼壁結(jié)合5-BrdU 處理的純化培養(yǎng)可明顯提高乳豬竇房結(jié)梭形細(xì)胞比例，是一種可靠的竇房結(jié)細(xì)胞純化培養(yǎng)技術(shù)。竇房結(jié)細(xì)胞和Col Ⅰ纖維支架有較好的細(xì)胞相容性。