目的 觀察氣道平滑肌細胞經哮喘致敏血清刺激后嗜酸粒細胞趨化因子( Eotaxin) 的表達變化, 并探討其可能的機制。方法 貼壁法體外培養(yǎng)大鼠氣道平滑肌細胞。建立大鼠哮喘模型,采血收集致敏血清。用致敏血清刺激體外培養(yǎng)的氣道平滑肌細胞, 或同時予以致敏血清和地塞米松干預。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定培養(yǎng)液上清中Eotaxin 水平, 放射免疫法測定細胞內環(huán)磷酸腺苷( cAMP) 表達, 逆轉錄聚合酶鏈反應半定量檢測細胞中Eotaxin mRNA 表達。結果 致敏血清干預后,細胞培養(yǎng)上清Eotaxin 水平和細胞內Eotaxin mRNA 表達均較正常對照組顯著升高[ ( 107. 09 ±7. 12) ng/L比( 0. 63 ±0. 56) ng/L, P lt;0. 05; 1. 39 ±0. 04 比0. 05 ±0. 01, P lt;0. 05] , 細胞內cAMP表達顯著降低[ ( 17. 58 ±3. 62) ng/L 比( 32. 39 ±3. 36) ng/L, P lt;0. 05] 。地塞米松與致敏血清同時干預后, 上清中Eotaxin 水平[ ( 64. 18 ±4. 04) ng/L] 和胞內Eotaxin mRNA( 0. 77 ±0. 19) 表達較哮喘組顯著降低, 細胞內cAMP 表達顯著升高[ ( 58. 99 ±5. 94) ng/L] ( P lt; 0. 05) 。上清Eotaxin 水平與胞內cAMP 水平呈負相關( r= - 0. 788, P lt;0. 01) 。結論 氣道平滑肌細胞在致敏狀態(tài)下Eotaxin 基因和蛋白表達均顯著增強, 可能作為炎性自分泌細胞分泌炎癥因子, 通過cAMP 信號途徑參與哮喘的發(fā)生。
摘要: 目的 研究離體大鼠心肌經二氮嗪預處理（DPC）后環(huán)磷酸腺苷（cAMP）及環(huán)磷酸腺苷依賴蛋白激酶（PKA）表達的變化，探討cAMP信號通路在DPC心肌保護作用中可能的機制。方法 將40只Wistar大鼠建立離體心臟Langendorff灌注模型，隨機分成4組，缺血再灌注組（I/R組，n=10）：在心臟平衡灌流30 min后，缺血30 min再灌注K-H液1 h；二氮嗪預處理組（DPC組,n=10）：在心臟平衡灌流10 min后，給予含二氮嗪（100 μmol/L）的K-H液灌注5 min，再復灌不含二氮嗪的K-H液5 min后，再給予含二氮嗪的K-H液灌注5 min，再復灌不含二氮嗪的K-H液5 min，然后缺血30 min，再灌注K-H液60 min；空白對照組(對照組，n=10)：用等量鹽水代替二氮嗪，過程同DPC組；二甲基亞砜組（DMSO組，n=10）：用DMSO代替二氮嗪，過程同DPC組。取缺氧前和復灌30 min后的冠脈流出液，測定肌酸激酶(CK)的活性，心肌丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶 (SOD)含量，比較各組心肌梗死范圍、心肌組織cAMP和環(huán)磷酸腺苷PKA含量的變化。 結果 心肌組織中MDA含量 DPC組較I/R組明顯減少（8.28±2.04 nmol/mg vs. 15.52±2.18 nmol/mg, q=11.761,Plt;0.05），SOD含量明顯增加（621.39±86.23 U/mg vs. 477.48±65.20 U/mg, q=5.598,Plt;0.05）；復灌30 min后 DPC組冠脈流出液CK活性較I/R組明顯減少（82.55±10.08 U/L vs. 101.64±19.24 U/L, q=5.598,Plt;0.05）；心肌梗死面積明顯減少（5.63%±9.23% vs. 17.58%±5.76%, q=6.176,Plt;0.05）。心肌組織cAMP含量DPC組較I/R組明顯增加（0.64±0.07 pmol/g vs. 0.34±0.05 pmol/g, q=14.738,Plt;0.05）；PKA含量DPC組較I/R組明顯增加［17.13±1.57 pmol/(L·min·mg) vs.12.85±2.01 pmol/(L·min·mg), Plt;0.05］。I/R組與DMSO組、對照組上述指標比較均差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05）。 結論 DPC能增加心肌組織中cAMP、PKA的產生和釋放，拮抗氧自由基，減輕心肌I/R損傷,cAMP信號通路可能參與DPC保護機制的觸發(fā)過程。