目的 探討用小RNA 干擾抑制Ku80 基因表達(dá)以提高A549 肺癌細(xì)胞的放射敏感性。方法 設(shè)計(jì)并化學(xué)合成Ku80 siRNA, 轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的A549 肺癌細(xì)胞。利用RT-PCR 和Western blot分別從mRNA 和蛋白質(zhì)水平對(duì)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞Ku80 基因表達(dá)情況進(jìn)行測(cè)定, 同時(shí)上述轉(zhuǎn)染的細(xì)胞分別照射2、4、6、8 及10 Gy, 利用克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定放射敏感性的變化。結(jié)果 RT-PCR 檢測(cè)顯示在A549 肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染Ku80 siRNA 后24、48 和72 h 三個(gè)時(shí)間點(diǎn)Ku80 mRNA 含量減少, Western blot 分析顯示在轉(zhuǎn)染48 和72 h 兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)Ku80 蛋白含量減少, 與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( P lt;0. 05) ?？寺⌒纬蓪?shí)驗(yàn)提示A549 肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染Ku80 siRNA 后放射敏感性增強(qiáng)。結(jié)論 Ku80 siRNA 轉(zhuǎn)染A549 肺癌細(xì)胞后能夠有效抑制Ku80 基因表達(dá), 提高其放射敏感性。
目的 探討患者體內(nèi)肺癌細(xì)胞Ku80 蛋白含量與其對(duì)順鉑敏感性的相關(guān)性。方法 收集肺癌患者胸腔積液中的肺癌細(xì)胞進(jìn)行體外原代培養(yǎng), 通過(guò)傳代進(jìn)行純化和擴(kuò)增后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。體外藥敏試驗(yàn)采用CCK-8 法測(cè)定肺癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性, 獲得各樣本的半數(shù)抑制濃度( IC50 ) 。利用Western blot 法測(cè)定各樣本細(xì)胞內(nèi)Ku80 蛋白含量。分析Ku80 蛋白含量與順鉑敏感性的相關(guān)性。結(jié)果 非小細(xì)胞肺癌( NSCLC) 組IC50 為( 4. 40 ±3. 39) mg/L, 小細(xì)胞肺癌( SCLC) 組IC50 為( 1. 02 ±0. 54) mg/L, 二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P lt;0. 001) 。NSCLC 組Ku80 蛋白相對(duì)含量為0. 80 ±0. 45,而SCLC 組為0. 48 ±0. 25, 二組之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P lt;0. 05) 。通過(guò)相關(guān)性分析得到肺癌患者Ku80 含量與IC50呈正相關(guān)( r = 0. 618, P lt; 0. 001) 。結(jié)論 NSCLC 患者Ku80 基因表達(dá)高于SCLC患者, 可能與NSCLC 對(duì)化療敏感性差有關(guān)。肺癌細(xì)胞Ku80 蛋白含量與其對(duì)順鉑敏感性呈負(fù)相關(guān)。Ku80 蛋白含量可作為預(yù)測(cè)肺癌患者以鉑類為基礎(chǔ)的化療敏感性的候選指標(biāo)