目的 探討用小RNA 干擾抑制Ku80 基因表達以提高A549 肺癌細胞的放射敏感性。方法 設(shè)計并化學合成Ku80 siRNA, 轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的A549 肺癌細胞。利用RT-PCR 和Western blot分別從mRNA 和蛋白質(zhì)水平對轉(zhuǎn)染后的細胞Ku80 基因表達情況進行測定, 同時上述轉(zhuǎn)染的細胞分別照射2、4、6、8 及10 Gy, 利用克隆形成實驗測定放射敏感性的變化。結(jié)果 RT-PCR 檢測顯示在A549 肺癌細胞轉(zhuǎn)染Ku80 siRNA 后24、48 和72 h 三個時間點Ku80 mRNA 含量減少, Western blot 分析顯示在轉(zhuǎn)染48 和72 h 兩個時間點Ku80 蛋白含量減少, 與對照組比較有統(tǒng)計學差異( P lt;0. 05) ?？寺⌒纬蓪嶒炋崾続549 肺癌細胞轉(zhuǎn)染Ku80 siRNA 后放射敏感性增強。結(jié)論 Ku80 siRNA 轉(zhuǎn)染A549 肺癌細胞后能夠有效抑制Ku80 基因表達, 提高其放射敏感性。
目的 探討患者體內(nèi)肺癌細胞Ku80 蛋白含量與其對順鉑敏感性的相關(guān)性。方法 收集肺癌患者胸腔積液中的肺癌細胞進行體外原代培養(yǎng), 通過傳代進行純化和擴增后進行實驗。體外藥敏試驗采用CCK-8 法測定肺癌細胞對順鉑的敏感性, 獲得各樣本的半數(shù)抑制濃度( IC50 ) 。利用Western blot 法測定各樣本細胞內(nèi)Ku80 蛋白含量。分析Ku80 蛋白含量與順鉑敏感性的相關(guān)性。結(jié)果 非小細胞肺癌( NSCLC) 組IC50 為( 4. 40 ±3. 39) mg/L, 小細胞肺癌( SCLC) 組IC50 為( 1. 02 ±0. 54) mg/L, 二者比較差異有統(tǒng)計學意義( P lt;0. 001) 。NSCLC 組Ku80 蛋白相對含量為0. 80 ±0. 45,而SCLC 組為0. 48 ±0. 25, 二組之間比較差異有統(tǒng)計學意義( P lt;0. 05) 。通過相關(guān)性分析得到肺癌患者Ku80 含量與IC50呈正相關(guān)( r = 0. 618, P lt; 0. 001) 。結(jié)論 NSCLC 患者Ku80 基因表達高于SCLC患者, 可能與NSCLC 對化療敏感性差有關(guān)。肺癌細胞Ku80 蛋白含量與其對順鉑敏感性呈負相關(guān)。Ku80 蛋白含量可作為預測肺癌患者以鉑類為基礎(chǔ)的化療敏感性的候選指標