目的在體外環(huán)境下同時下調(diào)細(xì)胞中Noggin基因和增加BMP-14基因，觀察對脂肪來源干細(xì)胞（adipose derived stem cells，ADSCs）成骨分化能力的影響。 方法取健康成年SD大鼠5只，體質(zhì)量250～300 g，采用Ⅰ型膠原酶消化法獲取原代ADSCs，體外培養(yǎng)、擴(kuò)增。使用慢病毒載體將目的基因轉(zhuǎn)染大鼠ADSCs，根據(jù)目的基因不同將實驗分為3組，A組為空載體病毒Lv-增強(qiáng)型綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)染對照組，B組為Lv-BMP-14轉(zhuǎn)染組，C組為BMP-14+Noggin shRNA轉(zhuǎn)染組。分別于轉(zhuǎn)染后3、7、14 d，采用實時熒光定量PCR檢測BMP-14及成骨相關(guān)基因[Ⅰ型膠原、ALP、骨鈣素（osteocalcin，OCN）]的表達(dá)，轉(zhuǎn)染后14 d采用茜素紅染色鑒定其成骨分化能力。 結(jié)果轉(zhuǎn)染后3 d，各組BMP-14 mRNA相對表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；7、14 d，C組BMP-14 mRNA相對表達(dá)量高于A、B組，B組高于A組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。轉(zhuǎn)染后3 d，C組各成骨相關(guān)基因mRNA相對表達(dá)量顯著高于A、B組（P＜0.05）；A、B組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。轉(zhuǎn)染后7、14 d，C組各成骨相關(guān)基因mRNA相對表達(dá)量顯著高于A、B組，B組高于A組，除轉(zhuǎn)染后7 d A、B組間Ⅰ型膠原mRNA相對表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）外，其余各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。轉(zhuǎn)染后14 d茜素紅染色示，A、B、C組鈣結(jié)節(jié)量呈遞增趨勢。 結(jié)論BMP-14具有增強(qiáng)大鼠ADSCs向成骨細(xì)胞分化的能力；沉默細(xì)胞中的Noggin基因、聯(lián)合BMP-14基因共同作用于大鼠ADSCs，其體外成骨分化能力明顯強(qiáng)于BMP-14單基因轉(zhuǎn)染，兩者有顯著的協(xié)同作用。
【摘要】 目的 探討骨形成蛋白-2（bone morphogenetic protein-2，BMP-2）對室管膜前下區(qū)（anterior subventricular zone，SVZa）神經(jīng)干細(xì)胞DLX5表達(dá)的影響?！》椒ā◇w外培養(yǎng)SVZa神經(jīng)干細(xì)胞，用BMP-2及其拮抗劑Noggin誘導(dǎo)SVZa神經(jīng)干細(xì)胞，分別用免疫熒光染色和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測DLX5表達(dá)變化?！〗Y(jié)果 BMP-2組SVZa神經(jīng)干細(xì)胞DLX5蛋白表達(dá)和DLX5mRNA表達(dá)水平明顯高于對照組（Plt;0.05），且該效應(yīng)能被其拮抗劑Noggin特異性地抑制。 結(jié)論 BMP-2是DLX5上游調(diào)節(jié)基因，可促進(jìn)SVZa神經(jīng)干細(xì)胞DLX5的表達(dá)。【Abstract】 Objective To investigate the effect of bone morphogenetic protein-2 (BMP-2)on expression of DLX5 of neural stem cells in anterior subventricular zone (SVZa). Methods The neural stem cells of SVZa were separated and cultured in vitro, which were induced by BMP-2 and Noggin.Immunofluorescence staining and RT-PCR were employed to assay the expression of DLX5. Results The percentages of expression of DLX5 protein and DLX5 mRNA in BMP-2 group were much higher than those in the control group (Plt;0.05). And this induction could be specifically blocked by Noggin. Conclusion BMP-2 is an upstream gene of DLX5; BMP-2 can promote the expression of DLX5 of the neural stem cells of SVZa.