目的 客觀評價PCR技術(shù)在人類免疫缺陷病毒(human immune-deficiency virus, HIV)檢測中的性能,了解聚合酶鏈技術(shù)(polymerase chain reaction,PCR)PCR技術(shù)作為艾滋病篩查方法的臨床應(yīng)用價值.方法 以diagnosis Tests(診斷性試驗),AIDS(艾滋病),PCR(聚合酶鏈反應(yīng)),HIV(人類免疫缺陷病毒)為檢索詞,對1991年～2001年的MEDLINE和CBM進(jìn)行了回顧性機(jī)檢,并根據(jù)國際公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)對納入文獻(xiàn)進(jìn)行分析.結(jié)果 共檢索到567篇論著性文章,納入53篇.其中與金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對比的有47%,同時計算了和能計算出敏感度、特異度、預(yù)測值等統(tǒng)計學(xué)指標(biāo)的文章數(shù)量分別為25%、23%和23%.沒有文章計算似然比.結(jié)論 PCR技術(shù)在HIV檢測特別是篩查中的應(yīng)用還處在探索階段,有待于提高研究方案的總體設(shè)計水平.
目的 使用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測胃癌淋巴結(jié)的微轉(zhuǎn)移情況，并探討微轉(zhuǎn)移的臨床意義。方法 收集我院2010年1～6月期間40例行胃癌根治術(shù)切除的281枚和10例行胃十二指腸潰瘍手術(shù)切除的39枚，共計320枚淋巴結(jié)標(biāo)本，以CEA、CK-19和CK-20為引物進(jìn)行qRT-PCR檢測其微轉(zhuǎn)移情況，并分析微轉(zhuǎn)移的臨床病理特點(diǎn)。結(jié)果 40例胃癌患者中有28例(70.00%)、31枚(15.35%，31/202)淋巴結(jié)檢測出有微轉(zhuǎn)移。10例胃潰瘍的39枚淋巴結(jié)標(biāo)本，HE染色檢測和qRT-PCR檢測均為陰性。淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的陽性率與腫瘤分化程度、浸潤深度和臨床分期有關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論 qRT-PCR是檢測胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移敏感且特異的方法，對胃癌臨床分期、判斷預(yù)后以及治療方案選擇具有重要意義。
目的 探討HBsAg陽性肝細(xì)胞肝癌（HCC）患者乙型肝炎病毒（HBV）DNA基因型與其患HCC之間的關(guān)系。方法 運(yùn)用PCR條帶分析與基因測序相結(jié)合的方法對我院500例HBsAg陽性患者（其中HCC患者150例）的HBV DNA進(jìn)行分型，并對分型結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果 HBV DNA B型和C型基因型是HBsAg陽性HCC患者和非HCC患者的共同優(yōu)勢基因型，但HCC患者中C型基因型所占比例為65.33%（98/150），明顯高于非HCC患者的25.14%（88/350），而B型則相反，分別為28.67%（43/150）與68.86%（241/350），χ2=75.45，Plt;0.05。HCC患者中，HBV的B型與C型基因型分布在不同性別及不同年齡段之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。結(jié)論 HBV DNA C型基因型在HCC患者中多見，可能與HCC的發(fā)生有關(guān)。
目的 克隆和構(gòu)建攜帶人低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）的Tet-on基因表達(dá)系統(tǒng)反應(yīng)質(zhì)粒PTRE-HIF-1α。方法 以缺氧的肝癌細(xì)胞株HepG2總RNA為模板，進(jìn)行RT-巢式PCR，獲得HIF-1α的cDNA，克隆入Tet-on基因表達(dá)系統(tǒng)反應(yīng)質(zhì)粒PTRE2hyg，酶切重組子鑒定。將構(gòu)建好的PTRE-HIF-1α用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)入HepG2Tet-on細(xì)胞，在強(qiáng)力霉素的作用下，用RT-PCR及Western blot法鑒定重組質(zhì)粒的表達(dá)。結(jié)果 擴(kuò)增出HIF-1α的cDNA測序結(jié)果與Genbank記載完全一致，并成功克隆入PTRE2hyg，將反應(yīng)質(zhì)粒PTRE-HIF-1α轉(zhuǎn)入HepG2Tet-on細(xì)胞，可以完整有效表達(dá)HIF-1α且受強(qiáng)力霉素的調(diào)控。結(jié)論 成功克隆和構(gòu)建攜帶HIF-1α基因的Tet-on基因表達(dá)系統(tǒng)反應(yīng)質(zhì)粒PTRE-HIF-1α，并證明其表達(dá)能在HepG2Tet-on細(xì)胞中受強(qiáng)力霉素調(diào)控。
目的 觀察小鼠肺組織中β-防御素-4（mBD-4）和mBD-6的基因表達(dá)水平，以及急性肺損傷（ALI）對其表達(dá)的影響。方法 將60只成年昆明小鼠隨機(jī)分為ALI組和對照組（每組30只），用脂多糖腹腔注射復(fù)制ALI模型，于不同時間點(diǎn)處死小鼠獲取肺組織，實時熒光定量PCR檢測肺組織mBD-4、mBD-6的基因表達(dá)水平，測序鑒定PCR產(chǎn)物的特異性。結(jié)果 對照組肺組織中各時間點(diǎn)及ALI組6 h點(diǎn)均無mBD-4、mBD-6基因表達(dá)，而ALI組12 h，1 d，3 d時點(diǎn)表達(dá)顯著升高（依次為mBD-4：0.0326±0.0104，0.0487±0.0126，0.0468±0.0092；mBD-6：0.0397±0.0083，0.0444±0.0072，0.0425±0.0113）。ALI組小鼠mBD-4表達(dá)在12 h時點(diǎn)顯著低于1 d，3 d時點(diǎn)（P均lt;0.05），在1 d與3 d時無顯著差異（Pgt;0.05）；ALI組mBD-6表達(dá)在12 h，1 d，3 d時間點(diǎn)無顯著差異（Pgt;0.05）。結(jié)論 mBD-4和mBD-6基因在昆明小鼠肺組織中沒有組成型表達(dá)，而ALI可以誘導(dǎo)其表達(dá)。
目的 探討酶切富集PCR 法檢測非小細(xì)胞肺癌( NSCLC) 患者胸腔積液表皮生長因子受體基因( EGFR) 外顯子19 缺失和外顯子21 L858R 突變的臨床意義。方法 采用EGFR 基因突變酶切富集及非酶切富集PCR 法對30 例NSCLC 患者胸腔積液游離核酸EGFR 基因外顯子19 缺失和外顯子21 L858R 突變進(jìn)行分析。結(jié)果 30 例NSCLC 患者中, 酶切富集PCR 法分別檢出EGFR 基因外顯子19 缺失10 例( 33. 3% ) 和外顯子21 L858R 突變5 例( 1. 7% ) , 非酶切富集PCR 法則僅能分別檢出6 例( 20. 0%) 和1 例( 3. 3% ) ; 兩種方法檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義( P = 0. 032) 。在接受吉非替尼治療的4 例患者中, 2 例檢出EGFR 基因突變患者治療后腫瘤均部分緩解。結(jié)論 酶切富集PCR 法可以高效、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確地檢測NSCLC 患者胸腔積液游離核酸EGFR 基因突變, 可能成為臨床NSCLC 患者選擇EGFR 酪氨酸激酶抑制劑治療的預(yù)測方法。
目的 探討外周血表皮生長因子受體( EGFR) 基因突變在非小細(xì)胞肺癌( NSCLC) 吉非替尼治療適宜患者篩選中的價值。方法 對2005 年12 月至2007 年12 月在廣州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤血液中心治療的170 例NSCLC 患者, 應(yīng)用EGFR 基因突變酶切富集PCR 法分析血漿游離核酸EGFR 基因外顯子19 缺失和外顯子21L858R 突變。分析血漿EGFR 基因突變與性別、吸煙史、病理類型、TNM分期、吉非替尼治療客觀緩解率和疾病無進(jìn)展生存期間的關(guān)系。結(jié)果 170 例血漿標(biāo)本共檢出血漿EGFR 基因突變77 例, 突變率為45. 3% 。血漿EGFR 基因突變主要見于肺腺癌患者( P lt;0. 001) 及非吸煙者( P =0. 001) 。在33 例接受吉非替尼治療的患者中, 血漿EGFR基因突變陽性患者的客觀有效率和中位疾病無進(jìn)展生存期均顯著優(yōu)于血漿EGFR 基因突變陰性患者( P = 0. 001) 。結(jié)論 血漿游離核酸酶切富集PCR 法能夠靈敏而特異地檢測NSCLC 的EGFR 基因突變。突變檢測陽性者對吉非替尼的反應(yīng)率明顯高于野生型患者。
目的 探討殼聚糖（chitosan，CS）介導(dǎo)IGF-1 基因（igf-1）局部轉(zhuǎn)染對關(guān)節(jié)軟骨損傷修復(fù)的作用。 方 法 3 月齡健康雄性大耳白家兔12 只，體重2.0 ～ 2.5 kg，隨機(jī)分為對照組和干預(yù)組（n=6）。其中對照組實驗動物左側(cè)為正常對照組，右側(cè)為生理鹽水對照組；干預(yù)組實驗動物左側(cè)為CS 干預(yù)組，右側(cè)為CS/igf-1 干預(yù)組。后3 組實驗動物分別制備兔膝關(guān)節(jié)外側(cè)髁軟骨缺損模型，正常對照組不制備。CS/igf-1 干預(yù)組于術(shù)后當(dāng)日關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射CS/igf-1 復(fù)合物0.5 mL，每周2 次，共4 周；CS 干預(yù)組注射等體積CS 溶液；正常對照組和生理鹽水對照組注射等體積生理鹽水。術(shù)后28 d，取關(guān)節(jié)軟骨組織，分別行組織學(xué)觀察和實時熒光定量PCR 檢測Ⅱ型膠原及聚集蛋白聚糖基因表達(dá)。 結(jié)果 HE染色及甲苯胺藍(lán)染色示，CS/igf-1 干預(yù)組及CS 干預(yù)組損傷部位均有明顯軟骨性修復(fù)，前者明顯優(yōu)于后者，同時均可見纖維組織增生和炎性細(xì)胞浸潤；生理鹽水對照組僅見大量纖維組織增生和炎性細(xì)胞浸潤，未見明顯軟骨性修復(fù)。正常對照組、生理鹽水對照組、CS 干預(yù)組、CS/igf-1 干預(yù)組Ⅱ型膠原、聚集蛋白聚糖基因相對含量均依次增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 CS/igf-1 復(fù)合物可增加軟骨細(xì)胞中Ⅱ型膠原及聚集蛋白聚糖基因的表達(dá)，促進(jìn)損傷軟骨修復(fù)。
先天性靜止性夜盲（CSNB）的主要臨床特征表現(xiàn)為視網(wǎng)膜桿體功能的損害，而視紫紅質(zhì)是維持正常桿體功能所必需的感光色素。為探討CSNB的分子缺陷是否涉及到視紫紅質(zhì)基因，本文應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)對一個常染色體顯性遺傳型（AD）CDNB大家系15名患者和5名正常家系成員的視紫紅質(zhì)基因第5外顯子片段進(jìn)行擴(kuò)增，并結(jié)合限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）作分析。結(jié)果顯示，與12名正常對照組相比，CSNB患者視紫紅質(zhì)基因第5外顯子片段無明顯缺失；視紫紅質(zhì)基因端碼區(qū)內(nèi)的第314和第347位密碼子及第313位密碼子的第3個堿基和第348位密碼子的第1個堿基均未檢出突變或缺失。提示AD型CSNB的分子缺陷未涉及視紫紅質(zhì)基因編碼區(qū)內(nèi)這些位點(diǎn)的點(diǎn)突變或缺失。 （中華眼底病雜志，1993，9：66-68）
目的 探討抑癌基因Ras相關(guān)區(qū)域家族1A （RASSF1A）基因在結(jié)腸癌組織以及相應(yīng)正常結(jié)腸組織中的表達(dá)并分析其表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理因素之間的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)SP法和Western blot法檢測34例結(jié)腸癌手術(shù)標(biāo)本和相應(yīng)的正常結(jié)腸組織中RASSF1A蛋白的表達(dá)水平，應(yīng)用RT-PCR法檢測RASSF1AmRNA在結(jié)腸癌和正常結(jié)腸組織中的表達(dá)情況。結(jié)果 ①免疫組織化學(xué)法結(jié)果：結(jié)腸癌組織中RASSF1A蛋白表達(dá)陽性率明顯低于其在正常結(jié)腸組織中的表達(dá)陽性率 〔35.3% （12/34）比97.1% （33/34），P＜0.05〕。結(jié)腸癌組織中RASSF1A蛋白的表達(dá)與腫瘤分化程度和TNM分期均有關(guān)（P＜0.05），即高、中分化及TNM分期較低（Ⅰ＋Ⅱ期）者的RASSF1A蛋白表達(dá)陽性率較高（P＜0.05）。②Western blot法結(jié)果：在34例結(jié)腸癌患者中RASSF1A蛋白表達(dá)水平明顯低于其在相應(yīng)的正常結(jié)腸組織中的表達(dá)水平 〔0.316 8±0.019 6比0.914 4±0.177 6，P＜0.05〕；該結(jié)果與RT-PCR法檢測到的RASSF1A mRNA表達(dá)情況基本一致 〔0.158 9±0.223 7和0.572 3±0.193 9，P＜0.05〕。結(jié)論 RASSF1A基因的失表達(dá)可能在原發(fā)性結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，檢測RASSF1A的表達(dá)情況可為結(jié)腸癌的早期診斷提供幫助。