目的 比較嗅黏膜膠質(zhì)細胞、嗅球神經(jīng)層（olfactory globular nerve layer，OGNL）膠質(zhì)細胞及SC 修復周圍神經(jīng)缺損的能力，并優(yōu)選出最適宜移植治療周圍神經(jīng)缺損的膠質(zhì)細胞。 方法 取20 只2 ～ 3 月齡雌性Wistar 大鼠，體外培養(yǎng)嗅黏膜膠質(zhì)細胞、OGNL 膠質(zhì)細胞及SC，調(diào)整濃度為1 × 106 個/mL 純化濃縮備用。另將80 只成年雌性Wistar鼠，切除坐骨神經(jīng)25 mm 軸突，保留神經(jīng)外膜吻合于近端，制備神經(jīng)缺損模型。將動物隨機分成A、B、C、D 4 組，每組20只，于神經(jīng)外膜腔內(nèi)分別植入10 μL DMEM/F12 培養(yǎng)液、SC、OGNL 膠質(zhì)細胞以及嗅黏膜膠質(zhì)細胞。術(shù)后3 個月，采用踝關(guān)節(jié)功能評分評估神經(jīng)缺損的修復效果；行大體、光鏡、透射電鏡觀察神經(jīng)再生情況；熒光顯微鏡下觀察逆行標記熒光紅的運輸距離，免疫熒光檢測膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）及神經(jīng)生長因子（nerve growth factor，NGF）濃度；ELISA 法檢測髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）及神經(jīng)絲蛋白（neurofilament，NF）濃度。 結(jié) 果 踝關(guān)節(jié)功能評分：A、B、C、D 組分別為（3.325 ± 0.963）、（4.200 ± 1.005）、（5.143 ± 0.635）和（5.950 ± 0.154）分，組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。大體、光鏡及透射電鏡觀察示，D 組神經(jīng)缺損再生最完全，C 組次之，B 組較差，A 組最差。熒光紅在神經(jīng)中運行距離，D 組最長，C 組次之，B 組較短，A 組最短；NGF 及GFAP 濃度，D 組最高，C 組次之，B 組較差，A組最低。A、B、C、D組MBP 濃度分別為（9.817 ± 3.267）、（12.347 ± 3.091）、（14.937 ± 2.075）和（22.757 ± 0.871） ng/ mL，A、B 組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05），其余各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05） ；NF 濃度分別為（13.869 ± 5.677）、（18.498 ± 3.889）、（23.443 ± 2.260）、（27.610 ± 1.125）ng/mL，組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 嗅黏膜膠質(zhì)細胞、OGNL 膠質(zhì)細胞、SC 均能促進坐骨神經(jīng)缺損再生，嗅覺系統(tǒng)膠質(zhì)細胞促進神經(jīng)再生效果優(yōu)于SC，而嗅黏膜膠質(zhì)細胞促進神經(jīng)再生能力優(yōu)于OGNL 膠質(zhì)細胞。
目的 綜述BMSCs 在腫瘤治療中的研究進展。 方法 廣泛查閱近年國內(nèi)外相關(guān)文獻，對BMSCs腫瘤趨向性、與腫瘤組織生長的相互關(guān)系以及作為腫瘤治療運載細胞的研究進行回顧性總結(jié)與分析。 結(jié)果 BMSCs對腫瘤組織具有體內(nèi)定向遷移能力，可抑制或促進腫瘤組織生長，可以作為腫瘤基因治療的運載細胞；但BMSCs 具有向腫瘤轉(zhuǎn)化的可能。 結(jié)論 BMSCs 可能成為腫瘤治療的良好運載細胞，但尚需進一步研究，以加強其在腫瘤治療中的安全 性。
目的 探討自體BMSCs 與膠原膜復合構(gòu)建組織工程皮膚修復小型香豬全層皮膚缺損，為組織工程皮膚的臨床應用提供實驗依據(jù)。 方法 取4 只貴州小型香豬骨髓各20 mL 培養(yǎng)BMSCs，傳至第3 代。取新鮮牛肌腱通過化學交聯(lián)的方法制備成直徑為5 cm 的圓形Ⅰ型膠原膜。將密度為2 × 107 個/mL 第3 代BMSCs 用DAPI 標記后種植到Ⅰ型膠原膜上孵育24 h，制備組織工程皮膚。在豬背部正中線兩側(cè)分別由前向后切取5 個直徑5 cm、深達筋膜的圓形全層皮膚缺損創(chuàng)面，隨機分為兩組（n=10）。對照組行單純Ⅰ型膠原膜修復，實驗組行組織工程皮膚修復。于術(shù)后3、8 周，觀察創(chuàng)面愈合情況，并取材行HE 染色及透射電鏡觀察，并于術(shù)后3 周對實驗組行熒光顯微鏡及糖原染色觀察。 結(jié) 果 動物均存活至實驗完成。術(shù)后3 周對照組創(chuàng)面約40% 皮膚發(fā)黑、結(jié)痂、壞死，8 周時仍見壞死組織且瘢痕攣縮明顯；術(shù)后3 周實驗組創(chuàng)面皮膚成活，無明顯瘢痕形成，8 周創(chuàng)面愈合良好；兩組創(chuàng)面愈合率差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。組織學觀察：術(shù)后3 周對照組可見肉芽組織增生，無表皮層覆蓋；實驗組具有良好的表皮和真皮結(jié)構(gòu)，糖原染色可見基底膜呈完整連續(xù)深紅染色。術(shù)后8 周兩組均形成正常皮膚樣結(jié)構(gòu)。透射電鏡觀察：術(shù)后3 周對照組真皮層有大量中性粒細胞和成纖維細胞，未見表皮超微結(jié)構(gòu)；實驗組可見大量表皮細胞并以橋粒相連，表皮基底細胞與基膜以半橋粒連接；真皮層可見大量成纖維細胞，以及細胞外大量膠原微纖維沉積，可見內(nèi)皮細胞形成的毛細血管。術(shù)后3 周實驗組熒光顯微鏡觀察，帶有DAPI 標記的BMSCs 定位于重建的表皮和真皮組織中，表皮主要定位于基底膜附近，真皮層可見大量熒光標記的BMSCs。 結(jié) 論 以自體BMSCs 為種子細胞與膠原膜復合構(gòu)建組織工程皮膚，可有效修復豬全層皮膚缺損，有望成為一種較理想的組織工程皮膚。
目的 觀察右歸飲聯(lián)合MSCs 介入治療早期股骨頭缺血性壞死（avascular necrosis of the femoral head，ANFH）的療效及促進再血管化、再骨化的作用。 方法 取健康雄性成年畢格犬24 只，體重（10.0 ± 0.5）kg，隨機 分為4 組：A 組（模型組）、B 組（右歸飲組）、C 組（MSCs 介入組）、D 組（MSCs 介入加右歸飲組），每組6 只。通過液氮冷 凍法建立早期ANFH 模型。分離、培養(yǎng)并以BrdU 標記MSCs。造模3 周后，C、D 組動脈灌注標記后的濃度為（0.5 ～ 1.0） × 106 個 / mL 的MSCs 1 mL，B、D 組每天予右歸飲100 mL 灌胃，A、C 組以100 mL 蒸餾水灌胃。連續(xù)治療4 周及8 周后 行股骨頭大體觀察，DSA 和MRI 觀察股骨頭供血血管的數(shù)量及直徑的變化情況，行組織學及免疫組織化學染色觀察VEGF、BrdU 陽性表達情況，實時熒光定量RT-PCR 檢測VEGF mRNA 表達。 結(jié)果 治療后4、8 周，A 組股骨頭外形扁平，呈蘑菇狀；B、C、D 組股骨頭外形基本正常。DSA 觀察示C、D 組治療后供血血管分支增粗、增多，原阻塞血管再通。治療后4、8 周，C、D 組間血管數(shù)和血管直徑比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；兩組血管直徑與治療前比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05），D 組血管數(shù)與治療前比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。MRI 檢查示B、C、D 組較A 組明顯改善，D 組尤為明顯，T1W 略低信號，T2W 略低信號，STIR 略高信號。組織病理學及免疫組織化學染色示：B、C、D 組較A 組結(jié)構(gòu)有明顯改善，D 組較其他各組的VEGF 陽性表達率均明顯增高（P lt; 0.05），D 組較C 組的BrdU 陽性率、陽性成骨細胞數(shù)、陽性血管數(shù)表達均明顯增高（P lt; 0.05）。實時熒光定量RT-PCR 檢測示：D 組較其他各組VEGF mRNA 表達量增多（P lt; 0.05），B、C、D 組的VEGF 表達均高于A 組（P lt; 0.05）。 結(jié)論 右歸飲聯(lián)合MSCs 介入治療早期ANFH 療效顯著，可改善壞死股骨頭的血供、促進修復、預防塌陷。
目的 初步確立hBMSCs 的二維生物打印方法，實現(xiàn)對細胞噴射過程的控制并保持打印后細胞活力。 方法 取健康志愿者骨髓5 mL，常規(guī)培養(yǎng)hBMSCs 至第2 代，調(diào)整為1 × 106 個/mL 單細胞懸液。實驗分3 組：打印組1 細胞先行碘化丙啶（propidium iodide，PI）熒光標記，快速成型組織打印機進行二維細胞打印，x 軸間隔300 μm，y 軸間隔1 500 μm，激光共聚焦顯微鏡觀察。打印組2 細胞未行PI 標記，經(jīng)生物打印后培養(yǎng)2 h，Live/Dead viability Kit 測定細胞活力，激光共聚焦顯微鏡觀察細胞熒光染色情況；取1 份未經(jīng)Live/Dead viability Kit 測試的打印組2 細胞，培養(yǎng)7 d 后倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)，貼壁后常規(guī)培養(yǎng)，動態(tài)觀察細胞生長狀態(tài)。對照組除細胞懸液不行打印，其余操作同打印組2。 結(jié)果 打印組1 細胞激光共聚焦顯微鏡觀察，“細胞墨滴”在二維組織中規(guī)則且均勻分布，滿足二維設計細胞打印要求；每個“細胞墨滴”包含細胞15 ～ 35 個。打印組2 細胞經(jīng)活力測試，細胞孵育30 min 后激光共聚焦顯微鏡觀察顯示細胞熒光染色情況。對照組細胞活力與打印組2 無明顯區(qū)別。打印后細胞常規(guī)培養(yǎng)7 d，細胞可正常貼壁生長，形態(tài)、生長狀態(tài)良好。 結(jié)論 通過生物打印技術(shù)可實現(xiàn)hBMSCs 在二維平面上的定向、定量規(guī)則分布，并為進一步的細胞三維打印乃至器官打印體系奠定基礎。
目的 對比研究單純骨軟骨鑲嵌成形術(shù)與聯(lián)合組織工程方法及聯(lián)合未轉(zhuǎn)染基因的BMSCs- 藻酸鈣修復急性骨軟骨缺損的效果。 方法 對攜帶hTGF-β1 的重組腺病毒轉(zhuǎn)染BMSCs（hTGF-β1 轉(zhuǎn)染組）、采用攜帶Lac-Z 報告基因的重組腺病毒（Adv-βgal）轉(zhuǎn)染BMSCs（Adv-βgal 轉(zhuǎn)染組）及未轉(zhuǎn)染BMSCs（未轉(zhuǎn)染空白對照組）進行Westernblot 檢測hTGF-β1、Col Ⅱ及Aggrecan 表達。將雄性6 月齡崇明山羊18 只，體重22 ～ 25 kg，隨機分為A、B、C 組（n=6）。取B、C 組自體骨髓進行BMSCs 分離、培養(yǎng)，傳至第3 代。B 組細胞行hTGF-β1 重組腺病毒轉(zhuǎn)染。3 組動物于雙后肢股骨內(nèi)髁負重區(qū)采用骨鉆制備直徑5 mm、長3 mm 的缺損，A 組采用自體骨軟骨柱修復；B 組修復材料同A 組，并同時將5 mL 轉(zhuǎn)染hTGF-β1 的BMSCs 藻酸鈉混合液注入空隙，加入CaCl2 產(chǎn)生凝膠；C 組：修復方法同B 組，采用未轉(zhuǎn)染hTGF-β1 的自體BMSCs 藻酸鈉混合液。術(shù)后觀察山羊一般情況，于術(shù)后12 周及24 周取材，行大體及組織學觀察，并參照O’ Driscoll，Keeley and Salter 組織形態(tài)學評分標準進行評分；術(shù)后24 周行免疫組織化學及透射電鏡觀察。 結(jié)果 轉(zhuǎn)染后5 d，hTGF-β1 轉(zhuǎn)染組細胞hTGF-β1、Col Ⅱ及Aggrecan 表達均顯著強于Adv-βgal 轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染空白對照組。術(shù)后動物均存活至實驗完成，傷口Ⅰ期愈合。大體觀察B 組修復組織邊界模糊，移植修復區(qū)域表面光滑；A、C 組軟骨間空隙有裂隙存在。組織學觀察A 組軟骨間空隙區(qū)纖維軟骨樣組織修復、纖維組織填充或相鄰軟骨增生；B 組修復軟骨細胞排列規(guī)律，交界區(qū)整合良好；C 組軟骨間的空隙區(qū)見纖維軟骨樣組織，存在裂隙。各時間點B 組組織學評分均高于A、C 組，C 組高于A 組，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；B 組12 周與24 周差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。術(shù)后24 周免疫組織化學示B 組軟骨間修復組織染色以軟骨細胞和陷窩周圍明顯，A、C 組呈淡染。透射電鏡觀察示B 組修復組織可見典型軟骨細胞，A、C 組見平行或交錯排列的膠原纖維束。 結(jié)論 骨軟骨鑲嵌成形術(shù)聯(lián)合組織工程方法可解決單純骨軟骨鑲嵌成形術(shù)殘留缺損愈合不良及軟骨間整合不良的問題。
目的 探討經(jīng)皮臍帶源MSCs 移植治療骨不連的療效。 方法 2005 年12 月－ 2007 年12 月，收治創(chuàng)傷性骨折術(shù)后骨不連患者72 例。其中采用自體髂骨移植治療36 例（A 組）：男27 例，女9 例；年齡（34.0 ± 2.1）歲。股骨干及脛骨干骨折各18 例。骨不愈合時間（9.1 ± 1.7）個月。采用經(jīng)皮臍帶源MSCs 移植治療36 例（B 組） ：男28 例，女8 例；年齡（36.0 ± 1.6）歲。股骨干及脛骨干骨折各18 例。骨不愈合時間（6.4 ± 1.9）個月。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。A 組術(shù)中取適量自體髂骨填充骨不連處。B 組取患者靜脈血離心后獲6 ～ 8 mL 富血小板血漿，與從自愿捐贈臍帶中提取、培養(yǎng)、擴增后的1 ×（106 ～ 107）個第5 代MSCs 混合后，加入脫礦骨粉0.2 g 注射入骨不連處。 結(jié)果 A 組切口均Ⅰ期愈合。B 組無皮膚穿刺孔及深部感染發(fā)生、無排斥和全身發(fā)熱反應?；颊呔@隨訪，A 組隨訪時間（13.2 ± 4.6）個月，B 組（13.2 ± 4.6）個月。兩組患者均無內(nèi)固定松動和斷裂，患側(cè)髖關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)及踝關(guān)節(jié)活動良好。A 組骨折愈合時間（10.3 ± 2.8）個月，B 組（5.6 ± 0.8）個月，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 經(jīng)皮臍帶源MSCs移植具有操作簡便、安全、可靠、骨折愈合快的優(yōu)點，是治療骨不連的有效方法之一。
目的 比較hBMSCs 和人胎盤基蛻膜MSCs（human placental decidua basalis-MSCs，hPDB-MSCs）在化學缺氧條件下的增殖情況，為尋找組織工程新的種子細胞提供理論依據(jù)。 方法 采用密度梯度離心法分離培養(yǎng)hBMSCs 與hPDB-MSCs，流式細胞儀檢測細胞表面標志物；CoCl2 建立化學缺氧模型，MTT 法檢測兩種細胞在不同CoC12 濃度（0、50、75、100、125、150、175、200 μmol/L）和不同時間（6、12、24、48、72 和96 h）的增殖情況。 結(jié)果 流式細胞儀檢測顯示hPDB-MSCs 與hBMSCs 均表達 CD9、CD29、CD44、CD105、CD106、人類白細胞抗原ABC（humanleucocyte antigen ABC，HLA-ABC），不表達CD34、CD40L 和HLA-DR；但與hBMSCs 相比，hPDB-MSCs 階段特異表達的胚胎抗原1（stage-specific embryonic antigen 1，SSEA-1）、SSEA-3、SSEA-4、腫瘤排斥抗原（tumor rejection autigen，TRA）-1-60、TRA-1-81 表達更高?；瘜W缺氧12 h 內(nèi)，hBMSCs 與hPDB-MSCs 增殖均被抑制，12 h 后均能促進增殖；與對照組比較，hBMSCs 經(jīng)150 μmol/L CoCl2 作用24 h 出現(xiàn)顯著增殖（P lt; 0.05），hPDB-MSCs 在75 μmol/L CoCl2 作用12 h 后出現(xiàn)顯著增殖（P lt; 0.05）。 結(jié)論 與hBMSCs 相比，hPDB-MSCs 表達更高的胚胎干細胞特有表面抗原，同時對化學缺氧所致的增殖影響更為敏感，可能成為一種新的組織工程種子細胞來源。
目的 探討大鼠成骨細胞條件培養(yǎng)液對同種大鼠BMSCs 的成骨誘導分化作用，為骨組織工程種子細胞的獲得尋找一種新方法。 方法 健康1 周齡SD 大鼠10 只，雌雄不限，體重20 ～ 30 g，采用貼壁法和酶消化法分別獲得BMSCs 和成骨細胞，并進行鑒定。無菌條件收集第1 ～ 5 代成骨細胞培養(yǎng)液上清，與完全培養(yǎng)基1 ∶ 1 混合，制備成骨細胞條件培養(yǎng)液，與第2 代BMSCs 共培養(yǎng)為誘導組，相同代次BMSCs 與完全培養(yǎng)液共培養(yǎng)為對照組。倒置相差顯微鏡下觀察共培養(yǎng)后BMSCs 形態(tài)變化，MTT 法檢測BMSCs 生長情況，免疫組織化學染色檢測共培養(yǎng)后BMSCs 的ALP、Col Ⅰ、骨鈣素（osteocalcin，OCN）蛋白的表達，采用 RT-PCR 檢測Col Ⅰ、OCN mRNA 的表達。 結(jié)果 誘導組共培養(yǎng)7 d BMSCs 體積變大，細胞由長梭形展開為扁平形和多邊形，并帶有突起；9 d 細胞呈集落狀生長。細胞生長曲線示BMSCs 數(shù)量隨培養(yǎng)時間延長而增加，對照組增殖能力較誘導組強；誘導培養(yǎng)4 ～ 7 d，對照組細胞數(shù)量與誘導組比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。誘導組培養(yǎng)12 d，ALP 染色呈陽性表達；18 d 出現(xiàn)鈣結(jié)節(jié)；21 d Col Ⅰ和OCN 呈陽性表達；對照組均呈陰性表達。RT-PCR 檢測示誘導組培養(yǎng)21 d 有Col Ⅰ、OCN mRNA 表達，對照組未見表達。 結(jié)論 體外大鼠成骨細胞條件培養(yǎng)液有明顯的誘導同種大鼠BMSCs 向成骨樣細胞分化的作用。
目的 探討瘦素（leptin，LEP）對 hBMSCs 成骨分化的作用及機制。 方法 采用全骨髓法培養(yǎng)hBMSCs，取第3 代hBMSCs 分為A、B、C、D、E、F 組，待細胞貼壁后各組分別加入400、200、100、50 ng/mL LEP 、100 ng/ mL BMP 和普通培養(yǎng)基2 mL 進行培養(yǎng)。于培養(yǎng)后7 d 行ALP 染色、21 d 行礦化結(jié)節(jié)染色，倒置相差顯微鏡觀察染色結(jié)果；并于培養(yǎng)后7、14、21 d，檢測各組ALP 活性、骨鈣素（osteocalcin，OCN）水平，篩選 LEP 的最佳誘導濃度；B、E、F 組細胞培養(yǎng)7 d 后，采用 RT-PCR 檢測成骨相關(guān)基因：核心結(jié)合因子（core-binding factor α1，Cbfα1）、ALP、Col Ⅰ、OCN mRNA 的表達。 結(jié)果 誘導培養(yǎng)7 d，ALP 染色結(jié)果顯示，A、B、C、D、E 組細胞胞漿均呈藍色陽性著色，F(xiàn) 組呈弱陽性；誘導培養(yǎng)21 d，礦化結(jié)節(jié)染色結(jié)果顯示，A、B、C、D、E 組細胞染色呈陽性，F(xiàn) 組呈陰性。B 組培養(yǎng)后7、14、21 d，ALP、OCN 活性低于 E 組，但顯著高于其余各組，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05），200 ng/mL LEP 為最佳濃度。B、E、F組細胞培養(yǎng)7 d，F(xiàn) 組Cbfα1、ALP、Col Ⅰ、OCN mRNA 均不表達；B、E 組各產(chǎn)物mRNA 均有表達，但B 組低于E 組。 結(jié)論 LEP 可促進 hBMSCs 成骨分化，其機制可能為LEP 促進了成骨相關(guān)基因的表達