目的 探討在香煙誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞黏蛋白MUC5AC 表達(dá)過程中Src / JNK 信號通路的作用。方法 香煙抽提物預(yù)處理的人氣道上皮A549 細(xì)胞, 分別以活性氧( ROS) 清除劑DMTU、JNK 特異性抑制劑SP600125 及Src 激酶抑制劑PP2 干預(yù)。測定各組細(xì)胞中ROS 的含量, 采用RT-PCR、ELISA 法觀察細(xì)胞黏蛋白( MUC) 5AC轉(zhuǎn)錄水平及培養(yǎng)上清液中MUC5AC 蛋白水平的改變,以Western blot 法檢測細(xì)胞表皮生長因子受體( EGFR) 的蛋白表達(dá)。結(jié)果 細(xì)胞暴露于不同濃度的香煙抽提物中, ROS的量呈濃度遞增; ROS清除劑DMTU 顯著降低香煙所致的Src 磷酸化; Src 特異性抑制劑PP2 處理組中的JNK 磷酸化水平與對照組比較有明顯下降, MUC5AC 的表達(dá)水平也明顯降低; JNK特異性抑制劑SP600125 組中MUC5AC 的蛋白表達(dá)和基因轉(zhuǎn)錄水平較對照組均明顯降低。結(jié)論 ROS-Src-JNK信號通路可能參與A549 上皮細(xì)胞中MUC5AC 的表達(dá)調(diào)控。
目的 探討血小板源性生長因子(platelet-derived growth factor, PDGF)刺激成骨細(xì)胞，對磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(phosphorylation extracellular signalregulated kinase1/2, pERK1/2)位置的影響。方法出生3 d清潔級健康小鼠10只，雌雄不拘，體重6～9 g。取小鼠顱骨，分離培養(yǎng)原代成骨細(xì)胞。取第6代成骨細(xì)胞，1%血清培養(yǎng)液培養(yǎng)12 h后, 隨機(jī)分成經(jīng)10 μmol/L PP2處理30 min組(實(shí)驗(yàn)組)和未處理組(對照組)，每組再隨機(jī)分成2個亞組: 其中一組用PDGF (20 ng/ml)刺激10 min，另一組不用PDGF刺激，采用免疫組織化學(xué)染色檢測pERK1/2分布。另取第6代成骨細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞生長至80%融合時，用細(xì)胞刮隨機(jī)分成2組，一組用10 μmol/L PP2預(yù)處理30min（實(shí)驗(yàn)組），另一組不用PP2作用（對照組），再用20 ng/ml PDGF培養(yǎng)12 h，采用劃痕愈合法檢測PP2對成骨細(xì)胞在PDGF刺激下遷移能力的影響。另取第6代成骨細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度1×106/ml，隨機(jī)分成2組，分別經(jīng)DMSO（對照組）和10 μmol/LPP2(實(shí)驗(yàn)組)預(yù)處理30min，每組再隨機(jī)分成2個亞組: 其中一組用PDGF(20 ng/ml)刺激10 min，另一組不用PDGF剌激，采用Western blot檢測細(xì)胞骨架蛋白內(nèi)pERK1/2活性。結(jié)果 免疫熒光染色結(jié)果顯示，PDGF促進(jìn)pERK1/2定位于成骨細(xì)胞的局部黏附和細(xì)胞核內(nèi); 而PP2顯著抑制了由PDGF刺激引起的pERK1/2定位于成骨細(xì)胞的局部黏附, 但并不影響pERK1/2定位于細(xì)胞核內(nèi)。細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)顯示，PP2明顯抑制了由PDGF所誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞遷移。Western blot檢測結(jié)果顯示，PP2明顯抑制了由PDGF所誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞局部黏附內(nèi)ERK1/2的磷酸化。結(jié)論 PDGF通過激活Src活性，促進(jìn)pERK1/2定位于成骨細(xì)胞的局部黏附內(nèi);PP2通過抑制pERK1/2定位于成骨細(xì)胞的局部黏附，從而抑制由PDGF所誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞遷移。