摘要:目的:動態(tài)觀察大鼠腦出血后血腫周圍組織補體激活與細胞凋亡的規(guī)律。方法:用膠原酶注入到大鼠尾狀核的方法制作腦出血模型。將大鼠分為腦出血、假手術(shù)組、正常組3組。采用蘇木素伊紅(HE) 染色、免疫組織化學(xué)染色及原位末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP 缺口末端標記法(TUNEL)分別觀察各組在腦出血后第6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、7 d時血腫周圍補體C3、促凋亡基因(Bax)、抑凋亡基因(Bclxl)及TUNEL的表達。結(jié)果補體C3的表達峰值在24~48 h;TUNEL、Bax蛋白表達術(shù)后12h增加,48~72 h達高峰,而Bclxl蛋白表達高峰在48h。結(jié)論:大鼠腦出血后血腫周圍組織補體C3的表達增加與細胞凋亡的演變趨勢一致,C3與凋亡有相關(guān)。Abstract: Objective: To study the complement activation and apoptosis regular genes changes in the tissues of the perihematoma of intracerebral hemorrhage (ICH) in rats. Methods: Intracerebral hemorrhage was induced in rats by injection of bacterial collagenase into the caudate nucleus. Histopathological changes were studied in 6 h,12 h, 24 h, 2 d, 3 d, 5 d, 7 d after the injection. The immunohistochemistry and TUNEL analysis were performed. The expression of complement factor C3, the TUNELpositive cells, the proapoptotic gene expression (Bax) and the antiapoptotic gene (Bclxl) were examined. Results: The expression of C3 increased to its maximum between 2448 h. The TUNELpositive cells and Bax protein expression increased gradually and reached the peak level between 4872 h. The Bclxl protein reached the peak level at 48 h. The correlation analysis showed that the quantity of C3 was positively related to that of the TUNELpositive cells, but the bax protein was not related to Bclxl protein. Conclusion: The expression of complement factor C3 may contributes to the nerve injury after cerebral hemorrhage and relate to the apotosis in the tissues surrounding the hametoma in rats.
摘要:目的:探討卡配因抑制劑3（MDL28170）對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)神經(jīng)細胞凋亡的影響。方法:建立新生SD大鼠HIBD模型,治療組于缺養(yǎng)缺血后即刻、2 h、4 h腹腔內(nèi)注射MDL28170,對照組及手術(shù)組同時予生理鹽水。缺氧缺血后24 h用免疫組化方法觀察大腦皮質(zhì)及海馬CA1區(qū)Caspase3 蛋白表達、TUNEL法檢測細胞凋亡,觀察組織病理改變并計算海馬神經(jīng)元死亡數(shù),透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果:缺氧缺血后24 h缺血側(cè)大腦皮質(zhì)及海馬CA1區(qū)Caspase3和TUNEL陽性細胞數(shù)較對照組明顯增加,透射電鏡證實有凋亡細胞;MDL28170可減少陽性細胞數(shù)量,抑制神經(jīng)元死亡,差異有顯著性(Plt;0.05)。結(jié)論:MDL28170可通過抑制神經(jīng)凋亡而對新生大鼠HIBD具有一定保護作用。Abstract: Objective: To investigate the effect of (Calpain inhibitor3) MDL28170 on neural apoptosis in a neonatal model of hypoxicischemic brain damage (HIBD). Methods: A neonatal model of HIBD was established, 7dayold SD rats were divided into three groups. The treatment group received MDL28170(ip) at 0 h,2 h,4 h after HI, whereas the other two groups were administered normal saline simultaneously. The expression of caspase3 (by immunohistochemistry), neural apoptosis (by TUNEL) in cortex and hippocampus ipsilateral to the insult were observed 24 h after HI; hippocampal CA1 neural loss and electromicroscopic changes were assessed at the same time. Results: Apoptotic body was observed by electromicroscopy. Caspase3 positive cells and apoptotic cells increased significantly in the ipsilateral cortex and hippocampal CA1 region compared to the control, and MDL28170 reduced the number of positive cells, attenuated CA1 neural loss with significance (Plt;0.05). Conclusion: It is suggested that MDL28170 may protect the brain of neonatal rats after HIBD by suppressing neural apoptosis.
【摘要】 目的 研究反義核酸技術(shù)封閉谷氨酰胺酶( GA) 基因?qū)β闶篌w內(nèi)胃癌細胞凋亡作用的影響。方法 將攜帶GA 反義基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌細胞SGC27901 ,并將成功轉(zhuǎn)染的胃癌細胞接種于裸鼠皮下,獲得裸鼠胃癌移植瘤模型,通過TUNEL 技術(shù)檢測胃癌細胞凋亡的凋亡指數(shù); RT2PCR 技術(shù)檢測移植瘤細胞內(nèi)GA mRNA 的含量。結(jié)果 GA 反義基因質(zhì)粒載體成功轉(zhuǎn)染胃癌細胞后,腫瘤生長速度減慢,癌細胞凋亡增加,腫瘤細胞內(nèi)GA mRNA的含量減少。結(jié)論 GA 反義基因可抑制GA 基因的表達,明顯促進胃癌細胞凋亡。
目的 探討烏司他丁(UTI)對重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠腎臟細胞凋亡及bcl-2基因表達的影響。方法 60只大鼠隨機均分為假手術(shù)組、SAP組和UTI組，大鼠SAP模型采用5%牛磺膽酸鈉逆行膽胰管注射法建立。于建模后6 h及14 h時測定血Cr及BUN，于光鏡及電鏡下觀察腎組織病理變化，TUNEL法檢測腎臟細胞凋亡情況，SABC免疫組化染色法測定腎臟組織bcl-2基因的蛋白表達。結(jié)果 SAP組光、電鏡下見腎臟組織損害明顯，血Cr、BUN、腎臟細胞凋亡指數(shù)和bcl-2表達均高于假手術(shù)組(P＜0.05，P＜0.01)，且除bcl-2表達外，均隨病程延長逐漸升高（P＜0.05）； 經(jīng)UTI治療后，光、電鏡下見腎臟組織損害減輕，血Cr、BUN和腎臟細胞凋亡指數(shù)較SAP組明顯下降（P＜0.05），而bcl-2表達增強（P＜0.05）。腎臟細胞凋亡指數(shù)與血BUN和Cr均呈正相關(guān)（r=0.807,P＜0.05; r=0.812,P＜0.05)。結(jié)論 UTI對腎功能的保護作用可能部分是通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因bcl-2的表達從而影響細胞凋亡實現(xiàn)的。
目的探討p38蛋白激酶（p38 MAPK）在小腸移植早期排斥反應(yīng)中腸黏膜上皮細胞凋亡機理中的作用。方法選用近交系SD和Wistar大鼠進行節(jié)段性小腸移植，實驗分3組： 同基因移植組（Wistar→Wistar組）、異基因移植組（SD→Wistar組）和異基因移植加環(huán)孢素A組（SD→Wistar+CsA組）。分別于移植術(shù)后1、3、5及7 d采集移植腸管行病理學(xué)檢查排斥反應(yīng)，TUNEL法檢測凋亡細胞，并行Westernblotting測定p38 MAPK表達； 同時，ELISA法測定血清TNFα活性。結(jié)果SD→Wistar組腸黏膜上皮細胞發(fā)生輕、中、重度排斥反應(yīng)中存在細胞凋亡，凋亡細胞數(shù)隨排斥反應(yīng)的加重而增加（P＜0.01）； Wistar→Wistar組排斥反應(yīng)輕微，凋亡細胞數(shù)無明顯變化（Pgt;0.05）； SD→Wistar+CsA組隨著CsA的應(yīng)用，排斥反應(yīng)逐漸得到控制，且凋亡細胞數(shù)也隨著減少。SD→Wistar組及SD→Wistar+CsA組的血清TNFα隨移植腸管上皮細胞凋亡的輕重而發(fā)生相應(yīng)的變化（P＜0.01）。p38 MAPK在SD→Wistar組隨凋亡細胞數(shù)增加而表達加強（P＜0.01），Wistar→Wistar組p38 MAPK表達無明顯變化（Pgt;0.05），在SD→Wistar+CsA組隨凋亡細胞數(shù)而發(fā)生相應(yīng)的變化（P＜0.01）。小腸移植早期排斥反應(yīng)中腸黏膜上皮細胞凋亡現(xiàn)象與p38 MAPK呈正相關(guān)（r=0.875，P＜0.01），血清TNFα與移植腸上皮細胞凋亡呈正相關(guān)（r=0.837, P＜0.01），血清TNFα與p38 MAPK亦呈正相關(guān)（r=0.826，P＜0.01）。結(jié)論大鼠小腸移植排斥反應(yīng)中存在腸黏膜上皮細胞凋亡現(xiàn)象，p38 MAPK參與細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程并起重要作用。
目的探討生長抑素對人胃癌細胞的抑制作用及其作用機理。方法以生長抑素類似物奧曲肽作用于人胃癌細胞株SGC7901細胞，以人成纖維細胞株HF作為正常細胞對照，以5FU作為陽性藥物對照，通過MTT實驗、熒光顯微鏡觀察及流式細胞術(shù)分析，得出結(jié)論。結(jié)果一定濃度范圍內(nèi)的奧曲肽對SGC7901細胞產(chǎn)生抑制作用，其抑制作用具有量效關(guān)系和飽和性。奧曲肽對SGC7901細胞的抑制程度接近于5FU對他的抑制，而對HF細胞無影響。奧曲肽可誘導(dǎo)SGC7901細胞凋亡。結(jié)論奧曲肽在體外對SGC7901細胞具有抑制作用，誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡可能是其作用機理之一。
目的通過檢測腫瘤壞死因子相關(guān)細胞凋亡誘導(dǎo)配體受體-4（TRAIL-R4）在胰腺癌組織中的表達，探討胰腺癌細胞抵抗細胞凋亡的機理。方法應(yīng)用mRNA印跡法（Northern blotting）、蛋白質(zhì)印跡法（Western blotting）和免疫組織化學(xué)技術(shù)，定性、定位分析TRAIL-R4在正常胰腺組織和胰腺癌組織中的表達。結(jié)果TRAIL-R4 mRNA和蛋白在正常胰腺組織中呈弱表達或不表達，而在胰腺癌組織中呈高表達； 免疫組織化學(xué)檢測顯示，在胰腺癌細胞中TRAIL-R4蛋白呈強染色。結(jié)論TRAIL-R4表達水平在正常胰腺組織與胰腺癌組織中存在顯著差異，提示胰腺癌細胞中可能存在對TRAIL介導(dǎo)的細胞凋亡抵抗新機理。
目的研究不同類型（囊狀、梭狀型）先天性膽總管囊腫壁細胞凋亡與增殖的關(guān)系，了解細胞凋亡/增殖在膽總管囊腫中的作用。方法以膽總管囊狀擴張組32例、梭狀擴張組35例及膽總管結(jié)石致膽管擴張組（對照組）25例為研究對象。術(shù)中取部分膽總管壁送檢,觀察膽總管壁損傷情況。用免疫組織化學(xué)法檢測細胞凋亡的相關(guān)指標bcl2、bax及細胞增殖指標PCNA的表達； 用TUNEL法檢測細胞凋亡情況。結(jié)果囊狀擴張組膽總管壁粘膜上皮細胞破壞嚴重，梭狀擴張組鏡下所見與囊狀擴張組相似，但程度較輕。對照組膽總管粘膜上皮細胞破壞最輕，其凋亡細胞呈散在分布，上皮細胞和成纖維細胞凋亡陽性率較低，分別為（2.74±1.00）%和（2.95±0.87）%； bcl2、bax表達率較低，水平相似（Pgt;0.05）； PCNA表達率較高，分別為（3.74±1.00）%和（3.71±1.77）%。囊狀擴張組與梭狀擴張組囊壁殘留上皮中的bcl2和PCNA表達率低，分別為（0.99±0.51）%和（0.90±0.38）%； bax呈高表達，bcl2呈低表達，凋亡細胞陽性率較高，分別為（13.94±4.77）%和（7.51±3.46）%； 成纖維細胞中的PCNA表達率較高，分別為（9.91±2.91）%和（9.70±3.18）%，bax呈低表達，bcl2呈高表達，凋亡細胞陽性率較低，分別為（3.74±2.12）%和（4.46±2.41）%。兩組之間上述各項指標比較無明顯差異（Pgt;0.05），但兩組的bcl2和bax的表達與對照組比較則明顯升高(P＜0.05)。結(jié)論細胞凋亡在膽總管囊腫形成中有一定的促進作用。
目的研究肝臟低溫保存再灌注期間肝細胞糖原含量與肝細胞凋亡之間的關(guān)系及bax基因在其中的作用。方法制備糖原含量顯著不同的4組兔肝臟模型，根據(jù)給食方法的不同分為A組（禁食24 h，但自由飲水）、B組（標準實驗室飲食）、C組（標準實驗室飲食＋每6 h靜脈滴注25%葡萄糖30 ml）及D組（標準實驗室飲食＋每4 h靜脈滴注25%葡萄糖30 ml），檢測各組肝臟低溫保存再灌注期間肝細胞凋亡及bax基因蛋白的表達情況。結(jié)果各組肝臟于低溫保存9 h后再灌注60 min時,肝組織內(nèi)可見明顯的肝實質(zhì)細胞凋亡現(xiàn)象，A、B、C、D 4組的凋亡細胞數(shù)量依次減少, 4組間兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，各組肝細胞bax基因蛋白的表達程度與肝細胞糖原含量有密切的相關(guān)性。 結(jié)論肝臟低溫保存再灌注過程中,肝細胞內(nèi)糖原能明顯拮抗肝實質(zhì)細胞凋亡的發(fā)生，其內(nèi)在機理可能為肝細胞糖原通過抑制bax基因蛋白的表達從而達到拮抗肝實質(zhì)細胞凋亡的發(fā)生。
目的 探討槐耳清膏在體外對人直腸癌HR8348細胞的生長抑制作用和凋亡誘導(dǎo)作用及其作用機理。方法 將處于對數(shù)生長期的HR8348細胞用含槐耳清膏的培養(yǎng)基培養(yǎng)36 h，用四氮唑藍（MTT）比色法檢測吸光度(OD)值，計算抑制率； 用甲基綠-派若寧染色法及TUNEL法檢測細胞凋亡指數(shù)； 用免疫組織化學(xué)方法檢測bcl-2、bcl-xl、bax、bak及p53基因表達的情況。結(jié)果 槐耳清膏對HR8348細胞的抑制率隨濃度增加而上升，濃度為4.0 mg/ml時抑制率最大（71.1%），與5-FU組（濃度為10 μg/ml）相比差異無顯著性意義（P＞0.05）。甲基綠-派若寧染色法和TUNEL法均可見到典型的細胞凋亡、凋亡小體或出泡現(xiàn)象，凋亡指數(shù)隨槐耳清膏濃度的增加而增加，當濃度達4.0 mg/ml時，凋亡指數(shù)迅速上升，甲基綠-派若寧法為0.1620±0.0128，TUNEL法為0.2612±0.0158，均大于5-FU組的凋亡指數(shù)（0.0780±0.0095和0.1028±0.0131），P＜0.05。槐耳清膏組bcl2、bclxl、bak、p53蛋白表達較空白對照組明顯增強（P＜0.05)，而bax變化不明顯（P＞0.05）?；倍甯嘟Mbak/bcl-2 和bak/bcl-xl比值顯著大于空白對照組。結(jié)論 槐耳清膏在體外對人直腸癌HR8348細胞具有顯著的抑制作用和凋亡誘導(dǎo)作用?；倍甯嗾T導(dǎo)人直腸癌HR8348細胞凋亡可能與提高bak/bcl-2、bak/bcl-xl比值及上調(diào)p53基因表達有關(guān)。