【摘要】目的探討一氧化氮（NO）在大鼠梗阻性黃疸腎功能損害發(fā)生中的作用，以及褪黑素（melatonin,Mel)的保護(hù)作用。方法64只雄性SD大鼠隨機均分為4組： 正常對照組（CN組）、假手術(shù)組（SO組）、膽總管結(jié)扎組（BLD組）和褪黑素治療組（BDL+Mel組）。應(yīng)用膽總管結(jié)扎法建立梗阻性黃疸模型，分別于手術(shù)后第4天和第8天兩個時間點檢測4組中血漿NO、TB、DB、ALT、AST、BUN、Cr水平以及腎組織中NO水平和iNOS活性； 光鏡下觀察腎組織病理形態(tài)改變。結(jié)果BDL組大鼠血漿NO、TB、DB、ALT、AST、BUN、Cr水平和腎組織NO水平及iNOS活性明顯升高（P＜0.01），褪黑素治療可使血漿NO、ALT、AST、BUN及Cr水平和腎組織中NO水平及iNOS活性顯著降低，與BDL組比較差異有顯著性意義（P＜0.01）。結(jié)論梗阻性黃疸時，腎組織iNOS活性增強，NO大量產(chǎn)生參與了腎功能損害的發(fā)生、發(fā)展； 褪黑素對大鼠梗阻性黃疸腎損害的保護(hù)作用至少部分是通過干擾NO通路實現(xiàn)的。
目的 研究血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）及內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）在人胃癌表達(dá)的相關(guān)性及與胃癌血管生成的關(guān)系，探討NO和VEGF的相互作用及NO在VEGF促腫瘤生長中的作用機理。 方法 應(yīng)用免疫組化方法檢測34例胃癌組織中VEGF、iNOS和eNOS的表達(dá)及分布，用血管內(nèi)皮細(xì)胞第Ⅷ相關(guān)抗原（FⅧRAg）行免疫特異性染色計數(shù)腫瘤微血管密度（MVD）。 結(jié)果 34例胃癌組織中，表達(dá)iNOS者占73.5%，表達(dá)eNOS者占82.4%，表達(dá)VEGF者占91.2%； VEGF與iNOS的表達(dá)具有相關(guān)性（Plt;0.005），VEGF與eNOS的表達(dá)則無相關(guān)性（Pgt;0.05）； 表達(dá)VEGF的胃癌其MVD明顯高于不表達(dá)VEGF的胃癌（Plt;0.025），表達(dá)iNOS的胃癌其MVD明顯高于不表達(dá)iNOS的胃癌（Plt;0.05），表達(dá)eNOS的胃癌MVD與不表達(dá)eNOS的胃癌差異無顯著性意義（Pgt;0.05）。 結(jié)論 胃癌組織中MVD隨著VEGF和iNOS表達(dá)的增加而增加，提示兩者對胃癌的血管生成起促進(jìn)作用； VEGF與iNOS的表達(dá)具有相關(guān)性，提示iNOS在VEGF的生成和發(fā)揮作用過程中起重要作用。
目的 研究誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）和p53蛋白在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與腫瘤血管形成的關(guān)系。方法 采用免疫組化和圖像分析技術(shù)檢測59例肝細(xì)胞癌患者腫瘤組織中iNOS和p53蛋白的表達(dá)，CD34單克隆抗體免疫組化染色檢測腫瘤組織微血管密度（MVD）。結(jié)果 ①iNOS和p53蛋白在肝細(xì)胞癌組織中表達(dá)陽性率分別為81.4%（48/59）和64.4%（38/59），表達(dá)強度（IOD值）分別為5 635±1 287和3 352±873。②MVD為32.5±2.73，以腫瘤邊緣和癌旁組織微血管較密集。③iNOS的表達(dá)與p53蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.65, P＜0.05）； iNOS的表達(dá)與MVD呈顯著正相關(guān)（r=0.75, P＜0.05）； p53蛋白的表達(dá)與MVD呈顯著正相關(guān)（r=0.72, P＜0.05）。結(jié)論 肝細(xì)胞癌組織中存在iNOS和p53蛋白的高表達(dá)； iNOS和p53可促進(jìn)肝癌血管形成。
目的 探討長期肺循環(huán)無搏動血流對肺微血管床結(jié)構(gòu)和功能的影響，以明確在該血流灌注下是否存在肺血管重塑。 方法 建立犬右肺單側(cè)無搏動血流灌注的動物模型，6個月后采用鏈親和素生物素酶復(fù)合物法檢測兩側(cè)肺組織血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxidesynthase， eNOS）和肺動脈微平滑肌細(xì)胞fas的表達(dá)，在光學(xué)顯微鏡下觀察兩側(cè)肺組織毛細(xì)血管床微小動脈結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果 無搏動血流灌注的右肺微小動脈eNOS表達(dá)積分值顯著低于左肺（10 846.7±177.8 vs. 13 136.1±189.6; t＝2.240, P=0.040）；右肺微動脈平滑肌細(xì)胞fas表達(dá)顯著高于左肺（14 254.1±217.1 vs. 11 976.7±195.7; t＝2.160, P=0.040）；肺微動脈圖象分析顯示，管壁厚度與血管外徑比值（13.64%±12.80% vs. 14.96%±13.10%）、管壁面積與血管總面積比值(46.40%±11.70% vs. 47.80%±12.20%)顯著小于左肺(Plt;0.05)。 結(jié)論 長期無搏動血流灌注會引起肺血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS合成減少，一方面導(dǎo)致肺泡真毛細(xì)血管網(wǎng)的前括約肌毛細(xì)血管收縮，肺小血管阻力升高，直捷通路及動靜脈短路持續(xù)開放，引起低氧血癥及活動耐力下降；另一方面導(dǎo)致微動脈血管壁平滑肌細(xì)胞凋亡增加，動脈靜脈化。
目的探討兔頸動脈移植后移植血管段內(nèi)皮型一氧化氮合酶信使核糖核酸(eNOSmRNA)表達(dá)的變化及其意義。方法建立大白兔頸動脈移植模型。將30只兔按隨機數(shù)字表法分為4組。A組(n=3)自體血管移植;B組(n=9)新鮮異體血管移植;C組(n=9)同種異體血管經(jīng)青霉素和鏈霉素處理常溫保存后移植;D組(n=9)同種異體血管經(jīng)青霉素和鏈霉素處理冷凍保存后移植。觀察比較移植后1～3周移植血管段組織形態(tài)學(xué)變化和eNOS mRNA的表達(dá)。結(jié)果光學(xué)顯微鏡下觀察A組結(jié)構(gòu)正常,僅有炎性細(xì)胞浸潤;其余各組術(shù)后1周內(nèi)膜開始增生,2周內(nèi)膜明顯增厚,3周內(nèi)膜、中膜增厚最明顯,同時伴有血栓形成。其中B組改變最嚴(yán)重,B組血管移植后eNOS mRNA表達(dá)明顯低于其他三組(Plt;0.05)。結(jié)論同種異體動脈血管移植后,血管eNOS基因表達(dá)明顯下調(diào),可造成移植后血管內(nèi)膜增生和血栓形成。
目的 通過觀察先天性心臟病合并肺動脈高壓患者肺組織內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表達(dá),了解其肺血管內(nèi)皮細(xì)胞功能有否異常. 方法 32例先天性心臟病患者分為2組,組Ⅰ:合并肺動脈高壓患者(n=16);組Ⅱ:未合并肺動脈高壓患者(n=16).在心內(nèi)直視術(shù)下,取少許右肺中葉組織,利用免疫組織化學(xué)和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù),對eNOS進(jìn)行半定量分析. 結(jié)果 組Ⅱ患者肺血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)eNOS免疫染色比組Ⅰ明顯增強(F=93.98,Plt;0.01);組Ⅱ患者肺血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)eNOSmRNA表達(dá)比組Ⅰ明顯增高(F=58.76,Plt;0.01). 結(jié)論 先天性心臟病合并肺動脈高壓患者的eNOS表達(dá)減少,造成內(nèi)源性一氧化氮(NO)生成不足,為該類患者吸入NO治療肺動脈高壓提供了理論依據(jù).
目的 研究一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)在心肌再灌注損傷中的作用,探討卡托普利(captopril)對缺血-再灌注鼠心肌保護(hù)的機制. 方法 采用Langendorff離體鼠心灌流模型,將18只SD大白鼠隨機分為3組(每組6只),對照組、缺血-再灌注組、卡托普利組.觀察心肌NOS同工酶活性、過氧化物歧化酶活性、丙二醛含量、肌酸激酶含量和冠脈流出液NO的變化. 結(jié)果 缺血-再灌注組與對照組比較心肌誘導(dǎo)型NOS(iNOS)活性增高(P＜0.001),而心肌原生型NOS(cNOS)活性及總NOS活性顯著降低(Plt;0.001,0.05),冠脈流出液NO含量下降(Plt;0.01).卡托普利組再灌注30分鐘,心肌iNOS活性低于缺血-再灌注組(Plt;0.01),cNOS活性和總NOS活性高于缺血-再灌注組(Plt;0.01,0.05),再灌注期間冠脈流出液NO水平高于缺血-再灌注組(Plt; 0.01),心肌損傷較缺血-再灌注組減輕. 結(jié)論 心肌NOS同工酶活性及NO產(chǎn)生的失常是心肌再灌注損傷的重要機制之一,卡托普利可通過調(diào)節(jié)心肌NOS同工酶活性,維持正常的NO水平,起到心肌保護(hù)作用.
目的 研究一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)競爭性抑制劑L-硝基精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine methyl ester， L-NAME)對失神經(jīng)肌萎縮的延緩作用，為失神經(jīng)肌萎縮的預(yù)防與治療提供新手段。方法 制備36只成年SD大鼠右下肢腓腸肌失神經(jīng)支配模型，隨機分為L-NAME組（A組）和對照組（B組）。A組：腓腸肌注射L-NAME，于5個不同位點分別注射20 μl，總注射劑量為10 mg/kg；B組：注射同等體積的生理鹽水。于術(shù)后2、4和8 周測定肌濕重維持率、肌細(xì)胞橫切面積、肌肉蛋白含量、細(xì)胞凋亡數(shù)，并觀察超微結(jié)構(gòu)的改變。結(jié)果 術(shù)后2、4周A組的肌濕重維持率、肌細(xì)胞橫切面積、肌肉蛋白含量均明顯高于B組，但細(xì)胞凋亡數(shù)低于B組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。超微結(jié)構(gòu)顯示，術(shù)后2周，肌細(xì)胞線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及細(xì)胞核改變不明顯，兩組間無顯著性差異；術(shù)后4周，A 組退變的細(xì)胞核較B組少，核質(zhì)染色均勻。術(shù)后8周兩組各參數(shù)間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 NOS抑制劑L-NAME能在短期內(nèi)延緩失神經(jīng)肌萎縮。
目的 研究雪旺細(xì)胞源神經(jīng)營養(yǎng)因子（ＳＤＮＦ）對臂叢神經(jīng)根性撕脫傷所致前角運動神經(jīng)元死亡的保護(hù)作用。方法 選成年 ＳＤ大鼠，制成頸６、７神經(jīng)根性撕脫傷動物模型，損傷處定期應(yīng)用 ＳＤＮＦ，３周后觀察損傷側(cè)脊髓前角運動神經(jīng)元的成活率和形態(tài)學(xué)變化，以及一氧化氮合酶（ＮＯＳ）表達(dá)的情況。結(jié)果 對照組６８.６％ 的脊髓前角運動神經(jīng)元死亡，成活神經(jīng)元胞體明顯萎縮，同時表達(dá) ＮＯＳ神經(jīng)元增多；實驗組脊髓前角運動神經(jīng)元的死亡率較對照組降低３５％ ，成活神經(jīng)元胞體無萎縮，表達(dá) ＮＯＳ神經(jīng)元未見增多。結(jié)論 ＳＤＮＦ對臂叢神經(jīng)根性撕脫傷所致運動神經(jīng)元死亡有明顯的保護(hù)作用，一氧化氮在臂叢神經(jīng)根性撕脫傷所致運動神經(jīng)元死亡中起一定作用。
目的 觀察中國漢族人群中血管內(nèi)皮原生型一氧化氮合酶(ecNOS)基因的多態(tài)性與糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）之間的相關(guān)性。方法 166例臨床確診為非胰島素依賴型糖尿病患者為病例組，選取無糖尿病、高血壓、腎病，年齡40歲以上，個體間無血緣關(guān)系的85例白內(nèi)障、骨折患者和健康體檢者為正常對照組。病例組患者根據(jù)有無視網(wǎng)膜病變和熒光素眼底血管造影檢查結(jié)果分為無DR組、非增生期DR組（BDR組）和增生期DR組（PDR組）。病例組和正常對照組受檢者均為漢族。抽取外周靜脈血，提取DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測ecNOS基因第四內(nèi)含子中27個堿基對（bp）重復(fù)的多態(tài)性。結(jié)果 PCR產(chǎn)物測序結(jié)果經(jīng)檢索GeneBank，擴增序列與GeneBank中ecNOS基因相應(yīng)區(qū)域的序列相一致，顯示在漢族人群中同樣存在27個bp的重復(fù)序列，等位基因b重復(fù)5次，等位基因a重復(fù)4次。PCR檢測結(jié)果顯示，在正常對照組和無DR組、BDR組、PDR組中均存在2種等位基因和3種基因型。正常對照組中基因型bb、ab、aa分別為80.0％、16.5%、3.5％、無DR組分別為77.2％、13.9%、8.9％、BDR組分別為80.5％、17.1%、2.4％、PDR組分別為78.3％、13%、8.7％；正常對照組、無DR組、BDR組、PDR組兩兩比較，等位基因頻率（chi;2=1.841）和基因型頻率（chi;2=3.847）均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.5）。Logistic回歸分析結(jié)果也顯示DR與ecNOS基因重復(fù)多態(tài)性無關(guān)。結(jié)論 中國漢族人群ecNOS基因第四內(nèi)含子存在27個bp重復(fù)的多態(tài)性，但可能與非胰島素依賴型糖尿病患者視網(wǎng)膜病變無關(guān)。