【摘要】白細(xì)胞介素-28B（IL-28B）是一種重要的細(xì)胞因子，也被稱之為干擾素-λ3 （IFN-λ3），其作用機(jī)制類似于IFN-α，通過誘導(dǎo)受體異二聚體化，活化JAK-STAT信號通路，進(jìn)而發(fā)揮抗病毒、免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)作用。最近國外研究團(tuán)隊相繼發(fā)現(xiàn)IL-28B基因附近的單核苷酸多態(tài)性與干擾素聯(lián)合利巴韋林治療慢性丙型病毒性肝炎的療效密切相關(guān)。這有助于通過宿主基因水平更準(zhǔn)確的預(yù)測患者治療效果，并有可能在將來提供一種更有效的治療方案。
目的 探討丙型肝炎病毒（HCV）的F蛋白對肝星形細(xì)胞生長及膠原蛋白表達(dá)的影響。方法 將含有HCV f基因的pcDNA3.1-f質(zhì)粒或pcDNA3.1空載體分別轉(zhuǎn)染肝星形細(xì)胞株LX2，G418篩選后獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，分別命名為LX-f細(xì)胞或LX-p細(xì)胞，MTT法測定細(xì)胞增殖情況，ELISA法檢測細(xì)胞分泌的Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白含量。結(jié)果 自培養(yǎng)24 h起，LX-f細(xì)胞各時間點的增殖率均大于LX-p細(xì)胞（Plt;0.01）。培養(yǎng)48 h時，LX-f細(xì)胞的Ⅰ型膠原蛋白及Ⅲ型膠原蛋白分泌量分別為（25.89±0.42） ng/ml和（18.21±0.49） ng/ml，明顯高于LX-p細(xì)胞的（22.65±0.49） ng/ml和（15.29±0.62） ng/ml（Plt;0.01）。結(jié)論 HCV的F蛋白能促進(jìn)肝星形細(xì)胞增殖，并上調(diào)細(xì)胞分泌Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白，誘發(fā)肝纖維化。
【摘要】 目的 探討丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS4B對肝細(xì)胞內(nèi)p53表達(dá)的影響，以及在肝癌發(fā)生中的作用與機(jī)制。 方法 設(shè)置空白對照組、空白載體組、轉(zhuǎn)染NS4B組、轉(zhuǎn)染p53組、共轉(zhuǎn)染NS4B及p53組。使用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法，轉(zhuǎn)染丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白重組質(zhì)粒PCXN2-NS4B及突變型p53基因重組質(zhì)粒pC53-CX22AN3進(jìn)入Chang肝細(xì)胞內(nèi)，并用G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞。采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測p53表達(dá)率。 結(jié)果 空白對照組無p53表達(dá)，空白載體組及轉(zhuǎn)染NS4B組呈弱陽性表達(dá)，轉(zhuǎn)染p53組及共轉(zhuǎn)染組呈陽性表達(dá)；轉(zhuǎn)染p53組、共轉(zhuǎn)染組分別與空白對照組、空白載體組及轉(zhuǎn)染NS4B組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 （Plt;0.05）。 結(jié)論 NS4B可能抑制p53表達(dá)，也可能阻止其進(jìn)入細(xì)胞核，但NS4B與突變型p53關(guān)系不明確。NS4B導(dǎo)致肝細(xì)胞異常增生，誘導(dǎo)肝癌發(fā)生可能不依賴p53的異常表達(dá)及突變。【Abstract】 Objective To investigate the effect of hepatitis C Virus on-structural protein 4B(HCV NS4B) on expression of p53 in hepatic cell, and to study the role and mechanism in development of hepatocellular carcinoma. Methods The experiment was divided into negative control, pure vector PCXN2, PCXN2-NS4B, PC53-cx22AN3, and co-transfection group. Recombinant plasmid PCXN2-NS4B and mutant p53 gene--PC53-cx22AN3, PC53-cx22AN3 with PCXN2-NS4B, blank vectors were transfected into Chang liver cell by liposome-mediated transfection respectively. Positive cells were screened by G418. The expression rate of p53 was measured by immunocytochemistry. Result No expression rate of p53 gene in control group was found, lower positive expression in group PCXN2 and PCXN2-NS4B. The expression of p53 gene in group PC53-CX22AN3 and co-transfection was ber than the others (Plt;0.005). Conclusion HCV-NS4B may inhibit the expression of p53 gene, and it may play a crucial role in inhibiting p53 transfered to hepatic cells nuclear. But it isn’t clear that the. HCV-NS4B can enhance the role of mutant p53 gene. It suggested that HCV-NS4B induce proliferation of hepatic cell not through regulating the expression of p53.
目的:探討丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS4B在原發(fā)性肝癌發(fā)生中的作用,及其發(fā)生機(jī)制。方法:設(shè)置對照組、空白載體PCXN2組、轉(zhuǎn)染NS4B組。使用脂質(zhì)體介導(dǎo)法,轉(zhuǎn)染丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白重組質(zhì)粒NS4B進(jìn)入Chang肝細(xì)胞內(nèi),并用G418篩選。繪制生長曲線,分別用流式細(xì)胞儀檢測瞬時表達(dá)及穩(wěn)定表達(dá)時肝細(xì)胞凋亡率,用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,統(tǒng)計學(xué)分析采用Dunnett t檢驗及q檢驗。結(jié)果:瞬時表達(dá)各組(PCXN2,NS4B)凋亡率分別為:(918±060)%,(445±053)%。穩(wěn)定表達(dá)各組(PCXN2,NS4B)凋亡率分別為:(1575±209)%,(366±034)%。與PCXN2組比較Plt;001。結(jié)論:NS4B抑制肝細(xì)胞凋亡率,可能導(dǎo)致肝細(xì)胞異常增殖,誘導(dǎo)肝癌發(fā)生。
鑒于丙型肝炎病毒(HCV)危害著人類健康, 本研究擬用反轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(RT-LAMP)建立一種簡易檢測方法。收集并用FQ-PCR(金標(biāo)準(zhǔn))檢測臨床樣本。根據(jù)HCV保守5'非編碼區(qū)設(shè)計4條通用引物, 然后用Taq DNA聚合酶優(yōu)化傳統(tǒng)RT-LAMP體系, 通過酶切和交叉實驗以評價RT-LAMP的特異性, 通過和反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)同時檢測倍比稀釋的模板以評價RT-LAMP的靈敏度。同時判斷鈣黃綠素和羥基萘芬藍(lán)(HNB)染色法是否與電泳法的結(jié)果相同。結(jié)果顯示, Taq DNA聚合酶可提高擴(kuò)增效率, RT-LAMP的特異性好, 酶切片段與預(yù)期相一致(216 bp)且只有HCV被擴(kuò)增, 靈敏度為10 IU/tube, 比RT-PCR高10倍。另外, 兩種染料和電泳法的檢測結(jié)果相同。RT-LAMP和RT-PCR檢測75例臨床樣本的一致性差(P＜0.05, Kappa=0.375), 和FQ-PCR的一致性好(P＞0.05, Kappa=0.762)。綜上所述, RT-LAMP簡易、特異、靈敏, 適用于基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)。
目的探討病毒性肝炎與肝外膽管癌發(fā)病的相關(guān)性。 方法檢索Cochrane、Medline、Embase、PubMed、中國知網(wǎng)及萬方數(shù)據(jù)庫以獲得研究病毒性肝炎與肝外膽管癌發(fā)病關(guān)系的文獻(xiàn)，對符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)進(jìn)行質(zhì)量評價和數(shù)據(jù)提取后，采用RevMan 5.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行Meta分析。 結(jié)果根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)，最終納入了9篇文獻(xiàn)，其中有8篇與乙型肝炎病毒（HBV）相關(guān)，有6篇與丙型肝炎病毒（HCV）相關(guān)。Meta分析結(jié)果顯示：HBV感染是肝外膽管癌的危險因素（OR=1.69，95% CI：1.32～2.17，P<0.000 1）；在美國，HCV感染是肝外膽管癌發(fā)病的危險因素（OR=5.53，95% CI：2.21～13.82，P=0.000 3）；在中國，HCV感染不是肝外膽管癌發(fā)病的危險因素（OR=0.82，95% CI：0.44～1.52，P=0.520 0）。 結(jié)論HBV感染可能是肝外膽管癌的獨立致病危險因素。HCV感染可能與美國人群肝外膽管癌的發(fā)病有關(guān)，而在中國，其與肝外膽管癌的發(fā)病無直接關(guān)聯(lián)。
目的 對四川大學(xué)華西醫(yī)院的丙型肝炎患者 HCV 病毒基因分型特點進(jìn)行分析，探討 HCV 主要基因型與臨床特征。 方法 納入 2011 年 3 月～2016 年 9 月就診于四川大學(xué)華西醫(yī)院 HCV 基因分型成功的 4 520 例 HCV 患者，對 HCV 基因型和主要基因型患者的肝功能、基線病毒載量進(jìn)行分析，探討 HCV 基因型在肝癌、肝硬化和 HBV/HCV 復(fù)合感染患者的分布情況。 結(jié)果 納入患者的 HCV 基因型分為 1、2、3、4、6 五種基因型及 23 種亞型，基因型/亞型以 1b、1*、3b、2a、3a、6a 為主，分別占 66.42%、8.01%、6.57%、4.54%、4.29%、3.41%。男性和女性中均以 1b 型為主，分別占 29.89% 和 36.53%。HCV 主要基因型/亞型在門（急）診患者與住院患者中分布相似。HCV 主要基因型/亞型在不同年齡段均以 1b 型占優(yōu)。在男性中，6a 亞型的 ALT 值最高；在女性中，3a 亞型的 ALT 值最高。納入的 94 例肝硬化患者中，1b 型最高 為42 例；6 例肝癌患者中，僅有 1b 和 3b 型檢出。HCV 和 HBV 雙重感染患者共 53 例，基因型3a占比最高，共 12 例。 結(jié)論 四川大學(xué)華西醫(yī)院就診 HCV 患者 HCV 基因型/亞型具有獨特的分布特點，以1b、1*、3b、2a、3a、6a 為主。