目的 表皮葡萄球菌胞間黏附素基因（intercellar adhesion，ica）是細菌聚集的關(guān)鍵因子，通過分析醫(yī)源性表皮葡萄球菌生物膜基因型，探討ica 操縱子在聚氯乙烯（polyvinyl chloride，PVC）材料表面細菌生物膜形成中的作用。 方法 取56 株醫(yī)源性表皮葡萄球菌臨床分離株，應用PCR 法、基因測序技術(shù)檢測細菌生物膜形成相關(guān)基因，包括16S rRNA、自溶素（autolysin，atlE）、纖維蛋白原結(jié)合蛋白（fibrinogen binding protein，fbe）以及ica。取醫(yī)源性表皮葡萄球菌制備濃度為1 × 105 cfu/mL 的細菌懸液，并根據(jù)目的基因檢測結(jié)果，分別以icaADB、atlE、fbe 陽性基因型（ica 操縱子陽性組）以及icaADB 陰性而atlE、fbe 陽性基因型（ica 操縱子陰性組）與PVC 材料培養(yǎng)。于6、12、18、24、30 h 各取2 個PVC 材料，進行激光共聚焦顯微鏡及掃描電鏡觀察，測量單位視野細菌群落數(shù)量及形成的細菌生物膜厚度。 結(jié) 果 目 的 基因檢測示，醫(yī)源性表皮葡萄球菌16S rRNA 陽性率為100%（56/56）；icaADB、atlE、fbe 陽性基因型菌株占57.1%（32/56）；icaADB 陰性而atlE、fbe 陽性基因型菌株占37.5%（21/56）。測序結(jié)果示，目的基因16S rRNA、atlE、fbe、icaADB 擴增產(chǎn)物序列分別與GenBank 中基因序列相符。隨時間延長，ica 操縱子陰性組的PVC 材料表面無明顯細菌生物膜形成；ica 操縱子陽性組的PVC 材料表面細菌群落數(shù)量逐漸增多，細菌生物膜體積逐漸增大，24 h 時可見成熟的細菌生物膜結(jié)構(gòu)，30 h 時細菌生物膜體積趨于穩(wěn)定。培養(yǎng)各時間點ica 操縱子陽性組PVC 材料表面單位視野細菌群落數(shù)量（F=435.987，P=0.000）及細菌生物膜厚度（F=6 714.395，P=0.000）明顯高于ica 操縱子陰性組，差異均有統(tǒng)計學意義。 結(jié)論 醫(yī)源性表皮葡萄球菌可以分為ica 操縱子陰性和ica 操縱子陽性兩類細菌；ica 操縱子可以增加PVC 材料表面細菌生物膜的形成能力、細菌群落數(shù)量及細菌生物膜厚度，在PVC 材料表面細菌生物膜形成中具有重要作用。
目的 探討不同溴代呋喃酮對聚氯乙烯（polyvinyl chloride，PVC）材料表面大腸桿菌生物膜形成的影響，為生物材料表面改性研究及臨床生物材料植入感染的防治提供新思路。 方法 選用具有化學結(jié)構(gòu)代表性的3 種溴代呋喃酮，溴代呋喃酮1：3，4- 二溴基-5- 羥基- 呋喃酮，溴代呋喃酮2：4- 溴-5-（4- 甲氧基苯基）-3-（甲氨基）- 呋喃酮，溴代呋喃酮3：3，4- 二溴基-5，5- 二甲苯基-2（5H）- 呋喃酮，分別對PVC 材料片（1 cm × 1 cm）進行表面涂層改性，將改性后的PVC 材料片與大腸桿菌共同培養(yǎng)；將PVC 材料片用75% 乙醇浸泡5 min 后與大腸桿菌共同培養(yǎng)作為對照組。分別于培養(yǎng)6、12、18、24 h，采用激光共聚焦顯微鏡動態(tài)觀測PVC 材料表面單位面積細菌群落數(shù)及細菌群落厚度，掃描電鏡觀察PVC 材料表面細菌生物膜表面結(jié)構(gòu)。 結(jié)果 激光共聚焦顯微鏡觀測顯示，各時間點溴代呋喃酮3 組PVC 材料表面單位面積細菌群落數(shù)以及細菌群落厚度均小于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；而溴代呋喃酮1 組和溴代呋喃酮2 組與對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。掃描電鏡觀察示，與對照組比較，溴代呋喃酮3 組培養(yǎng)后6 h PVC 材料表面細菌群落附著數(shù)量較少；18 h 時對照組及溴代呋喃酮1 組和溴代呋喃酮2 組PVC 材料表面細菌生物膜結(jié)構(gòu)已初步形成，而溴代呋喃酮3 組PVC 材料表面無明顯細菌生物膜結(jié)構(gòu)形成。 結(jié)論 不同溴代呋喃酮對PVC 材料表面大腸桿菌生物膜形成的影響不同，3，4- 二溴基-5，5- 二甲苯基-2（5H）- 呋喃酮可抑制PVC 材料表面單位面積大腸桿菌群落數(shù)和細菌群落厚度形成。
目的探討表皮葡萄球菌生物膜形成相關(guān)基因——胞間黏附素A（intercellular adhesion A,icaA）基因、纖維蛋白原結(jié)合蛋白（fibrinogen binding protein,fbe）基因、聚集相關(guān)蛋白（accumulation-associated protein,aap）基因在表皮葡萄球菌和白假絲酵母菌混合生物膜形成中的作用。 方法實驗分為3組，用表皮葡萄球菌標準株ATCC35984（表葡組）及白假絲酵母菌標準株ATCC10231（白念組）分別培養(yǎng)及混合培養(yǎng)（混合組），建立表皮葡萄球菌、白假絲酵母菌及二者混合生長的體外生物膜模型。于培養(yǎng)2、4、6、8、12、24、48、72 h，采用結(jié)晶紫染色法半定量檢測生物膜形成能力，二甲氧唑黃[（2，3 bis （2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl）5〔（phenylamino）Carbonyl〕2H-tetrazolium hydroxide assay，XTT]比色法評價生物膜體外生長動力學；24、72 h掃描電鏡觀察生物膜超微結(jié)構(gòu)。熒光定量PCR分析培養(yǎng)72 h表葡組及混合組icaA、fbe、aap基因表達情況。 結(jié)果結(jié)晶紫染色法生物膜半定量檢測示，混合組和表葡組均在培養(yǎng)12 h生物膜明顯增厚，72 h混合組超過表葡組，組間比較除72 h外，其余各時間點兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；白念組12 h出現(xiàn)生物膜的生長，在整個培養(yǎng)周期白念組生物膜厚度均低于混合組（P＜0.05）。XTT比色法生長動力學檢測示，混合組整體生長速度快于白念組，且48 h后超過表葡組；混合組與表葡組除12 h差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）外，其余各時間點比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；混合組培養(yǎng)2、4 h時A值低于白念組，但比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；6 h后各時間點A值均顯著高于白念組（P＜0.05）。掃描電鏡觀察示，隨培養(yǎng)時間延長各組均形成結(jié)構(gòu)復雜、成熟的生物膜。培養(yǎng)72 h熒光定量PCR檢測示，與表葡組相比，混合組fbe、icaA、aap基因表達量分別增高1.93、1.52、1.46倍，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 結(jié)論表皮葡萄球菌和白假絲酵母菌混合生長能形成比單一微生物結(jié)構(gòu)更復雜的混合生物膜；混合生物膜較單一微生物生物膜更厚，可能與表皮葡萄球菌icaA、aap、fbe基因表達增加有關(guān)。
目的探討表皮葡萄球菌胞間黏附素基因（intercellular adhesion，ica）操縱子對氣管導管材料表面表皮葡萄球菌與白假絲酵母菌混合生物膜相關(guān)炎癥作用影響的體內(nèi)研究。方法取表皮葡萄球菌標準株 RP62A（ica 操縱子陽性，陽性組）、ATCC12228（ica 操縱子陰性，陰性組）制備濃度為 1×106CFU/mL 的菌液，分別與相同濃度的白假絲酵母菌標準株 ATCC10231 菌液按照 1∶1 比例制備成混合培養(yǎng)菌液后，與氣管導管材料片孵育 24 h，掃描電鏡觀察材料表面混合生物膜形成情況。取 4～6 月齡新西蘭兔 30 只分為兩組（n=15），分別于氣管旁植入孵育 24 h 的陽性組及陰性組氣管導管材料。于術(shù)前及術(shù)后 1、3、7 d 測量兩組兔體質(zhì)量。術(shù)后 1、3、7 d，采用 ELISA 檢測試劑盒檢測血漿中 IL-1β、IL-6、TNF-α 和單核細胞趨化蛋白 1（monocytechemotactic protein 1，MCP-1）水平；術(shù)后 7 d，掃描電鏡觀察取出的氣管導管材料片表面混合生物膜形成情況，HE 染色觀察材料周圍組織炎癥浸潤情況，平板菌落計數(shù)法觀察心臟、肺、肝臟、腎臟細菌感染情況。結(jié)果掃描電鏡觀察示體外孵育 24 h 后陽性組可見明顯混合生物膜結(jié)構(gòu)，陰性組未見混合生物膜形成。體內(nèi)實驗顯示兩組術(shù)前及術(shù)后 1、3、7 d 體質(zhì)量比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與陰性組相比，陽性組術(shù)后 1 d IL-1β 及 MCP-1 水平，術(shù)后 3、7 d IL-1β、MCP-1、IL-6、TNF-α 水平均升高，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。掃描電鏡觀察示陽性組可見大量表皮葡萄球菌殘留以及混合生物膜結(jié)構(gòu)，陰性組見極少量表皮葡萄球菌殘留，未見混合生物膜結(jié)構(gòu)。HE 染色示兩組材料周圍組織均可見炎癥細胞浸潤，其中陽性組中性粒細胞及淋巴細胞浸潤較陰性組嚴重。兩組心臟、肝臟細菌感染數(shù)量差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），陽性組肺、腎臟細菌感染數(shù)量高于陰性組（P<0.05）。結(jié)論ica 操縱子在表皮葡萄球菌與白假絲酵母菌混合感染中可能由于增強了混合生物膜結(jié)構(gòu)及其在體內(nèi)的傳播，導致炎癥因子升高，細菌難以清除，感染遷延不愈。