目的 探討人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1（hTIMP-1）過表達(dá)對人肝癌細(xì)胞系HepG2體外增殖的作用。方法 構(gòu)建攜載hTIMP-1全長cDNA的重組腺病毒載體，感染HepG2細(xì)胞，應(yīng)用Western blot及RT-PCR方法檢測TIMP-1蛋白及mRNA的表達(dá)，透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變，MTT法檢測hTIMP-1對HepG2細(xì)胞生長的影響。結(jié)果 成功構(gòu)建攜載hTIMP-1的重組腺病毒載體，感染HepG2細(xì)胞，實現(xiàn)其體外穩(wěn)定表達(dá)，hTIMP-1過表達(dá)對HepG2體外增殖有明顯抑制作用。結(jié)論 hTIMP-1過表達(dá)可抑制人肝癌細(xì)胞系HepG2的體外增殖，可用于肝癌基因治療的研究。
目的構(gòu)建攜帶多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)全長基因的真核表達(dá)載體，并研究其在人肝癌細(xì)胞株HepG2中的表達(dá)特性。方法雙酶切克隆質(zhì)粒pGEM-mrp1，獲得含mrp1全長的cDNA片段，再將此片段定向克隆到哺乳動物真核表達(dá)載體pCI-neo的多克隆位點，經(jīng)脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系HepG2/mrp1。RT-PCR檢測HepG2/mrp1細(xì)胞mrp1 mRNA表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測HepG2/mrp1細(xì)胞MRP的含量。結(jié)果本實驗所構(gòu)建的攜帶mrp1全長基因的表達(dá)載體pCI-mrp1能在HepG2細(xì)胞中表達(dá)，形成穩(wěn)定的多藥耐藥細(xì)胞系HepG2/mrp1，其多藥耐藥性、MRP含量及mrp1 mRNA表達(dá)均較未轉(zhuǎn)染該載體的HepG2細(xì)胞顯著增加。結(jié)論將攜帶全長人多藥耐藥相關(guān)蛋白基因mrp1的載體導(dǎo)入人肝癌細(xì)胞株能夠建立高效、穩(wěn)定的多藥耐藥細(xì)胞株，為進(jìn)一步研究多藥耐藥的機(jī)理及逆轉(zhuǎn)多藥耐藥提供理想的細(xì)胞模型。
目的 探討 CD19+IL-10+ B 細(xì)胞及其亞群在結(jié)直腸癌患者外周血及其癌組織中的表達(dá)差異及臨床意義。方法 納入在西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 2017 年 11 月至 2018 年 11 月期間確診為結(jié)直腸癌并行手術(shù)患者共 38 例，用流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)直腸癌患者外周血、癌組織及其相應(yīng)癌旁組織中 CD19+IL-10+ B 細(xì)胞及其3 種亞群 CD19+IL-10+CD24hiCD38hi B 細(xì)胞、CD19+IL-10+CD24intCD38int B 細(xì)胞及 CD19+IL-10+CD24hiCD38– B 細(xì)胞占 CD19+ B 細(xì)胞的百分比；另外納入同時間段在西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院健康體檢者共 37 例，僅抽取外周血同法分離細(xì)胞。比較 CD19+IL-10+ B 細(xì)胞及其亞群含量在結(jié)直腸癌和健康對照者外周血中以及在結(jié)直腸癌患者癌組織及其相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)差異，并分析其與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 ① 結(jié)直腸癌患者外周血中 CD19+IL-10+ B 細(xì)胞和 CD19+IL-10+CD24hiCD38hi B 細(xì)胞含量明顯高于健康對照組（分別為：t=9.09，P<0.01；t=9.36，P<0.01），CD19+IL-10+CD24hiCD38– B 細(xì)胞含量明顯低于健康對照組（t=6.15，P<0.01），而 CD19+IL-10+CD24intCD38int B 細(xì)胞含量在 2 組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.78，P=0.08）。② CD19+IL-10+ B 細(xì)胞和 CD19+IL-10+CD24hiCD38hiB 細(xì)胞含量在結(jié)直腸癌患者的癌組織中明顯高于在其相應(yīng)的癌旁組織中（分別為：t=11.67，P<0.01；t=19.64，P<0.01），而 CD19+IL-10+CD24intCD38int B 細(xì)胞和 CD19+IL-10+CD24hiCD38– B 細(xì)胞含量在二者間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（分別為：t=1.72，P=0.09；t=1.57，P=0.12）。③ CD19+IL-10+ B 細(xì)胞及其亞群 CD19+IL-10+CD24hiCD38hi B 細(xì)胞含量在Ⅲ+Ⅳ期結(jié)直腸癌患者外周血中明顯高于Ⅰ+Ⅱ期者（t=5.39，P<0.01；t=3.13，P<0.01），而其他均未發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 CD19+IL-10+ B 細(xì)胞在結(jié)直腸癌患者的外周血和癌組織以及中晚期結(jié)直腸癌患者的外周血中均明顯增高，且其以 CD19+IL-10+CD24hiCD38hi B 細(xì)胞亞群升高為主，結(jié)果提示，CD19+IL-10+ B 細(xì)胞及其亞群 CD19+IL-10+CD24hiCD38hi B 細(xì)胞可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生及進(jìn)展有關(guān)。