目的 探討玻璃化凍存組織工程肌腱植入大鼠體內(nèi)修復(fù)跟腱缺損后不同時(shí)期，大鼠的免疫排斥反應(yīng)及對(duì)肝、腎、心血管功能的影響。 方法 抽取1 周齡SD 大鼠尾腱，采用組織塊法培養(yǎng)肌腱細(xì)胞。取第2 ～ 4 代肌腱細(xì)胞，以5 × 106 個(gè)/mL 細(xì)胞密度接種至長1.5 cm 生物衍生肌腱材料，復(fù)合培養(yǎng)構(gòu)建組織工程肌腱。采用21%DMSO 作為玻璃化凍存保護(hù)液，Eurocollins solution 作為4℃條件下預(yù)冷液和洗脫液的基礎(chǔ)液體，按自制的玻璃化凍存方法凍存。健康SD大鼠72 只，雌雄不限，體重210 ～ 230 g。隨機(jī)分成A（n=32）、B（n=32）、C（n=8）3 組。A、B 組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于跟腱中段制備長約0.5 cm 肌腱缺損模型，分別將玻璃化凍存后及未凍存的組織工程肌腱移植修復(fù)缺損肌腱；C 組大鼠未手術(shù)，為正常對(duì)照。術(shù)后2、4、6、8 周，行大體觀察、肝、腎及心血管功能檢測；術(shù)后2、4、6 周行血清免疫學(xué)檢測。 結(jié) 果 A、B 組植入部位均未見組織壞死、積液及化膿感染；術(shù)后2 周，A、B 組均出現(xiàn)粘連現(xiàn)象，4 ～ 6 周逐漸好轉(zhuǎn)，8 周未見明顯粘連，新生組織連續(xù)性完整，肌腱橋接部已愈合，與正常肌腱類似。術(shù)后2、4、6 周，血清中IgG 和IgM 含量A、B、C 組組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。肝功能檢測：A 組術(shù)后4 周，B 組術(shù)后4、6 周，谷草轉(zhuǎn)氨酶均低于C 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；其余各時(shí)間點(diǎn)A、B 組谷草轉(zhuǎn)氨酶與C 組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。各時(shí)間點(diǎn)A、B 組谷丙轉(zhuǎn)氨酶、ALP、直接膽紅素和總膽紅素與C 組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。腎功能檢測：術(shù)后2 周，A 組血清白蛋白和B 組肌酐明顯下降，與C 組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；術(shù)后4、6、8 周，A、B 組各指標(biāo)濃度與C 組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。心血管功能檢測：A 組各時(shí)間點(diǎn)血糖、甘油三酯、膽固醇與C 組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；B 組術(shù)后8 周甘油三酯與C 組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 玻璃化凍存的組織工程肌腱植入大鼠體內(nèi)修復(fù)跟腱缺損，未引起明顯免疫排斥反應(yīng)，對(duì)肝、腎及心血管功能無明顯影響。
目的 研究大鼠BMSCs 與小腸黏膜下層（small intestinal submucosa，SIS）復(fù)合后，施加動(dòng)態(tài)應(yīng)變刺激能否使BMSCs 在體外分化為肌腱細(xì)胞（tenocytes，TCs）。 方法 取1 周齡SD 大鼠骨髓，采用貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)大鼠BMSCs，并用多向分化誘導(dǎo)法和流式細(xì)胞儀檢測進(jìn)行鑒定。用生物力學(xué)試驗(yàn)機(jī)行SIS 的拉伸破壞實(shí)驗(yàn)，計(jì)算SIS 的彈性應(yīng)變。將分離純化后的第2 代BMSCs 以2.5 × 105 個(gè)/cm2 細(xì)胞密度種植于3 cm × 1 cm 大小的SIS 上，形成BMSCs-SIS復(fù)合物，固定于應(yīng)變培養(yǎng)裝置對(duì)其進(jìn)行靜態(tài)培養(yǎng)2 d 后，施加應(yīng)變刺激（拉伸頻率為0.02 Hz，作用時(shí)間為15 min/h、12 h/d，應(yīng)變幅度為5%）動(dòng)態(tài)培養(yǎng)5 d，作為實(shí)驗(yàn)組；BMSCs-SIS 復(fù)合物持續(xù)靜態(tài)培養(yǎng)作為對(duì)照組；采用組織塊法分離培養(yǎng)SD 大鼠鼠尾TCs，用第2 代TCs 與SIS 復(fù)合，相同條件下靜態(tài)培養(yǎng)作為陽性對(duì)照組。掃描電鏡觀察應(yīng)變培養(yǎng)后BMSCs 形態(tài)變化，ELISA 法檢測培養(yǎng)后細(xì)胞上清液中2 種TCs 標(biāo)志蛋白Scleraxis 和Tenomodulin 的含量。 結(jié)果 分離培養(yǎng)的SD 大鼠BMSCs 經(jīng)多向分化誘導(dǎo)后，可以分化為成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，且流式細(xì)胞儀檢測示表面標(biāo)志抗原CD34、CD45 為陰性，CD90 為陽性，符合BMSCs 生物學(xué)特性。SIS 拉伸破壞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，SIS 平均彈性應(yīng)變?yōu)?9.5%。掃描電鏡觀察示實(shí)驗(yàn)組材料上細(xì)胞具有類TCs 形態(tài)；ELISA 法檢測示，實(shí)驗(yàn)組應(yīng)變培養(yǎng)后細(xì)胞上清液中Scleraxis 和Tenomodulin 含量分別為（3.56 ± 0.91）μmol/L 和（4.27 ± 1.10）μmol/L，陽性對(duì)照組分別為（14.73 ± 2.30）μmol/L 和（10.65 ± 1.51）μmol/L，對(duì)照組分別為（0.23 ± 0.14）μmol/L 和（0.16 ± 0.10）μmol/L；3 組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 適當(dāng)?shù)膽?yīng)變刺激培養(yǎng)可在體外誘導(dǎo)BMSCs 向TCs 方向分化，尚需進(jìn)一步研究最佳的應(yīng)變刺激誘導(dǎo)條件。