目的 培養(yǎng)人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞，建立人視網(wǎng)膜血管體外二維模型。 方法 人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞在纖維連接蛋白包被的細(xì)胞培養(yǎng)池內(nèi)，以無血清人內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)，形成二維血管模型。用辣根過氧化酶檢測其通透性。部分血管模型加入5 ng/ml的血管內(nèi)皮生長因子培養(yǎng)，與無血管內(nèi)皮生長因子培養(yǎng)形成的血管模型比較通透性的變化，觀察血管內(nèi)皮生長因子對血管通透性的影響。 結(jié)果2～4 d左右內(nèi)皮細(xì)胞亞融合形成網(wǎng)狀血管樣結(jié)構(gòu)，6 d左右形成較完整的二維血管模型。血管內(nèi)皮生長因子可增大血管的通透性，促進血管生成。 結(jié)論 用人內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基可成功培養(yǎng)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞；利用細(xì)胞培養(yǎng)池和無血清人內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)，可建立標(biāo)準(zhǔn)的體外視網(wǎng)膜二維血管模型。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 110-112)
目的 觀察人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞（HREC）低氧模型中乙酰肝素酶（Hpa）、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和RNA 聚合酶-Ⅱ (Pol-Ⅱ)的表達(dá)變化，探討低氧性視網(wǎng)膜新生血管形成中Hpa和VEGF的相關(guān)性及可能機制。方法 使用低氧模擬劑氯化鈷（CoCl2）造成HREC低氧模型，分為4組，分別為正常對照組、低氧誘導(dǎo)組、磷酸甘露戊糖硫酸鹽（PI-88）組和空白對照組。低氧誘導(dǎo)組為含CoCl2 100 μmol/ml的培養(yǎng)液培養(yǎng)48 h；PI-88組為含CoCl2 100 μmol/L和Hpa競爭性抑制劑PI88 5 μg/ml的培養(yǎng)液干預(yù)48 h；空白對照組為等量PBS干預(yù)HREC 48 h。免疫熒光染色法觀察正常對照組和低氧誘導(dǎo)組HREC中Hpa、VEGF以及Pol Ⅱ的表達(dá)。蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot）檢測各組間Hpa和VEGF蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果免疫熒光染色結(jié)果顯示，低氧誘導(dǎo)組HREC細(xì)胞質(zhì)內(nèi)Hpa熒光和VEGF熒光均較正常對照組增強；PI-88組細(xì)胞質(zhì)內(nèi)VEGF熒光較低氧誘導(dǎo)組減弱。低氧誘導(dǎo)組細(xì)胞核內(nèi)Hpa較正常對照組明顯增強,且分布與Pol-Ⅱ相吻合。Western blot檢測結(jié)果顯示，與正常對照組比較，低氧誘導(dǎo)組Hpa蛋白和VEGF蛋白表達(dá)均明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Hpa：F=-4.005，P＜0.05；VEGF：F=-4.063，P＜0.05）；PI-88組VEGF蛋白表達(dá)較低氧誘導(dǎo)組VEGF蛋白表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=5.963，P＜0.05）。結(jié)論 低氧誘導(dǎo)的HREC中，Hpa的表達(dá)增高，導(dǎo)致VEGF的增加，促進了視網(wǎng)膜新生血管形成。
目的觀察補體受體1(CR1)對補體激活的氧化應(yīng)激狀態(tài)下人視網(wǎng)膜色素上皮(hRPE)單層細(xì)胞屏障的保護作用。 方法原代培養(yǎng)3~5代hRPE細(xì)胞, 建立穩(wěn)定的hRPE單層細(xì)胞屏障模型。500 μmol/L叔丁基過氧化氫和10%正常人血清處理hRPE細(xì)胞, 建立hRPE單層細(xì)胞屏障補體激活的氧化損傷模型。將補體激活的氧化應(yīng)激狀態(tài)下hRPE單層細(xì)胞屏障分為模型組和CR1治療組。模型組加入1 μl的磷酸鹽緩沖液, CR1治療組加入1 μl的CR1溶液使其終濃度為1 μg/ml, 繼續(xù)培養(yǎng)4 h。以正常hRPE單層細(xì)胞屏障作為正常對照組, 檢測模型組和CR1治療組細(xì)胞的跨表皮細(xì)胞膜電阻(TER)值。酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測模型組和CR1治療組血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、趨化因子配體2(CCL2)、C3a、C5a、膜攻擊復(fù)合物(MAC)的蛋白量。 結(jié)果hRPE單層細(xì)胞屏障于接種后3周穩(wěn)定形成。模型組、CR1治療組補體激活的氧化損傷hRPE細(xì)胞TER值分別為正常hRPE細(xì)胞的54.01%、63.48%。模型組與CR1治療組補體激活的氧化損傷hRPE細(xì)胞TER值比較, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=21.60, P<0.05)。CR1治療組VEGF、CCL2蛋白量分別較模型組下降了11.48%、23.47%;兩組VEGF、CCL2蛋白量比較, 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(t=3.26、2.43, P<0.05)。CR1治療組C3a、C5a、MAC蛋白量較模型組分別下降了24.00%、27.87%、22.44%;兩組C3a、C5a、MAC蛋白量比較, 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(t=9.86、2.63、6.94, P<0.05)。 結(jié)論CR1對補體激活的氧化應(yīng)激狀態(tài)下hRPE單層細(xì)胞屏障具有保護作用, 抑制補體激活、下調(diào)CCL2和VEGF表達(dá)可能是其機制。