目的 探討水通道蛋白1（AQP-1）在炎癥性胸腔積液大鼠胸膜上的表達(dá)及其與胸水形成的關(guān)系。方法 56只健康Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（8只）和胸膜炎組（48只）。采用角叉菜膠胸腔內(nèi)注射復(fù)制炎癥性胸腔積液大鼠模型。胸膜炎組根據(jù)注入角叉菜膠后處理時(shí)間再分為6，12，24，36，48和72 h組，每組8只。測(cè)定各組大鼠胸腔積液量，對(duì)胸腔積液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類(lèi)，采用HE染色觀察臟、壁層胸膜的病理變化，采用免疫組化染色檢測(cè)AQP-1在大鼠胸膜上的分布，分別采用RT-PCR和Western blot方法檢測(cè)臟、壁層胸膜AQP-1的mRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果 胸膜炎各時(shí)相組胸水量分別為2.10±0.22、4.10±0.15、4.40±0.36、3.20±0.27、2.60±0.18和0.12±0.02 mL。AQP-1主要表達(dá)在臟、壁層胸膜的間皮細(xì)胞和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞。胸膜炎各時(shí)相組臟、壁層胸膜AQP-1表達(dá)均增強(qiáng)。胸膜炎組AQP-1 mRNA在壁層胸膜的表達(dá)于6 h開(kāi)始升高，24 h達(dá)高峰；在臟層胸膜的表達(dá)于12 h開(kāi)始升高，24 h達(dá)高峰。AQP-1蛋白表達(dá)的變化趨勢(shì)與mRNA表達(dá)一致。12 h和24 h組壁層胸膜AQP-1表達(dá)與胸腔積液量正相關(guān)（r=0.857，r=0.846，P均lt;0.01）；24 h臟層胸膜AQP-1表達(dá)與胸腔積液量正相關(guān)（r=0.725，Plt;0.05）。結(jié)論 胸膜炎胸腔積液時(shí)胸膜AQP-1表達(dá)增強(qiáng)，AQP-1可能參與炎癥性胸腔積液的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。
目的 探討水通道蛋白1( AQP1 ) 在胸腔積液發(fā)生機(jī)制中的作用。方法 SD 大鼠按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為5 組( n =24) : 地塞米松組、內(nèi)毒素組、紅霉素組、高滲鹽水組及對(duì)照組, 通過(guò)免疫組織化學(xué)染色測(cè)定AQP1 在胸膜上的表達(dá)和定位; 采用Real-time RT-PCR 方法對(duì)不同刺激因子作用下不同時(shí)間胸膜組織AQP1 的基因表達(dá)進(jìn)行定量分析。結(jié)果 大鼠臟、壁層胸膜間皮細(xì)胞及壁層胸膜下毛細(xì)血管內(nèi)皮上均存在AQP1 的表達(dá), 臟層胸膜間皮細(xì)胞上AQP1 的表達(dá)較壁層胸膜明顯[ ( 7. 43 ±2. 02) ×104 copy / μg 比( 4. 14 ±1. 12) ×104 copy/ μg, P lt;0. 05] 。地塞米松、高滲鹽水上調(diào)大鼠胸膜組織AQP1 的表達(dá)( P lt;0. 05) ; 紅霉素、內(nèi)毒素下調(diào)胸膜組織上AQP1 的表達(dá)( P lt;0. 05) 。結(jié)論 地塞米松、內(nèi)毒素、紅霉素和高滲鹽水刺激下胸膜組織AQP1 表達(dá)的改變, 提示存在炎癥因子和滲透梯度下調(diào)控AQP1 的途徑, 胸膜組織上AQP1 可能參與了炎癥性胸腔積液的分泌和吸收。
目的 觀察水通道蛋白1( AQP-1) 在急性過(guò)敏性哮喘小鼠肺組織表達(dá)的變化, 以及乙酰唑胺( AZ) 對(duì)AQP-1 表達(dá)的影響。方法 40 只C57BL/6 小鼠隨機(jī)分對(duì)照組( A 組) 、AZ 大劑量干預(yù)組( 300 mg/kg, B 組) 、AZ 中劑量干預(yù)組( 200 mg/kg, C 組) 、AZ 小劑量干預(yù)組( 100 mg/kg, D 組) 和哮喘組( E 組) , 每組8 只。干預(yù)組在激發(fā)階段給予不同劑量的AZ 腹腔注射。結(jié)果 ①E 組肺組織的濕干重比值比A 組明顯增高( P lt;0. 05) ; B、C、D組肺組織的濕干重比值較E 組顯著減低( P lt;0. 05) , 與劑量呈負(fù)相關(guān)性。②E 組BALF 中細(xì)胞總數(shù)、嗜酸粒細(xì)胞數(shù)和IL-5 水平均高于A 組( P lt; 0. 05) ,IFN-γ水平低于A 組( P lt;0. 05) , 治療后細(xì)胞總數(shù)、嗜酸粒細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞均明顯下降( P lt;0. 05) , 且與劑量呈正相關(guān)性。③E 組AQP-1 在氣管黏膜上皮、微血管內(nèi)膜上皮、支氣管周?chē)艽布把装Y細(xì)胞呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá), 其表達(dá)水平明顯高于A 組( P lt;0. 01) , 使用AZ 干預(yù)后表達(dá)明顯低于E 組( P lt;0. 05) , 下降的幅度與劑量呈正相關(guān)性; 但AQP-1 mRNA 檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯差異( P gt; 0. 05) 。結(jié)論 ①AQP-1 在急性哮喘小鼠肺組織內(nèi)及炎癥細(xì)胞上過(guò)度表達(dá), E 組呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。②AZ 對(duì)AQP-1 有顯著的抑制作用, 可明顯改善小鼠肺部的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變, 且呈劑量依賴(lài)性。③AQP-1蛋白質(zhì)在各組中表達(dá)差異較大, 但AQP-1 mRNA 無(wú)明顯差異, 提示乙酰唑胺對(duì)AQP-1 的影響可能是在轉(zhuǎn)錄后的水平上。
目的 水通道蛋白1（aquaporins 1，AQP-1）表達(dá)變化可能與細(xì)胞凋亡相關(guān)。通過(guò)觀察軟骨組織中AQP-1 和半胱天冬氨酸蛋白酶 3（Caspase-3）的表達(dá)，探討AQP-1 表達(dá)與軟骨細(xì)胞凋亡的相關(guān)性，為進(jìn)一步研究骨性關(guān)節(jié)炎（os teoarthritis，OA）的發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 取8 周齡清潔級(jí)雄性SD 大鼠72 只，體重286 ～ 320 g，平均300 g；隨機(jī)分為手術(shù)組、假手術(shù)組和對(duì)照組，每組24 只。手術(shù)組采用切斷前交叉韌帶及內(nèi)側(cè)副韌帶、部分切除內(nèi)側(cè)半月板方法制備大鼠雙膝OA 模型；假手術(shù)組僅暴露關(guān)節(jié)腔；對(duì)照組不作處理。造模后觀察大鼠一般情況，于1、2、4、8 周處死大鼠取膝關(guān)節(jié)標(biāo)本行大體、組織學(xué)觀察；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè) AQP-1 和Caspase-3 mRNA 的表達(dá)情況；使用酶標(biāo)儀檢測(cè)Caspase-3 蛋白酶活性；并對(duì)AQP-1 mRNA 表達(dá)與Caspase-3 mRNA 的表達(dá)及蛋白酶活性的相關(guān)性進(jìn)行分析。 結(jié)果 術(shù)后共6 只大鼠死亡，均給予補(bǔ)充；其余大鼠均存活至實(shí)驗(yàn)完成。各時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組及假手術(shù)組膝關(guān)節(jié)軟骨外觀及結(jié)構(gòu)均正常；隨時(shí)間延長(zhǎng)手術(shù)組關(guān)節(jié)軟骨表面粗糙且有裂隙，可見(jiàn)大量贅生物，軟骨表層纖維化，細(xì)胞排列紊亂。參照Mankin 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，造模后1 周各組組織學(xué)評(píng)分比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；2、4、8 周時(shí)手術(shù)組與對(duì)照組、假手術(shù)組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。造模后1 周，手術(shù)組AQP-1、Caspase-3 mRNA 表達(dá)和Caspase-3 蛋白酶活性與假手術(shù)組及對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；而2、4、8 周時(shí)手術(shù)組以上指標(biāo)均明顯高于對(duì)照組和假手術(shù)組（P lt; 0.05），且隨時(shí)間延長(zhǎng)呈增高趨勢(shì)。AQP-1 mRNA 和Caspase-3 mRNA 表達(dá)成正相關(guān)（r=0.817，P=0.000），回歸方程為y=0.426 7x2+0.051 5x；AQP-1 mRNA 表達(dá)和Caspase-3 蛋白酶活性亦成正相關(guān)（r=0.945，P=0.000），回歸方程為y=15.423 0x+ 4 .392 8。 結(jié) 論 AQP-1 的表達(dá)上調(diào)可能與軟骨細(xì)胞凋亡相關(guān)，在OA 發(fā)病過(guò)程中AQP-1 表達(dá)的變化可能參與了OA 的發(fā)生、發(fā)展。
目的 研究p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38MAPK）在重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）大鼠肺組織中的表達(dá)情況，并初步探討p38MAPK與SAP肺毛細(xì)血管內(nèi)皮屏障損傷的關(guān)系。方法 將40只健康雄性SD大鼠隨機(jī)（隨機(jī)數(shù)字表法）分為假手術(shù)（SO）組和SAP組，SAP組又再分為3、6、12及24h4個(gè)時(shí)間點(diǎn)組，共5組，每組8只。采用胰膽管逆行注射5%牛磺膽酸鈉的方法建立SAP大鼠模型。采用HE染色方法觀察大鼠肺和胰腺組織的病理學(xué)改變； 采用ELISA法檢測(cè)血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）水平； 采用免疫組化染色方法檢測(cè)肺組織中磷酸化p38（p-p38）蛋白和水通道蛋白1（AQP1）的表達(dá)水平； 采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR法（real-time PCR）檢測(cè)肺組織中AQP1 mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果 SAP各時(shí)間點(diǎn)組大鼠肺組織充血水腫，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；胰腺組織可見(jiàn)大片壞死，部分腺葉結(jié)構(gòu)模糊甚至消失；血清TNF-α和IL-1β水平均較SO組高（P＜0.05）。SO組大鼠肺組織中p-p38蛋白僅有微量表達(dá)，而在SAP 3h組，p-p38蛋白的表達(dá)就明顯上調(diào)，在6 h時(shí)達(dá)高峰，24h時(shí)仍高于SO組（P＜0.05）。SAP各時(shí)間點(diǎn)組大鼠肺組織中AQP1 mRNA及其蛋白的表達(dá)水平均較SO組下降（P＜0.05），并隨著時(shí)間的推移而逐漸下降； SAP組大鼠AQP1 mRNA的表達(dá)與TNF-α、IL-1β及p-p38蛋白之間均存在負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.87，P＜0.05；r=-0.88，P＜0.05；r=-0.78，P＜0.05）。結(jié)論 肺組織中AQP1蛋白表達(dá)的下調(diào)是SAP肺毛細(xì)血管內(nèi)皮屏障損傷的重要原因之一，其可能與p38MAPK的激活及炎癥因子的過(guò)度釋放有關(guān)。