目的 比較羧甲基化葡聚糖（CMD）磁性納米顆粒與脂質(zhì)體LipofectamineTM 2000對(duì)人可溶性fms-樣酪氨酸激酶受體-1（sFlt-1）第2～4區(qū)基因片段的轉(zhuǎn)染率。方法 構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒編碼增強(qiáng)型綠色熒光蛋白質(zhì)粒（pcDNA3.1-EGFP）/sFlt-1（2～4），采用酶切、電泳及基因測(cè)序鑒定。將實(shí)驗(yàn)分為磁顆粒組、脂質(zhì)體組和未轉(zhuǎn)染對(duì)照組進(jìn)行。轉(zhuǎn)染后24、48 h，倒置相差熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞綠色熒光分布；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞綠色熒光表達(dá)率；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法和免疫蛋白印跡（Western blot）法檢測(cè)sFlt-1(2～4)mRNA和蛋白表達(dá)；噻唑藍(lán)（MTT）比色法觀測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，計(jì)算各組細(xì)胞相對(duì)增長(zhǎng)率（RGR）；Hoechst細(xì)胞核染色法觀察各組細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果 重組質(zhì)粒pcDNA3.1/sFlt-1（2～4）酶切產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠電泳時(shí)出現(xiàn)大小為915 堿基對(duì)的條帶。流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，磁顆粒組平均轉(zhuǎn)染率為45％，脂質(zhì)體組平均轉(zhuǎn)染率21％；二者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.541，P＜0.05）。RT-PCR和Western blot觀察發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染后48 h磁顆粒組細(xì)胞sFlt-1（2～4） mRNA和蛋白表達(dá)均明顯高于脂質(zhì)體組（t=2.454，2.398；P值均lt;0.05）。轉(zhuǎn)染后24、48 h，磁顆粒組RGR與未轉(zhuǎn)染對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.436，P＞0.05），脂質(zhì)體組RGR與未轉(zhuǎn)染對(duì)照組及磁顆粒組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.412，2.545，P值均lt;0.05）；磁顆粒組細(xì)胞凋亡率與未轉(zhuǎn)染對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.436，P＞0.05），與脂質(zhì)體組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.236，P＜0.05）。結(jié)論 CMD磁性顆粒較脂質(zhì)體LipofectamineTM 2000可獲得更高的sFlt-1(2～4) 基因片段轉(zhuǎn)染率。
目的 觀察可溶性fms-樣絡(luò)氨酸激酶受體-1（sFlt-1）基因胞外第2~3區(qū)和2~4區(qū)對(duì)缺氧、高糖環(huán)境下視網(wǎng)膜血管通透性及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白酶B（PI3K/Akt）之間信號(hào)通路的影響。方法 構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒編碼增強(qiáng)型綠色熒光蛋白質(zhì)粒（pcDNA3-1-EGFP）/sFlt-1（2~3）和pcDNA3-1-EGFP/sFlt-1（2~4），采用酶切、電泳及基因測(cè)序鑒定。將實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、缺氧組和高糖組進(jìn)行。以羧甲基化葡聚糖（CMD）納米磁顆粒為基因載體，分別攜帶兩種重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染缺氧、高糖條件下培養(yǎng)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）。采用分光光度計(jì)檢測(cè)各組兔視網(wǎng)膜血管對(duì)伊凡思藍(lán)（EB）染料的滲漏量。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和免疫蛋白印跡（Western blot）法分別檢測(cè)各組細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路下游特異性磷酸化激酶Akt（p-Akt）mRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果 缺氧組和高糖組注射轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清液后，視網(wǎng)膜血管EB滲漏量較正常對(duì)照組明顯增加（t=2.476，2.515；P值均lt;0.01）。缺氧組和高糖組轉(zhuǎn)染了pcDNA3-1-EGFP/sFlt-1(2~3)和pcDNA3-1-EGFP/sFlt-1(2~4)后，視網(wǎng)膜血管EB滲漏量較未轉(zhuǎn)染明顯降低（t=2.598，2.679，2.386，2.732；P值均lt;0.01）。缺氧組、高糖組HUVEC p-Akt mRNA表達(dá)較正常對(duì)照組明顯上調(diào)（t=2.612，2.545；P值均lt;0.01），轉(zhuǎn)染pcDNA3-1-EGFP/sFlt-1(2~3)和pcDNA3-1-EGFP/sFlt-1(2~4)后明顯下調(diào)（t=2.512，2.189，2.372，2.687；P值均lt;0.01）。缺氧組和高糖組HUVEC p-Akt蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組明顯上調(diào)（t=2.376，2.712；P值均lt;0.01），轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-EGFP/sFlt-1(2~3)和pcDNA3-1-EGFP/sFlt-1(2~4)后明顯下調(diào)（t=2.259，2.391，2.399，2.413；P值均lt;0.01）。結(jié)論 sFlt-1受體胞外第2~3區(qū)和2~4區(qū)均可抑制缺氧、高糖環(huán)境下的視網(wǎng)膜血管通透性增高和PI3K/Akt通路的信號(hào)傳導(dǎo)。