目的觀察嚴重增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變(PDR)患者玻璃體腔注射雷珠單抗后玻璃體細胞因子的變化。 方法臨床檢查確診的嚴重PDR患者80例80只眼納入研究。依照非主動隨機方法將患眼分為單純玻璃體切割手術組(A組)、玻璃體腔注射雷珠單抗聯(lián)合玻璃體切割手術組(B組),均為40只眼。兩組間性別(χ2=0.05)、年齡(t=0.59)、糖尿病病程(t=0.36)、HbA1c(t=0.13)比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。A組平均眼壓,B組注藥前、玻璃體切割手術前平均眼壓比較,差異無統(tǒng)計學意義(F=0.81,P>0.05)。A組患眼行玻璃體切割手術時抽取玻璃體液0.4 ml。B組患眼玻璃體腔注射雷珠單抗0.05 ml(含雷珠單抗0.5 mg);注藥后7 d行玻璃體切割手術,抽取玻璃體液0.4 ml。雙抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法測定玻璃體血管內皮生長因子(VEGF)、白介素(IL)-6、IL-8、細胞間黏附分子-1(ICAM-1)、結締組織生長因子(CTGF)濃度。 結果玻璃體VEGF、ICAM-1濃度B組分別為(10.70±3.60)、(224.64±90.32)pg/L,A組分別為(72.38±23.59)、(665.61±203.34)pg/L。兩組玻璃體VEGF、ICAM-1濃度比較,差異有統(tǒng)計學意義(t=16.34、12.53,P<0.001);玻璃體IL-6、IL-8濃度B組分為(210.64±80.27)、(156.00±57.74)pg/L,A組分別為(45.78±33.82)、(41.07±13.82)pg/L。兩組玻璃體IL-6、IL-8濃度比較,差異有統(tǒng)計學意義(t=11.97、12.24,P<0.001)。A、B組玻璃體CTGF濃度比較,差異無統(tǒng)計學意義(t=1.39,P>0.05)。B組CTGF/VEGF較A組升高,差異有統(tǒng)計學意義(t=14.75,P<0.001)。 結論玻璃體腔注射雷珠單抗1周后VEGF、ICAM-1明顯下降;IL-6、IL-8明顯升高;CTGF濃度無明顯變化,但CTGF/VEGF明顯升高。
體外分離培養(yǎng)豬滑膜源性MSCs（synovium-derived MSCs，SMSCs），探討其在體外多向分化潛能。 方法 2 月齡長楓雜交豬3 頭，雌雄不限，體重8 ～ 10 kg。取豬膝關節(jié)滑膜組織分離SMSCs 并行原代及傳代培養(yǎng)，待第3 代SMSCs 長滿培養(yǎng)皿后，吸去基礎培養(yǎng)液，分別加入特定培養(yǎng)液進行成軟骨、成骨、成脂誘導分化，作為實驗組；以基礎培養(yǎng)液培養(yǎng)作為對照組。成軟骨誘導21 d 后行甲苯胺藍染色、免疫組織化學染色和實時熒光定量 PCR 檢測；成骨誘導10 d 后行ALP 染色檢測，21 d 后行茜素紅染色檢測；成脂誘導21 d 后行油紅O 染色檢測。 結果 SMSCs 培養(yǎng)24 h后細胞形態(tài)細長或呈多角形；48 h 后細胞數(shù)量增多；72 h 后可見大量紡錘形細胞，其間散在分布少許小圓形細胞。實驗組成軟骨誘導21 d 后甲苯胺藍染色呈陽性，細胞外有蛋白多糖（Aggrecan）形成；免疫組織化學染色示特異軟骨基質Col Ⅱ表達；實時熒光定量PCR 檢測示Col Ⅱ A1、Aggrecan、SOX9 mRNA 表達量與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。成骨誘導10 d 后ALP 染色陽性，21d 后茜素紅染色陽性，有鈣結節(jié)形成。成脂誘導21 d 后油紅O 染色示細胞內有脂滴形成。對照組除ALP 染色觀察呈弱陽性外，余染色均呈陰性。 結論 豬膝關節(jié)滑膜組織可分離獲取SMSCs，其在體外具有向成軟骨、成骨、成脂多向分化潛能，有望成為組織工程種子細胞來源。
構建含人IL-1 受體拮抗蛋白（IL-1 receptor antagonist，IL-1Ra）逆轉錄病毒表達載體（PLXRNIL-1Ra），體外轉染人骨關節(jié)炎（osteoarthritis，OA）軟骨細胞，研究其相關特性。 方法 利用細菌內同源重組技術快速構建PLXRN-IL-1Ra 逆轉錄病毒重組質粒，經(jīng)測序及酶切鑒定正確后轉染PT67 細胞，包裝成為重組PLXRN-IL-1Ra 逆轉錄病毒，并使用小鼠腎成纖維細胞系NIH/3T3 對病毒進行滴度測定。實驗分為3 組：未轉染組（A 組）、PLXRN 空質粒轉染組（B 組）、PLXRN-IL-1Ra 轉染組（C 組），病毒感染人OA 軟骨細胞后，RT-PCR 檢測細胞內IL-1Ra 基因的轉錄和表達；ELISA 法檢測細胞培養(yǎng)上清液中人IL-1Ra 蛋白表達。 結果 酶切鑒定及基因測序證實重組逆轉錄病毒質粒中含有人IL-1Ra cDNA，測定包裝的病毒滴度為3 × 104 CFU/mL。原代軟骨細胞體外培養(yǎng)呈多角形或梭形，甲苯胺藍染色見細胞內有紫色異染顆粒。RT-PCR 結果顯示在C 組出現(xiàn)311 bp 人IL-1Ra mRNA 片段，A、B 組未見人IL-1Ra mRNA 的表達帶，GAPDH 在各組均有表達。ELISA 檢測發(fā)現(xiàn)C 組細胞上清有一定量的人IL-1Ra 表達，蛋白濃度為（60.47 ± 15.13）ng/L，A 組和B 組均無人IL-1Ra 表達。 結論 構建的IL-1Ra 逆轉錄病毒表達載體成功地感染人OA 軟骨細胞，并在體外獲得穩(wěn)定表達，為將表達人IL-1Ra 基因的人OA 軟骨細胞用于OA 基因治療提供了實驗依據(jù)。