目的 評價載萬古霉素的注射型硼酸鹽殼聚糖復合物（vancomycin-loaded borate glass/chitosan composite，VBC）的體內(nèi)、外生物活性及治療骨髓炎效果，探討其生物降解及抗生素緩釋規(guī)律，為臨床應用奠定基礎。 方法 VBC 固相由硼酸鹽玻璃及萬古霉素粉劑組成，液相由殼聚糖、檸檬酸和葡萄糖按照質(zhì)量比 1 ∶ 10 ∶ 20 比例混勻制成，固相及液相按質(zhì)量比2 ∶ 1 比例混合凝固獲得VBC。硫酸鈣粉劑代替硼酸鹽玻璃，無菌生理鹽水代替殼聚糖溶液，同法制備載藥硫酸鈣（vancomycin-loaded calcium sulfate，VCS），作為對照。采用高效液相色譜法檢測VBC 及VCS 抗生素釋放率，抗生素雙重管稀釋法測定釋放抗生素的最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）；掃描電鏡觀察浸泡前及D-Hank’s 溶液中浸泡2、4、8、16、40 d 的VBC、VCS 降解情況，X 射線衍射儀分析VBC 浸泡后40 d 物相組成。取33 只成年健康新西蘭大白兔，雌雄不限，體重2.25 ～ 3.10 kg；采用Norden 方法制備右脛骨近端骨髓炎模型。4 周后將28 只骨髓炎模型制備成功的大白兔隨機分成4 組：A 組（n=8）單純清創(chuàng)，B、C 組（n=8）清創(chuàng)后注入VCS 及VBC 至缺損處，D 組（n=4）不作任何處理。術后2 個月攝X 線片并行Norden 評分，取缺損處標本行組織學觀察。 結(jié)果 VBC 釋藥過程持續(xù)30 d，藥物緩釋前8 d 釋放率達75%，最終釋放率達90% 以上；VCS 釋藥過程僅持續(xù)16 d。VBC、VCS 的MIC 均為2 μg/mL。掃描電鏡觀察，VCS 浸泡前為光滑玻璃晶體表面，4 d 后已大部分降解；VBC 浸泡前具有典型光滑玻璃表面，8 d 后結(jié)合相的玻璃部分溶化，40 d 后材料表面幾乎完全被生成的白色顆粒狀沉淀物覆蓋，材料結(jié)合疏松。VBC 浸泡40 dX 線衍射分析反應生成物主要物相為羥基磷灰石。術后2 個月X 線片及組織學觀察示C 組骨髓炎癥狀均消失，優(yōu)于其余各組。A、B、C、D 組X 線片評分分別為（3.50 ± 0.63）、（2.29 ± 0.39）、（2.00 ± 0.41）、（4.25 ± 0.64）分，Smeltzer 評分分別為（6.00 ± 0.89）、（4.00 ± 0.82）、（3.57 ± 0.98）、（7.25 ± 0.50）分。其中D 組評分顯著高于A、B、C 組，A 組顯著高于B、C 組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；B 組評分高于C 組，但差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 VBC 具有藥物緩釋性及成骨性能，有望成為治療骨髓炎的理想材料。
目的 骨組織工程所使用的支架材料能否快速、有效地血管化是骨修復的關鍵。研究增強型生物活性玻璃/ 膠原復合材料對血管化的協(xié)同和促進作用，為構(gòu)建血管化組織工程骨修復骨缺損尋找適宜的支架材料。 方法 體外分離獲取人臍靜脈內(nèi)皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs），并通過血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）與CD34 抗原鑒定，取第1 代細胞用于實驗。將細胞接種于增強型生物活性玻璃/ 膠原復合材料上，掃描電鏡觀察細胞黏附情況。取細胞接種于增強型生物活性玻璃/ 膠原復合材料作為實驗組，等量細胞直接接種于培養(yǎng)板常規(guī)培養(yǎng)作為對照組，采用alarmarBlue 法動態(tài)檢測細胞增殖率，實時熒光定量PCR 檢測內(nèi)皮細胞相關基因VEGF、血管內(nèi)皮生長因子受體1（fms-related tyrosine kinase 1，F(xiàn)lt-1）、血管內(nèi)皮生長因子受體2（kinase insert domain receptor，Kdr）的mRNA 表達。取SD 大鼠6 只，將支架材料包埋于大鼠股內(nèi)側(cè)皮下，實驗組采用增強型生物活性玻璃/ 膠原復合材料、中央軸向植入血管束，對照組采用非增強型生物活性玻璃/ 膠原復合材料，分別于植入5、10 d 取出，行冰凍切片并HE 染色動態(tài)觀察支架材料內(nèi)部的血管化狀態(tài)。 結(jié)果 分離的細胞通過形態(tài)學及vWF、CD34 免疫熒光鑒定為HU VECs。掃描電鏡示HUVECs 在支架材料上黏附較好。HUVECs 在實驗組支架材料上增殖明顯，在第3 天后細胞增殖率開始高于對照組，11 d 達到增殖平臺期時細胞數(shù)仍多于對照組（P lt; 0.05）。實時熒光定量PCR 檢測示，培養(yǎng)3 d 實驗組VEGF、Flt-1、Kdr 的mRNA 表達均顯著高于對照組（P lt; 0.05）。包埋大鼠皮下實驗可見，實驗組5、10 d 時植入的血管仍通暢，其周圍新生血管隨時間延長而增多，材料周緣可見宿主血管浸潤生長，但新生血管稀疏；對照組僅有纖維組織生長，10 d 時材料已大部分降解，組織難以長入。 結(jié)論 增強型生物活性玻璃/ 膠原復合材料在大鼠體內(nèi)外可促進血管化，可能適于作為構(gòu)建血管化組織工程骨的支架材料。
（正文）由“組織工程”發(fā)展起來的“再生醫(yī)學”概念已有10 余年了，經(jīng)過10 余年的發(fā)展歷程，再生醫(yī)學已經(jīng)取得了很多進展，不僅弄清了不少科學問題，為后續(xù)研究創(chuàng)造了條件，同時也為臨床應用提供了依據(jù)。
目的 探討負載rhBMP-2 的CPC 活性人工骨修復骨缺損的臨床應用，評價其臨床使用效果和安全性。 方法 2006 年6 月－ 2007 年9 月，采用負載rhBMP-2 的CPC（rhBMP-2/CPC 組）和單純CPC（對照組）修復骨缺損112 例，骨缺損范圍為1 cm × 1 cm × 1 cm～ 4 cm × 3 cm × 3 cm。其中對照組63 例，男31 例，女32 例；年齡17 ～ 70 歲，平均47.4 歲。骨缺損部位：跟骨19 例，脛骨平臺20 例，肱骨近端8 例，橈骨遠端9 例，胸腰椎7 例。rhBMP-2/CPC 組49 例，男31 例，女18 例；年齡16 ～ 68 歲，平均45.6 歲。骨缺損部位：跟骨11 例，脛骨平臺16 例，肱骨近端7 例，橈骨遠端2 例，脛骨遠端2 例，胸腰椎11 例。術中采用負載rhBMP-2/CPC（2 ～ 5 g）或單純CPC（2 ～ 50 g）填充骨缺損。 結(jié)果 術后108 例傷口Ⅰ期愈合；術后2 周對照組1 例及rhBMP-2/CPC 組3 例傷口有淡黃色清亮稀薄分泌物滲出，經(jīng)換藥及激素治療后愈合。所有患者未見毒性反應，無皮疹或高熱，肝腎功能、血、尿常規(guī)及C 反應蛋白均正常。112 例均獲隨訪，隨訪時間12 ～ 24 個月，平均13.2 個月。隨訪期間未發(fā)生骨髓炎，無再骨折，無明顯骨缺損修復后再塌陷，無鋼板及螺釘松動、斷裂等并發(fā)癥，脊柱手術的椎體前緣無高度不足發(fā)生。兩組術后3 個月骨折均達骨性愈合，無延遲愈合或骨不連發(fā)生?；贾顒忧闆r良好，屈伸功能達正常活動水平。 結(jié)論 負載rhBMP-2 的CPC 活性人工骨修復骨缺損安全、有效，是一種理想的骨缺損修復材料。
“組織工程”概念提出至今已有20 年了?；仡?0年發(fā)展進程，在種子細胞、三維支架材料、生物活性因子、組織構(gòu)建、體內(nèi)植入等方面已取得很大進展，并有一些臨床應用的實例證明組織工程的研究路線是正確的，展現(xiàn)了良好的產(chǎn)業(yè)化前景……
目的 探討新型生物活性玻璃（bioactive glass，BG）復合自體紅骨髓移植修復良性骨腫瘤切除及搔刮術后骨缺損的臨床效果。 方法 2004 年1 月－ 2007 年5 月，收治良性骨腫瘤患者34 例。其中男21 例，女13 例；年齡8 ～ 56 歲，平均25.6 歲。病程2 周～ 4 個月。其中單體骨囊腫14 例，骨纖維結(jié)構(gòu)不良6 例，骨樣骨瘤3 例，非骨化性纖維瘤4 例，內(nèi)生軟骨瘤2 例，骨嗜酸細胞性肉芽腫2 例，骨巨細胞瘤3 例。腫瘤范圍為2.0 cm × 1.5 cm × 1.0 cm ～ 9.0 cm ×3.0 cm × 2.5 cm，骨缺損范圍為3.0 cm × 2.0 cm × 1.5 cm ～ 11.0 cm × 3.5 cm × 3.0 cm。徹底清除病灶，殘腔滅活處理，將5 ～ 20 g 條塊狀BG 復合20 ～ 60 mL（平均40 mL）自體骨髓填充骨缺損。6 例合并移位的病理性骨折結(jié)合鋼板或髓內(nèi)釘內(nèi)固定。術后觀察全身及切口局部反應，定期復查X 線片，觀察骨質(zhì)生長情況。 結(jié)果 術后患者均無傷口滲液、結(jié)晶析出、周緣皮疹搔癢等免疫排斥反應發(fā)生，傷口均Ⅰ期愈合。34 例均獲隨訪，隨訪時間1 ～ 4 年，平均24.6 個月。無再次骨折、骨腫瘤復發(fā)及明顯并發(fā)癥發(fā)生。術后平均16 周，下肢骨腫瘤患者棄拐行走，上肢骨腫瘤患者能持物和正常學習工作，并可行輕體力勞動。X 線片觀察：術后1 個月可見BG 替代骨和宿主骨接觸界面變模糊；術后2 個月，替代骨影開始變淡，骨缺損處有部分新骨形成；術后4 個月骨缺損處密度增高，替代骨與宿主骨融合；術后6 ～ 10 個月，BG 均被新生骨組織替代，骨皮質(zhì)增厚，骨髓腔改建并再通。 結(jié)論 BG 具有良好的骨傳導性及骨誘導性，BG 復合自體紅骨髓移植修復良性骨腫瘤術后骨缺損創(chuàng)傷小，并發(fā)癥少，經(jīng)骨替代后可完成骨修復。
目的 觀察生物活性玻璃和透明質(zhì)酸鈉結(jié)合修復材料(康倍)治療燒傷創(chuàng)面的療效。方法 2006年3月～9月，收治燒傷患者20例，其中男16例，女4例；年齡18~58歲，平均40歲。創(chuàng)面類型：深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面7例，Ⅲ度燒傷殘余肉芽創(chuàng)面9例，植皮后皮間隙4例。按隨機、同體對照原則，試驗組與對照組各20個創(chuàng)面，創(chuàng)面范圍2.0 cm×1.5 cm~40.0 cm×20.0 cm。試驗組創(chuàng)面以康倍換藥，對照組以空白膏劑換藥。分別于用藥后1、3、6、11、16及21 d觀察各創(chuàng)面的肉芽生長和愈合情況，并檢查用藥前后肝、腎功能及血常規(guī)。結(jié)果 試驗組創(chuàng)面用藥后11 d愈合3例，16 d愈合4例，21 d愈合4例；對照組創(chuàng)面觀察期無完全愈合者。觀察期內(nèi)愈合面積達2/3以上者試驗組18例，對照組為1例。按照創(chuàng)面愈合評價標準，試驗組顯效18例，有效1例，可疑有效1例，總有效率為95%；對照組顯效1例，有效9例，可疑有效10例，總有效率為50%，試驗組療效明顯優(yōu)于對照組(Plt;0.01)?；颊咧委熐昂笱Ｒ?guī)及肝、腎功能等指標無明顯異常改變。結(jié)論 康倍具有良好促進肉芽生長、加快創(chuàng)面愈合的作用。
目的 探討兩步冷凍法不同冷凍溫度對周圍神經(jīng)雪旺細胞（Schwann cell， SC）生物活性的影響。方法 雌性SD大鼠80只，切取雙側(cè)坐骨神經(jīng)2 cm，隨機分為8組，每組10只20條坐骨神經(jīng)。1組為新鮮對照組，不作任何處理；另7組為實驗組，采用兩步冷凍法分別降溫至-20、-30、-40、-50、-60、-70和-80 ℃，保存2 h后轉(zhuǎn)入液氮中(-196℃)保存48 h，取出后在37℃水浴箱中快速復溫1 min，消化收集各組SC，經(jīng)CalceimAM熒光染色，作流式細胞儀分析，求出各組細胞平均熒光強度，再經(jīng)共聚焦顯微鏡直接觀察SC熒光強度，進一步判斷SC的生物活性。結(jié)果 經(jīng)流式細胞儀檢測各組SC熒光強度為新鮮對照組242.522 0±9.568 4，-20 ℃組168.677 0±10.207 0，-30 ℃組214.992 0±8.329 1，-40 ℃組235.526 0±9.280 5，-50 ℃組222.434 0±8.515 5，-60 ℃組217.409 0±9.515 7，-70 ℃組132.376 0±13.459 7，-80 ℃組108.1320±16.033 1；-40℃組熒光強度較其它實驗組強，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。共聚焦顯微鏡觀察各組SC生物活性，并作熒光強度分析：新鮮對照組143.700 0±5.567 8，-20 ℃組119.700 0±5.165 1，-30 ℃組121.300 0±4.347 4，-40 ℃組139.700 0±5.012 2，-50 ℃組121.000 0±4.546 1，-60 ℃組118.400 0±4.926 1，-70 ℃組81.200 0±5.116 4，-80 ℃組79.000 0±5.716 4；新鮮對照組SC生物活性較各實驗組強，-40℃組SC生物活性較其它實驗組強，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。結(jié)論 兩步冷凍法均能較好保存SC生物活性，以-40 ℃組SC生物活性最好。
目的 探討新型生物活性陶瓷復合材料成骨效應，為人工骨替代材料臨床應用提供依據(jù)。方法 小鼠96只，隨機分為4組，每組24只。采用具有誘導活性的骨形成蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）分別與羥基磷灰石（hydroxyapatite，HA）、磷酸三鈣（tricalcium phosphate，TCP）、膠原復合羥基磷灰石（collagen HA，CHA）及氟化羥基磷灰石（fluoridated HA，F(xiàn)HA）復合，將4種復合材料（HA/BMP，TCP/BMP，CHA/BMP及FHA/BMP）分別植入4組小鼠左側(cè)股部肌肉內(nèi)為實驗側(cè)，右側(cè)分別植入HA、TCP、CHA及脫鈣牙基質(zhì)（decalcified dentin matrix，DDM）作為對照，在1、3、5及7周取材作大體觀察、組織形態(tài)學、掃描電鏡觀察及生化測定。結(jié)果 各組實驗側(cè)及第4組對照側(cè)植入后1周軟骨形成，第1～3組對照側(cè)為纖維結(jié)締組織；3周時各組實驗側(cè)均有較多的成熟骨組織，組織堿性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色均為陽性。各組對照側(cè)材料被結(jié)締組織包囊，ALP染色陰性，未見骨組織形成。各組實驗側(cè)材料ALP活性及磷（phosphrus，P）檢測水平明顯高于相應的對照側(cè)材料，實驗側(cè)與對照側(cè)比較具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而TCP/BMP復合材料明顯高于另3種復合材料，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。5、7周各實驗側(cè)及對照側(cè)骨形成，組織ALP反應、ALP及P檢測水平與3周結(jié)果基本一致。結(jié)論 BMP復合HA、TCP、CHA及FHA 4種材料都具有誘導成骨活性的作用，其中TCP/BMP復合材料最明顯，是一種較理想的人體硬組織替代材料。
將成骨細胞與生物活性陶瓷復合培養(yǎng)，賦于材料以“生命”活性，可能會產(chǎn)生一種新型人工材料。為研究成骨細胞與生物活性陶瓷間的關系，選用新西蘭大白兔，取脛骨外骨膜組織，經(jīng)胰蛋白酶及膠原酶分步消化，分離出成骨細胞，用ＲＰＭＩ－１６４０培養(yǎng)液傳代培養(yǎng)１３代。通過對培養(yǎng)細胞堿性磷酸酶活性、體外礦化能力測定以及細胞超微結(jié)構(gòu)觀察，證實其為典型的成骨細胞。將培養(yǎng)細胞分別在三種生物活性陶瓷，包括生物活性玻璃陶瓷（ＢＧＣ）、羥基磷灰石（ＨＡ）和雙相羥基磷灰石（ＨＡ／ＴＣＰ）中培養(yǎng)４８小時后，利用掃描電鏡，３Ｈ－ＴｄＲ，ＸＲＤ，ＲＳ和ＥＤＸＡ等進行綜合評價。結(jié)果表明：ＨＡ／ＴＣＰ上培養(yǎng)成骨細胞較另兩種生物材料上顯示出更好的類成骨細胞形態(tài)和更高的細胞分化率。對成骨細胞與生物活性陶瓷反應的機制進行了討論，并分析了影響細胞生長的材料因素，其結(jié)果為深入研究有生命的材料提供了依據(jù)。