為了降低移植物免疫原性，誘導(dǎo)免疫耐受，本實驗采用單抗加補(bǔ)體方法消除大鼠甲狀旁腺移植物中的主要組織相容性Ⅰ類抗原(Ⅰa)陽性細(xì)胞，將其移植到同種受體腎包膜下，觀察移植物平均存活時間。結(jié)果顯示：處理組移植物平均存活時間為60天，對照組為14天，兩者相比有極顯著性差異(Ｐ＜0.01)。說明消除Ⅰa抗原陽性細(xì)胞可顯著延長大鼠甲狀旁腺同種異體移植物存活時間。
為進(jìn)一步了解異種移植間免疫排斥反應(yīng)的抗體特性，采用NIH小鼠脾細(xì)胞免疫SD大鼠，制備大鼠抗小鼠組織相容性抗原抗血清，經(jīng)辛酸沉淀、羥基磷灰石層析技術(shù)純化抗體。結(jié)果：制備的大鼠抗小鼠組織相容性抗原抗血清具有較高效價(＞1∶640)，辛酸、羥基磷灰石二步法純化的抗體具有純度好、收獲率高、能保留免疫原性、條件溫和等特點。表明此法是制備各種抗組織相容性抗原抗體的有效方法。
脫細(xì)胞組織工程支架具有與原生組織相似的結(jié)構(gòu)體系和機(jī)械性能，具有良好的生物相容性、有利于細(xì)胞的粘附生長、誘導(dǎo)血管再生，且無免疫原性。而京尼平（Genipin）具有抗炎、抗血栓、抗氧化性，抑制血管及內(nèi)皮細(xì)胞炎性活化，并能有效提高生物支架機(jī)械性能、抑制炎癥并減小降解率。通過京尼平交聯(lián)脫細(xì)胞基質(zhì)能進(jìn)一步改善組織工程基質(zhì)的相關(guān)性能，有助于促進(jìn)組織工程更好地應(yīng)用于胸心外科臨床實踐?，F(xiàn)對京尼平在胸心外科組織工程領(lǐng)域中的研究現(xiàn)狀、展望和可能的前景進(jìn)行綜述。
目的 評價環(huán)氧化合物（PC）交聯(lián)去細(xì)胞牛頸靜脈帶瓣管道(BJVC)的血液相容性，探討其在心血管外科和組織工程中的應(yīng)用前景。 方法 選取本地健康雜種犬20只，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為實驗組（n=10）和對照組(n=10)。實驗組用PC交聯(lián)的去細(xì)胞BJVC，對照組采用戊二醛（GA）交聯(lián)的BJVC。運用兔血進(jìn)行體外溶血實驗計算溶血率，繪制時間吸光度曲線；采用人全血測定D二聚體和補(bǔ)體C3a des Arg水平評價其體外血液相容性。采用PC和GA制備的BJVC重建犬右心室肺動脈連接，兩組犬飼養(yǎng)10個月后，觀察有無血栓形成評價其體內(nèi)血液相容性。 結(jié)果 實驗組溶血率（0.23%）低于對照組（0.35%），符合醫(yī)用生物材料的國家標(biāo)準(zhǔn)（lt;5%）。實驗組的凝血時間曲線較對照組平緩。實驗組D二聚體水平低于對照組，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（0.10±0.01 μg/ml vs. 0.12±0.02 μg/ml，t=3.277，P=0.004），但均在正常范圍內(nèi)。實驗組補(bǔ)體C3a des Arg水平低于對照組，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（0.74±0.09 μg/ml vs. 1.02±0.19 μg/ml，t=4.183，P=0.001）。犬右心室肺動脈連接重建術(shù)后10個月每組各有8只生存，各有2只死于心室顫動。對照組3例有血栓形成，實驗組無血栓形成。 結(jié)論 與GA交聯(lián)相比，PC交聯(lián)的BJVC體外、體內(nèi)血液相容性均具優(yōu)勢，臨床應(yīng)用前景良好。
摘要： 目的 探討主要組織相容性復(fù)合體（MHC）基因胸腺轉(zhuǎn)移減輕異種移植排斥反應(yīng)的可行性。 方法 通過分子克隆技術(shù)，提取、擴(kuò)增供體小鼠（Balb／c）的H-2Kd基因（小鼠MHC-Ⅰ類基因）, 構(gòu)建表達(dá)型載體質(zhì)粒pCI-H-2Kd。受體選用20只SD大鼠，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為實驗組和對照組，每組10只。采用超聲引導(dǎo)下穿刺和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法，實驗組受體胸腺注射pCI-H-2Kd；對照組受體胸腺注射空pCI-neo載體質(zhì)粒。兩組隨即均行小鼠→大鼠耳后心肌移植，觀察異種移植排斥反應(yīng)。 結(jié)果 實驗組異種移植心肌的存活時間較對照組明顯延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(14.61±2.98 d vs. 6.40±1.58 d，t=-7.619,Plt;0.05)；移植心肌病理切片顯示：對照組有較多淋巴細(xì)胞浸潤，移植心肌大部分壞死；實驗組無淋巴細(xì)胞浸潤，尚有較多心肌存活；混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)：實驗組對供體小鼠反應(yīng)明顯低于對照組（t=4.758, P=0.000）；流式細(xì)胞學(xué)檢測：大鼠胸腺細(xì)胞表面表達(dá)異種MHC分子，轉(zhuǎn)染效率達(dá)607％。 結(jié)論 MHC基因胸腺轉(zhuǎn)移可以減輕異種移植排斥反應(yīng)，為異種移植免疫耐受的實現(xiàn)提供理論和實驗依據(jù)。
目的探討新型多孔活性骨水泥（porous bioactive bone cement，PBC）在體內(nèi)的生物力學(xué)特性，觀察材料降解及新骨形成情況。 方法將聚甲基丙烯酸甲酯（polymethylmethacrylate，PMMA）粉末、生物玻璃粉末和殼聚糖顆粒按照不同質(zhì)量百分比（W/W，%）比例配制成3種PBC：PBCⅠ（50︰40︰10）、PBCⅡ（40︰50︰10）和PBCⅢ（30︰60︰10）。32只10月齡新西蘭大白兔，雌雄不限，體重4.0～4.5 kg；制備直徑4 mm、深10 mm的雙側(cè)股骨髁部缺損模型。動物模型隨機(jī)分為4組（n=8），分別于雙側(cè)缺損處植入單純PMMA骨水泥（A組）、PBCⅠ（B組）、PBCⅡ（C組）和PBC Ⅲ（D組）。術(shù)后觀察實驗動物一般情況，1周時行膝關(guān)節(jié)正側(cè)位X線片檢查，3、6個月取標(biāo)本行生物力學(xué)測試和Van-Gieson染色組織學(xué)觀察；取未植入的對應(yīng)骨水泥行生物力學(xué)測試，作為對照。 結(jié)果實驗動物均存活至實驗完成。1周X線片檢查示各組植入骨水泥位置良好。生物力學(xué)測試示，植入前及術(shù)后3、6個月，C、D組壓縮強(qiáng)度和彈性模量均較A組明顯下降（P lt; 0.05）；B組壓縮強(qiáng)度及3、6個月彈性模量較A組明顯下降（P lt; 0.05）；C、D組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。植入前及術(shù)后3個月，C、D組兩指標(biāo)均較B組明顯下降（P lt; 0.05）；6個月，C組壓縮強(qiáng)度和D組彈性模量較B組明顯下降（P lt; 0.05）。與植入前相比，B、C、D組術(shù)后3、6個月兩指標(biāo)均顯著下降（P lt; 0.05），A組無顯著變化（P gt; 0.05）。組織學(xué)觀察示，術(shù)后3個月，A組纖維結(jié)締組織環(huán)繞在PMMA和骨組織之間；B、C、D組殼聚糖顆粒有不同程度降解，其中D組降解最明顯；6個月，A組較前無明顯變化；B、C、D組可見骨組織沿殼聚糖降解后形成的空隙向骨水泥內(nèi)部生長，C、D組骨生長優(yōu)于B組。定量分析顯示，A、B、C、D組骨組織含量百分比呈逐漸上升趨勢，且各組內(nèi)術(shù)后6個月顯著高于3個月。 結(jié)論以PMMA粉末、生物玻璃粉末和殼聚糖顆粒按照質(zhì)量百分比（W/W，%）40︰50︰10及30︰60︰10比例制備的PBC較單純PMMA骨水泥具有更好的生物相容性及生物力學(xué)特性。
目的 改進(jìn)雪旺細(xì)胞（Schwann cells，SCs）原代培養(yǎng)方法，以獲得大量高純度SCs；研究豬小腸黏膜下層（small intestinal submucosa，SIS）與SCs的生物相容性；通過復(fù)合SCs，使SIS負(fù)載NGF。 方法取2～3日齡SD乳鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng)，以胰蛋白酶、Ⅱ型膠原酶分步消化，差速貼壁20 min，G418處理48 h，含2.5%FBS的H-DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)；MTT法檢測SCs增殖情況，抗S-100免疫熒光染色檢測SCs純度。將第3代SCs和SIS復(fù)合培養(yǎng)，行HE染色和掃描電鏡觀察兩者復(fù)合生長情況，復(fù)合培養(yǎng)1、2、3、4、5、7 d ELISA法檢測培養(yǎng)上清中NGF含量。復(fù)合培養(yǎng)3、5、7、10、13、15 d后反復(fù)凍融脫細(xì)胞處理，ELISA法檢測脫細(xì)胞后SIS中NGF含量。 結(jié)果純化后的SCs純度達(dá)98%以上；MTT檢測示SCs傳代后3 d進(jìn)入對數(shù)生長期，7 d后進(jìn)入平臺期。HE染色和掃描電鏡觀察均顯示SCs在SIS上黏附良好，細(xì)胞形態(tài)呈紡錘形，有明顯突起，分泌較多細(xì)胞外基質(zhì)。ELISA檢測發(fā)現(xiàn)SCs與SIS復(fù)合培養(yǎng)后，培養(yǎng)上清中的NGF含量隨時間延長而逐漸升高，與同時間點對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。通過與SCs復(fù)合后反復(fù)凍融脫細(xì)胞，SIS中NGF含量在培養(yǎng)10 d達(dá)峰值（414.29 ± 20.87）pg/cm2，顯著高于未復(fù)合細(xì)胞的單純SIS材料中NGF含量（4.92 ± 2.06） pg/ cm2，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論聯(lián)合雙酶消化、差速貼壁、G418處理、低濃度酶消化和低濃度血清培養(yǎng)，可在較短時間內(nèi)獲得大量高純度SCs。SCs與SIS復(fù)合生長相容性好，不影響SCs的NGF分泌。通過與SCs的復(fù)合、反復(fù)凍融脫細(xì)胞后，SIS中負(fù)載了大量NGF，有望成為良好的神經(jīng)修復(fù)材料。
目的研究表面含硅微弧氧化（micro-arc oxidation，MAO）涂層鎂合金ZK60體外與成骨細(xì)胞的生物相容性。 方法掃描電鏡觀察表面含硅MAO涂層鎂合金ZK60的表面形貌，并用能譜分析儀檢測涂層元素組成。實驗分為表面含硅MAO涂層鎂合金ZK60組（A組）、無涂層鎂合金ZK60組（B組）、醫(yī)用鈦合金組（C組）及空白對照組（D組）。取A、B、C組對應(yīng)材料按照ISO 10993-12標(biāo)準(zhǔn)（試樣表面積/浸體介質(zhì)= 1.25 cm2/mL）分別制備材料浸提液并培養(yǎng)小鼠前成骨細(xì)胞MC3T3-El，D組采用含10%FBS的α-MEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，MTT法檢測細(xì)胞增殖活力，并檢測成骨細(xì)胞ALP表達(dá)活性。掃描電鏡觀察A、B、C組材料表面細(xì)胞黏附形態(tài)，檢測涂層表面的蛋白吸附能力，采用DAPI觀察細(xì)胞早期黏附情況，鈣黃綠素/乙錠均二聚物1（calcein-AM/ethidium homodimer 1，calcein- AM/ EthD- 1）雙重染色觀察細(xì)胞生長狀態(tài)。 結(jié)果掃描電鏡下見表面含硅MAO涂層鎂合金ZK60呈粗糙、多孔表面形態(tài)，涂層的主要組成元素為Mg、O和Si。材料浸提液培養(yǎng)后各組細(xì)胞輪廓清晰、形態(tài)良好，其中A組細(xì)胞伸展性更好。培養(yǎng)5 d時，MTT檢測示A組細(xì)胞增殖活力明顯高于其他組（P lt; 0.05）。掃描電鏡觀察見A、C組材料表面細(xì)胞伸展性良好，優(yōu)于B組，且A組細(xì)胞與材料表面黏附更緊密。A組材料表面蛋白吸附量為（152.7 ± 6.3）μg/mL，明顯高于B、C組的（96.3 ± 3.9）、（96.1 ± 8.7） μg/ mL（P lt; 0.05）；各時間點A組細(xì)胞黏附數(shù)量均明顯高于B、C組（P lt; 0.05）。calcein-AM/EthD-1雙染觀察見A、C組材料表面細(xì)胞生長狀態(tài)優(yōu)于B組。 A、B組ALP表達(dá)分別為15.55 ± 0.29和13.75 ± 0.44，明顯高于C、D組的10.43 ± 0.79和10.73 ± 0.47（P lt; 0.05），且A組高于B組（P lt; 0.05）。 結(jié)論表面含硅MAO涂層鎂合金ZK60可促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖、黏附及分化，具有良好生物相容性，是一種較理想的鎂合金表面改性方法。
目的探討脫細(xì)胞跟腱的制備及其與人成纖維細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)效果，為組織工程韌帶的構(gòu)建提供一種支架材料。 方法取10只5月齡雄性新西蘭大白兔（體重4～5 kg）雙后肢跟腱，經(jīng)胰蛋白酶、Triton X-100、SDS脫細(xì)胞處理后，行大體、組織學(xué)及掃描電鏡觀察。將脫細(xì)胞跟腱與人成纖維細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)，于培養(yǎng)1、3、5、7、9 d行細(xì)胞相容性檢測，并于4周后取材行組織學(xué)、掃描電鏡觀察以及生物力學(xué)檢測，并與脫細(xì)胞前、后跟腱進(jìn)行比較。 結(jié)果跟腱經(jīng)脫細(xì)胞處理后腱膜完整，質(zhì)柔軟、韌性好，體積較處理前跟腱顯著增大；跟腱腱束間未見疏松結(jié)締組織及腱細(xì)胞，膠原纖維排列疏松，呈三維網(wǎng)狀分布，腱束間殘留較多孔隙；且細(xì)胞相容性良好。復(fù)合培養(yǎng)4周后，細(xì)胞遷移至纖維束間的孔隙內(nèi)，三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)消失。生物力學(xué)測試示，與脫細(xì)胞前跟腱組及細(xì)胞-支架復(fù)合組比較，脫細(xì)胞跟腱組拉伸強(qiáng)度及楊氏彈性模量均顯著降低（P lt; 0.05），細(xì)胞-支架復(fù)合組與脫細(xì)胞前跟腱組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；各組間斷裂伸長率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論兔脫細(xì)胞跟腱與人成纖維細(xì)胞生物相容性良好，可作為支架材料用于組織工程韌帶構(gòu)建。
目的 應(yīng)用靜電紡絲法制備一種蛛絲蛋白雙層小直徑血管支架，觀察其體外血液相容性。 方法將精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-重組蛛絲蛋白（pNSR16）、聚己內(nèi)酯（polycaprolactone，PCL）、明膠（gelatin，Gt）、肝素（heparin，Hep）共混，以pNSR16∶PCL∶Hep質(zhì)量比（W/W）為5∶85∶10的混合電紡溶液作為內(nèi)層紡絲液，pNSR16∶PCL∶Gt質(zhì)量比（W/W）為5∶85∶10的混合電紡溶液作為外層紡絲液，利用靜電紡絲技術(shù)制備雙層小直徑血管支架（實驗組）；以pNSR16∶PCL質(zhì)量比（W/W）為5∶85的混合電紡溶液作為內(nèi)層紡絲液制備支架作為對照組。掃描電鏡觀察實驗組支架結(jié)構(gòu)，比較兩組溶血率、復(fù)鈣化凝血時間、動態(tài)凝血時間以及體外血小板黏附、血小板激活實驗結(jié)果。 結(jié)果掃描電鏡觀察示實驗組支架雙層纖維不同，內(nèi)層纖維直徑分布較為均勻，孔隙相對較??；外層纖維直徑差異較大，孔隙較大。實驗組支架水接觸角、溶血率、復(fù)鈣化凝血時間和P-選擇素表達(dá)量分別為（35 ± 3）°、1.2% ± 0.1%、（340 ± 11）s和0.412 ± 0.027，對照組分別為（70 ± 4）°、1.9% ± 0.1%、（260 ± 16）s和0.678 ± 0.031，各指標(biāo)兩組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。實驗組凝血時間曲線向下傾斜緩慢，與對照組相比前30 min內(nèi)各時間點凝血指數(shù)均較高，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。體外血小板黏附實驗示實驗組支架表面幾乎無血小板黏附。 結(jié)論靜電紡絲技術(shù)可制備蛛絲蛋白雙層小直徑血管支架，且體外血液相容性好。